Практические работы

Размножение - процесс, обеспечивающий продолжение вида. Половое созревание, становление половых циклов, беременность, роды и послеродовой период сопровождаются комплексом морфофункциональных изменений, направленных на формирование плода и рождение полноценного потомства. Изучение этих периодов, а также функции половых клеток имеет важное значение в регулировании процессов воспроизводства и получении здорового молодняка животных.

Тема 1. Физиология размножения самцов

Вопросы для подготовки к занятию

1. Размножение, его биологическое значение. Половая и физиологическая зрелость самцов и самок.

2. Половые органы самца и их физиологическое значение.

3. Сперматогенез, продвижение спермиев в семенниках и созревание их, хранение в придатке семенника. Строение и физиологические свойства спермиев. Акросома и ее значение.

4. Придаточные половые железы, их функции. Сперма, ее состав, физико-химические свойства.

5. Половые рефлексы у самцов. Выведение спермиев и секретов придаточных половых желез - эякуляция. Нервная и гуморальная регуляция половой функции у самцов.

6. Перемещение спермы и переживаемость спермиев в органах размножения самок.

РАБОТА 1. СОСТАВ СПЕРМЫ, СТРОЕНИЕ И ДВИЖЕНИЕ СПЕРМИЕВ

Цель работы. Ознакомиться с микроскопической картиной спермы, оценить ее качество.

Объект исследования: свежеполученная сперма быка, барана, хряка, петуха, самца лягушки.

Оборудование и материалы: микроскоп, обогревательный столик, предметные и покровные стекла, три глазных пипетки, стеклянная палочка, 1%-ный р-р хлористого натрия, 1%-ный р-р лимоннокислого натрия, спирт этиловый, дистиллированная вода, 1%-ный р-р метиленовой сини, фильтровальная бумага.

Получение спермы. Сперму быка, барана, хряка получают на искусственную вагину. Для получения спермы петуха его фиксируют, получающий сперму поглаживает рукой петуха 4-5 раз в области поясницы, от чего петух расправляет хвост; затем руку переносят на килевую часть в области клоаки и делают три-четыре резких поглаживания; мускулатура клоаки начинает сокращаться. Указательным и большим пальцами правой руки раскрывают клоаку и с верхней ее части собирают в центрифужную пробирку 3-4 капли спермы. Для получения спермы самца лягушки, взрослым самцам вводят в спинной лимфатический мешок 3 мл СЖК или ХГ, Содержимое клоаки берут глазной пипеткой через 4 часа после инъекции.

Ход работы.

Движение спермиев. Включить обогревательный столик (необходима температура 38-40°С). Каплю свежей спермы наносят на подогретое предметное стекло и накрывают покровным стеклом (под стеклом не должно быть пузырьков воздуха). Препарат помещают на столик микроскопа. В затемненном поле зрения при среднем увеличении оценивают качество спермы по активности спермиев и определяют виды их движения (прямолинейно-поступательное, колебательное, манежное или круговое) или отсутствие подвижности.

Густота спермы. Определение густоты спермы производится в поле зрения микроскопа. Если все поле заполнено спермиями и между ними нет промежутков, то сперма густая (больше 1 млрд. спермиев в 1 мл); при средней густоте (0,4-1,0 млрд. в 1 мл) видны промежутки между спермиями; а в редкой сперме (меньше 0,4 млрд. в 1 мл) между спермиями есть промежутки, превышающие их длину.

Строение спермиев.

1. На предметное стекло с помощью стеклянной палочки наносят каплю спермы и покрывают покровным стеклом. Каплю спермы быка или барана Разбавляют 1 каплей 1%-ного р-ра хлористого (или лимоннокислого) натрия. Капли спермы просматривают под микроскопом при большом увеличении (не менее 600 раз). Обращают внимание на наличие у спермия головки, шейки, тела и хвоста.

2. Каплю разбавленной (1%-ным р-ром натрия хлорида) спермы, наносят на предметное стекло и делают тонкий мазок шлифованным стеклом. Препарат высушивают на воздухе, затем фиксируют этиловым спиртом (1-2 мин) и смывают его дистиллированной водой. На мазок накладывают полоску фильтровальной бумаги и наливают на нее 1%-ный р-р метиленовой сини (или фуксина). Затем (через 8-10 мин) фильтровальную бумагу удаляют, краску смывают, а мазок высушивают и рассматривают спермии под микроскопом.

РАБОТА 2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ТЕМПЕРАТУРЫ, ОСМОТИЧЕСКОГО ДАВЛЕНИЯ И КИСЛОТНОСТИ НА СПЕРМИИ

Цель работы. Исследовать факторы, влияющие на движение и жизнеспособность спермиев.

Объект исследования. Сперма животных.

Оборудование и материалы: микроскоп, подогревательный столик, подогретые предметные и покровные стекла, стеклянная палочка, пипетки глазные, чашка со льдом, термометр, вода при температуре 55°С, 1 и 3%-ные р-ры натрия хлорида, 5%-ный р-р йода, дистиллированная вода, вата, марлевые салфетки.

Ход работы.

1. При определении влияния температуры, на предметное стекло наносят каплю спермы и накрывают ее покровным стеклом (раздавленная капля). Затем под микроскопом определяют двигательную активность спермиев. После этого препарат помещают на обогревательный столик с температурой 48-50°С и наблюдают за изменением (по мере прогревания) двигательной активности половых клеток. Следующую каплю спермы охлаждают на предметном стекле, поместив его на лед (на 2 мин). Поверхность стекла, которая соприкасалась со льдом, вытирают марлей, препарат ставят на столик микроскопа и снова определяют активность спермиев.

2. Влияние осмотического давления на сперму определяют в раздавленных каплях. Для этого на одном предметном стекле готовят 4 раздавленные капли секрета половых желез. В 1-й капле наблюдают, за подвижностью спермиев при обычных условиях, ко 2-й под покровное стекло вносят 3 капли 3%-ного р-ра натрия хлорида, к 3-й добавляют 3 капли 1%-ного р-ра натрия хлорида, к 4-й под покровное стекло вносят 3 капли дистиллированной воды. Во всех препаратах под микроскопом наблюдают за изменением морфологии и двигательной активности спермиев. Результаты наблюдений анализируют и дают им объяснение.

3. При определения влияния кислотности среды на спермии готовят препараты раздавленной капли и рассматривают их под микроскопом, обращая внимание на исходную активность половых клеток. Затем под покровное стекло 1-го препарата вносят 1 каплю 2%-ного р-ра натрия гидрокарбоната, во 2-й препарат к сперме добавляют каплю 0,5%-ного р-ра соляной кислоты. В 3-й препарат на предметном стекле вокруг спермы наносят 5%-ный спиртовой р-р йода и, не накрывая покровным стеклом, рассматривают его под микроскопом. Затем во всех препаратах наблюдают за изменениями подвижности и структуры спермиев.

РАБОТА 3. ПОДСЧЕТ КОЛИЧЕСТВА СПЕРМИЕВ

Цель работы. Ознакомиться с методикой подсчета количества спермиев.

Объект исследования. Сперма быка, барана, хряка.

Материалы и оборудование. Микроскоп, счетная камера Горяева, смеситель для эритроцитов, покровные стекла, 3%-ный р-р натрия хлорида, вата, марля.

Ход работы. К счетной камере притирают покровное стекло. В смеситель для эритроцитов набирают до метки 0,5 сперму и до метки 101 разбавляют ее 3%-ным р-ром натрия хлорида. Содержимое смешивают, первые 3 капли удаляют из смесителя на ватку, а следующие вносят под покровное стекло. Камеру ставят на столик микроскопа и под большим увеличением считают спермии в пяти больших квадратах (80 малых), как и при подсчете эритроцитов. Количество спермиев определяют по формуле: Х = (Н^.Р^.4000^.1000)/80, где X - количество спермиев в 1 мл (в млрд.), Н - количество спермиев в 80 квадратах, Р - разведение, 4000 - коэффициент перевода в мм³, 1000 - коэффициент перевода в мл, 80 - число квадратиков.

РАБОТА 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ рН СПЕРМЫ

Цель работы. Ознакомиться с электрометрическим методом исследования реакции спермы.

Объект исследования, материалы и оборудование. Сперма, рН-метр-150МА, пипетки, стаканы, дистиллированная вода, вата, марля.