4.2.3. Анализ микотоксинов т-2, ф-2 и охратоксина а в фуражном зерне, продуктах его переработки и всех видах комбикормов

Определение токсина Т-2

Токсин Т-2 является одним из наиболее опасных представителей группы микотоксинов, действие которых характеризуется поражением кровеносной и иммунной системы, анемией, поражением функций желудочно-кишечного тракта.

Т-2 в форме грибов-продуцентов способен поражать зерно и зернопродук-ты. В связи с этим ПДК на содержание токсина Т-2 в пищевых продуктах и сырье составляет 0,1 мг/кг.

Токсин Т-2 (формула С₂₄Н₃₄О₉) – белое кристаллическое вещество с моле-кулярной массой 466; t_ПЛ =151–152 ºС; плохо растворяется в воде и гексане, но хорошо растворяется в бензоле, ацетоне, этилацетате, спиртах..

Для обнаружения токсина Т-2 методом ТСХ используется его свойство флуоресцировать при λ = 365 нм после обработки специальными реагентами Н₂SO₄ и нагревании до 100–105ºС.

Качественное определения токсина Т-2 требует проведения следующих операций:

– извлечение токсина ацетоном;

– очистка экстракта от липидов и растительных пигментов с последующей доочисткой на хроматографической колонке;

– двукратное хроматографирование на пластине в присутствии стандарт-ного раствора токсина.

Исследование проводят следующим образом.

1. Пробу зерна ( 100 г) размалывают на электромельнице до дисперс-ности частиц не более 1 мм (проводят разделение через сито с отверстиями указанного диаметра).

2. 25 г анализируемого продукта выдерживают 18–20 ч при комнатной температуре в присутствии ацетона, добавляют гексан и воду и экстрагируют хлороформом.

3. Упаривают экстракт на кипящей водяной бане (до объема 2–3 см³) с целью удаления паров хлороформа.

4. Наносят небольшую порциями (по 0,01 см³) с помощью микрошприца анализируемую пробу и несколько проб стандартов с различными известными концентрациями токсина Т-2 на расстоянии через 15 мм друг от друга и от нижнего края пластины, как это показано на рис. 4.9.

Одновременно на пластину наносят определенное количество (0,002 см³) стандартного спиртового раствора токсина Т-2.

5. Пластину опускают в хроматографическую камеру таким образом, что-бы стартовая линия находилась на 0,5 см выше уровня подвижного раство-рителя (система этилацетат – гексан (1:1)).

Рис. 4.9. Нанесение нескольких проб стандартов с различной концентрацией токсина Т-2 на стартовую линию

Когда фронт растворителя пройдет заданное расстояние (l = 14,5 см), хро-матограмму вынимают и сушат в сушильном шкафу при температуре t = 100ºС.

6. Проводят повторное хроматографирование в системе растворителей CCl₄ – этилацетат – CH₃COOH (17:3:1); условия сдвига фронта (l = 14,5 см) и последующей сушки (t = 100ºС) аналогичны.

При рассмотрении высушенной пластины в УФ лучах с λ = 365 нм токсин Т-2 обнаруживают в виде пятна с голубой флуоресценцией.

После повторного хроматографирования R_f = 0,20–0,23.

Результат на наличие токсина Т-2 токсина в пробе считается положи-тельным, когда на пластине наблюдается голубая флуоресценция, соответ-ствующая по положению флуоресценции пятну для стандартного раствора ток-сина Т-2.

Чувствительность метода 600 мкг/кг продукта или комбикорма.

Определение микотоксина Ф-2

Методика определения включает операции:

– экстракция токсина Ф-2 из пищевого продукта смесью ацетонитрила и раствора KCl;

– очистка и хроматографирование на пластине;

– измерение интенсивности флуоресценции по сравнению с таковой для стандартного раствора Ф-2.

Специфика заключается в том, что растворы наносят по особой схеме, а в качестве проявителя используют системы растворителей бензол – ацетон (на-правление I) и толуол – этилацетат – муравьиная кислота (направление II).

По характерному сине-голубому свечению пятен раствора Ф-2 в УФ свете при λ = 253 нм определяют наличие таких же пятен и свечения в анализи-руемом экстракте.

Рис. 4.10. Проведение анализа токсина Ф-2 на пластине в двух направлениях

Содержание микотоксина Ф-2 в пробе зерновых культур или комбикормов (мг/кг продукта) рассчитывают:

, (4.18)

где A – концентрация Ф – 2 в стандартном растворе, мкг/см³;

В – конечный объем экстракта, см³;

С и D – объемы экстракта и стандартного раствора Ф-2 с одинаковой интенсивностью свечения, см³;

12,5 – коэффициент учета массы пробы.

Определяют среднее значение из данных двух опытов до второго десятич-ного знака:

= . (4.19)

Чувствительность метода 50 мкг/кг продукта [3].