Практическая работа

З а д а н и е №1

Определить фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови (фагоцитарный показатель – ФП и фагоцитарное число – ФЧ). Оформить протокол в виде рисунка. Сделать заключение.

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

В центрифужную пробирку с 0,25 мл 2 %-ного цитрата натрия вносят 0,5 мл исследуемой цельной капиллярной или венозной крови, взятой натощак, добавляют 0,25 мл 2 млрд взвеси суточной микробной культуры (S. aureus 209Р или Е. coli Гусев), предварительно подогретой до 37 ºС. Лейкоцитарно-микробную смесь инкубируют при 37°С в течение 40 мин при постоянном перемешивании. Из полученной взвеси готовят 2 тонких мазка, высушивают при комнатной температуре, фиксируют в смеси Никифорова 5-10 мин и окрашивают по Романовскому-Гимзе.

Готовые окрашенные мазки микроскопируют с иммерсией. В разных полях зрения находят не менее 25 лейкоцитов и считают количество микробов, поглощенное каждым лейкоцитом. Для характеристики фагоцитарной активности крови подсчитывают ФП и ФЧ.

ФП – это процент активно фагоцитирующих лейкоцитов в расчете на 100 лейкоцитов.

ФЧ – среднее количество микробов, поглощенных одним фагоцитом (для этого общее число поглощенных микробов делят на количество подсчитанных клеток – 25).

Для лейкоцитов крови здоровых людей ФП колеблется от 40 до 80%, ФЧ – от 4 до 10.

З а д а н и е №2

Изучить незавершенный фагоцитоз гонококка. Микроскопировать с иммерсией и объективом 90 фиксированный препарат, приготовленный из гнойного отделяемого больного гонореей, окраска по Граму. Оформить протокол в виде рисунка с обозначениями. Ответить на вопросы:

1. Какой метод исследования применен?

2. В чем причина незавершенного фагоцитоза гонококков?

занятие №3

Система комплемента. Антимикробные пептиды и белки

Изучение активности гуморальных факторов врожденного иммунитета

Вопросы для подготовки

1. Бактерицидные пептиды (дефензины, кателицидины и т.д.) и их роль в естественном иммунитете. Механизмы действия на бактериальную клетку.

2. Система комплемента. Особенности альтернативного, лектинового и классического путей комплемента.

3. Альтернативный путь комплемента.

4. Классический путь комплемента.

5. Эффекторные факторы комплемента: относительная роль опсонизации и лизиса. Малые фрагменты комплемента.

6. Белки острой фазы. Пентраксины. Роль во врожденном иммунитете.

7. Лактоферрин и лизоцим. Роль во врожденном иммунитете.

8. Решить задачу:

Обследуемый А., 18 лет, с 7 лет находящийся на диспансерном учете в группе ЧДБ (часто длительно болеющие), был направлен в клинико-иммунологическую лабораторию для оценки состояния факторов естественной резистентности (обследование проведено в весеннее время). Сравнить полученные результаты лабораторного исследования сыворотки крови и сделать заключение о состоянии естественной резистентности обследуемого (с объяснением).

ФИО обследуемого	Бактерицидная активность сыворотки (БАС)			Лизоцим, мкг/мл	Комплемент, мг/мл
	Кол-во колоний в контрольной чашке	Кол-во колоний в опытной чашке	БАС, %
Нормативные значения (пол мужской, 18 лет, весна)*	–	–	80,6	6,8	1,23
Обследуемый А.	10	3	?	5,0	0,81

* – нормативные значения показателей естественного иммунитета для населения ХМАО-Югры