Практическая работа

З а д а н и е №1

Определить бактерицидную активность собственной кожи по Клемпарской (индекс бактерицидности). Оформить протокол в виде рисунков. Сделать заключение.

0	10

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

На поверхность кожи предплечья (ладонная сторона) наносят пипеткой 1 каплю культуры E. coli. Распределяют суспензию стерильным стеклянным шпателем. Делают первый отпечаток с кожи пластинкой со средой Эндо (0 мин экспозиции). Через 10 мин экспозиции контакта микробов и кожи делают второй отпечаток (рядом с первым, но не с того же участка). Чашки с предметными стеклами-отпечатками помещают в термостат на 24 часа. Подсчитывают количество колоний на пластинках со средой Эндо. На основании полученных результатов рассчитывают индексы бактерицидности (ИБ) по формуле:

ИБ = (К_о – К₂₀)/К_о 100%,

где К_о – количество колоний сразу после контаминации кожи;

К₁₀ – количество колоний через 10 мин после контаминации кожи.

В норме ИБ > 95%.

З а д а н и е №2

Определить активность (титр) лизоцима в собственной слюне. Учесть полученные результаты и данные занести в таблицу. Оформить протокол. Сделать заключение.

Ответить на вопросы:

1. Почему в качестве объекта использован Micrococcus luteus?

2. Зачем поставлен контроль культуры?

3. Что такое титр лизоцима в слюне?

Разведения слюны/ Ингредиенты	1 : 20	1 :  40	1 : 60	1 : 80	1 : 160	1 : 320	1 : 640	Контроль
С люна 1 : 10, мл	0 ,5	0 ,5	0 ,5	0 ,5	0 ,5	0 ,5	0 ,5	–
Физ.раствор, мл	1,5	1,5	1,5	1,5	1,5	1,5	1,5	2,0
2-х млрд. взвесь M. luteus, капли	3	3	3	3	3	3	3	3
Инкубация 20 мин, 37°С
Результат

«

в дез. раствор

+» – лизис культуры, «–» – отсутствие лизиса

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

В пробирках готовят разведения слюны, начиная от 1:10 и заканчивая 1:640. В контрольную пробирку вместо слюны добавляют физиологический раствор. К каждому разведению добавляют 2-х млрд. взвесь микрококка (M. luteus) по 5 капель. Ставят в термостат на 20 мин. Определяют титр лизоцима по наличию просветления в среде (полный лизис микрококка). В норме титр лизоцима > 1:320.

занятие №4

Цитокины

Изучение активности гуморальных факторов врожденного иммунитета (продолжение)

Вопросы для подготовки

1. Общее представление о цитокинах. Их основные группы. Цитокиновая сеть и принципы ее функционирования.

2. Провоспалительные цитокины (ИЛ-1, ФНО-α, ИЛ-6 и др.). Структура, клетки-продуценты, мишени, роль в иммунитете.

3. Противовоспалительные цитокины. Структура, клетки-продуценты, мишени, роль в иммунитете.

4. Интерфероны, классификация, структура, клетки-продуценты, мишени, роль в иммунитете.

5. Цитокиновые рецепторы. Сигнальные пути при действии на клетку цитокинов.

6. Апоптоз, его виды. Механизмы запуска апоптоза, роль цитокинов семейства ФНО и белков Вcl-2.

7. Каспазы, особенности строения и роль в апоптозе.

8. Использование цитокинов в клинике. Препараты интреферонов I типа и интерфероногены. Примеры.

9. Заполнить таблицу «Функции цитокинов»:

Распределить следующие цитокины по функциональному назначению и роли в иммунном ответе: IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, CXCL-8, TNF-α, β, IFN-α, IFN-γ, TGF-β.

Активность цитокинов	Представители
Провоспалительные
Противовоспалительные
Активация фагоцитов
Подавление активности фагоцитов
Активация В-лимфоцитов
Активация Т-лимфоцитов
Подавление иммунного ответа