Лабораторные работы
1.Определение триацилглицеридов в сыворотке крови.
Принцип метода. Триглицериды гидролизуются липопротеидлипазой до глицерина и жирных кислот. Глицерин при участии глицеролкиназы превращается в 3-фосфоглицерин. Под действием глицерол-3-фосфатоксидазы 3-фосфоглицерин окисляется кислородом воздуха до фосфодиоксиацетона. Образовавшаяся при этом перекись водорода, взаимодействует с 4-аминоантипирином при участии пероксидазы в присутствии 4-хлорфенола. По интенсивности окраски образующегося хинонимина судят о количестве триацилглицеридов в исследуемом образце.
Ход работы. К 2 мл раствора, содержащего смесь ферментов, добавить 0,02 мл исследуемой сыворотки крови. Перемешать, инкубировать в течение 30 минут при комнатной температуре. Затем добавить 1 мл раствор хромогена, содержащего 4-аминоантипирин и 4-хлорфенол. Развивается красная окраска, интенсивность которой измеряется на ФЭКе при 500 нм в кювете 1 см. Величина оптической плотности (А) исследуемого раствора используется при расчете.
Расчет.
Астандарт = 0,2; величина представляет оптическую плотность стандартного раствора с концентрацией триацилглицеридов, равной 2,28 ммоль/л.
В норме в сыворотке крови содержится 2,82-5,65 ммоль/л триацилглицеринов, гипертриглицеридемия: выше 5,65 ммоль/л.
Клиническое значение. Увеличение концентрации триацилглицеридов (ТАГ) наблюдается при врожденной (наследственной) гиперлипопротеидемии, при ожирении, вирусном гепатите, алкоголизме, алкогольном циррозе, остром и хроническом панкреатите, хронической ишемической болезни сердца (ИБС), гипотиреозе, сахарном диабете.
Снижение содержания ТАГ в крови наблюдается при хронических обструктивных заболеваниях легких, гипертиреозе, гиперпаратиреозе, недостаточности питания.
Схема протокола
Определяемый показатель |
Принцип метода |
Норма содержания |
Формула расчета |
Результат |
1.Определение ТАГ в сыворотке крови
|
Триацилглицериды гидролизуются липопротеидлипазой до глицерина и жирных кислот. Глицерин при участии глицеролкиназы превращается в 3-фосфо-глицерин. Под действием глицерол-3-фосфатоксидазы 3-фосфоглицерин окисляется кислородом воздуха до фосфодиоксиацетона. Образовавшаяся при этом перекись водорода, взаимодействует с 4-аминоантипирином при участии пероксидазы в присутствии 4-хлорфенола. По интенсивности окраски образующегося хинонимина судят о количестве триацилглицеридов в исследуемом образце.
|
2,8-5,6 ммоль/л |
(А оп/ А ст)Ч2,28 ммоль/л А оп=0,28 Аст=0,2 |
Увеличение концентрации триацилглицеридов (гиперТАГемия) наблюдается при врожденной (наследственной ) гиперлипопротеидемии, при ожирении, при вирусном гепатите, алкоголизме, алкогольном циррозе, остром и хроническом панкреатите, хронической ишемической болезни сердца (ИБС), гипотиреозе, сахарном диабете. Снижение содержания ТАГ в крови наблюдается при хронических обструктивных заболеваниях легких, гипертиреозе, гиперпаратиреозе, недостаточности питания.
|