Практическая работа

З а д а н и е №1

Определить уровни иммуноглобулинов разных классов в сыворотке крови обследуемых А. и В. методом радиальной иммунодиффузии по Манчини. Оформить протокол в виде рисунка с обозначениями и графика. Сделать заключение.

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Три порции расплавленного 3%-ного агара смешивают в соотношении 1:1 соответственно с антиглобулиновыми сыворотками против IgM, IgG и IgА. Этими смесями покрывают три стеклянные пластины. В застывшем агаре каждой пластины делают лунки, в которые вносят по 0,2 мкл стандартной сыворотки с известным содержанием иммуноглобулинов трех классов (М, G и А): неразведенной, и в разведениях 1:2, 1:4, 1:6 и 1:8. В другие лунки каждой пластины вносят испытуемые сыворотки, взятые от обследуемых людей, в которых хотят определить содержание IgM, IgG и IgА. После суточного выдерживания во влажной камере при 4°С измеряют диаметры образовавшихся колец преципитации с разведениями стандартной сыворотки на каждой из трех пластин и строят калибровочные кривые, отражающие концентрацию IgM, IgG и IgА в этой сыворотке (d_зоны=f(СIg)). Затем измеряют диаметры колец с исследуемой сывороткой (на трех пластинах) и по калибровочным кривым определяют концентрацию IgM, IgG и IgА в сыворотках обследуемых.

Исходный уровень содержания иммуноглобулинов в стандартной сыворотке:

IgG – 8,41 мг/мл (133 МЕ/мл)

IgM – 1,12 мг/мл (109 МЕ/мл)

IgA – 1,55 мг/мл (104 МЕ/мл)

З а д а н и е №2

Используя готовые демонстрации познакомиться с методикой проведения HLA-типирования. Оформить протокол в виде рисунка. Ответить на вопросы:

1. Как получают сыворотки для HLA-типирования?

2. Как защитить содержимое лунок от высыхания в процессе постановки реакции?

3. Когда и с какой целью проводят HLA-типирование?

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Суспензию лимфоцитов смешивают с антисывороткой к определенному антигену (HLA-В8, HLA-B27 и т.д.), инкубируют 1 час при 25°С, добавляют комплемент и инкубируют вновь 2 ч при 37°С, а затем добавляют трипановый синий или эозин. В случае присутствия в лимфоцитах антигена, соответствующего антителам, содержащимся в сыворотке, антитела в присутствии комплемента повреждают мембрану лейкоцитов, краска проникает в их цитоплазму и они окрашиваются в синий или же красный цвет (если используется эозин).