Практическая работа

З а д а н и е №3

Определить титр комплемента в сыворотках морской свинки и человека по реакции иммунного гемолиза. Учесть полученные результаты и данные занести в таблицу. Оформить протокол. Сделать заключение.

Сыворотка человека, мл	0,5	0,4	0,3	0,2	0,1	К
Физ. раствор, мл	0,5	0,6	0,7	08	0,9	?
Гемолитическая система, мл	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	?
Инкубация 45 мин, 37°С
Результат
Сыворотка морской свинки, мл	0,5	0,4	0,3	0,2	0,1	?
Физ. раствор, мл	0,5	0,6	0,7	0,8	0,9	?
Гемолитическая система, мл	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	?
Инкубация 45 мин, 37°С
Результат

«+» – гемолиз (лаковая кровь), «–» – отсутствие гемолиза

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Сыворотки морской свинки и человека последовательно разводят физиологическим раствором (как указано в таблице). К каждому разведению сыворотки добавляют 3%-ную взвесь эритроцитов барана и инактивированную гемолитическую сыворотку (гемолитическая система). Пробирки ставят в термостат на 45 мин при 37°С. Учет производят по наличию полного гемолиза. Сыворотка человека используется неразведенная, а сыворотка морской свинки предварительно разводится в 10 раз.

Титром комплемента называется его минимальное количество, вызывающее полный гемолиз.

занятие №5

Антитела. Главный комплекс гистосовместимости

Методы получения антител. Определение концентрации иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии. НLA-типирование

Вопросы для подготовки

1. Общий план строения иммуноглобулина. Константные и вариабельные домены иммуноглобулинов. Изотипы иммуноглобулинов. Понятие об аллотипах и идиотипах.

2. Строение вариабельных доменов иммуноглобулинов. Гипервариабельные участки. Структура антигенсвязывающих участков.

3. Физические силы, участвующие во взаимодействии антигена с антителом. Аффинность взаимодействия антигена и антитела.

4. Иммуноглобулины классов (G, M, А, D и E), особенности строения и биологические функции.

5. Секреторный IgA. Синтез и роль в защите слизистых оболочек.

6. Эффекторные функции антител. Нейтрализация, опсонизация, комплементзависимый цитолиз. Значение изотипов антител.

7. Гибридомы и моноклональные антитела. Области применения.

8. Кинетика синтеза антител. Первичный и вторичный иммунный ответ. Механизм переключения изотипов антител при иммунном ответе.

9. Методы количественного определения иммуноглобулинов (радиальная иммунодиффузия по Манчини).

10. Главный комплекс гистосовместимости (МНС). Генетическая структура локуса. Гены МНС I, II и III классов.

11.Строение молекул МНС I и II классов. Антигенсвязывающая щель и ее роль в иммунном ответе.

12. Методы исследования и типирования HLA (ПЦР, ДНК-гибридизация).

13. HLA и заболевания человека, механизмы.

14. Схематично нарисовать в тетради структуру молекулы IgG, подписать все фрагменты, цепи и домены.

15. Заполнить таблицу «Классы иммуноглобулинов»:

Класс Ig	Строение	Свойства
IgМ
IgG
IgA
IgE
IgD

16. Заполнить таблицу «Антиген-представляющие молекулы»:

Свойства молекул	МНС I	МНС II	Другие
Клеточное распределение
Локализация в клетке
Тип эпитопа
Место и условия связывания с эпитопом