- •А.А.Чиркин
- •Министерство образования Республики Беларусь
- •Основы биотехнологии
- •Теоретическое содержание курса
- •Практикум
- •Работа 3. Разделение аминокислот методом тонкослойной ионообменной хроматографии (уирс).
- •Работа 4. Определение концентрации общего белка в сыворотке (плазме) крови биуретовым методом (набор нтк «Анализ-х») - уирс
- •Работа 5. Колоночная гель-фильтрация.
- •Работа 6. Определение термолабильности амилазы слюны.
- •Вариант 2
- •Работа 7. Определение оптимума рН для действия амилазы.
- •Работа 8. Влияние активаторов и ингибиторов на активность амилазы.
- •Работа 9. Специфичность действия ферментов
- •Работа 10. Исследование свойств тирозиназы из картофеля.
- •Работа 11. Ингибирующее действие хлорид-ионов на дегидрогеназный комплекс картофеля.
- •Работа 12. Определение активности амилазы крови с помощью метода «сухой химии» в сочетании с рефлометрией.
- •Работа 13. Определение активности щелочной и кислой фосфатаз в сыворотке крови по гидролизу -глицерофосфата (метод Боданского), уирс.
- •Работа 14. Качественные реакции на витамин а.
- •Работа 15. Количественное определение витамина а в рыбьем жире.
- •Работа 16. Качественные реакции на витамин д.
- •Работа 17. Обнаружение эргостерола в дрожжах.
- •Работа 18. Качественная реакция на викасол.
- •Работа 107. Качественная реакция на витамин е с азотной кислотой.
- •Работа 19. Количественное определение витамина е.
- •Работа 20. Количественное определение витамина с в хвое, шиповнике, картофеле, луке, молоке, капусте по методу Тильманса.
- •Работа 21. Разделение модельной смеси водорастворимых витаминов методом тонкослойной хроматографии.
- •Работа 22. Выделение фолиевой кислоты из дрожжей и ее обнаружение.
- •Вопросы итогового контроля (зачет)
Вариант 2
Реагенты |
Опыт 1 |
Опыт 2 |
Опыт 3 |
Опыт 4 |
Крахмал, 1%, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
Слюна, 1:10, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
Температура, С |
0 |
20 |
40 |
100 |
Инкубировать 10 мин и затем добавить по 1-2 капли J2 в KJ |
||||
Зарегистрировать окрашивание |
||||
Сделать выводы о влиянии температуры на скорость ферментативной реакции.
Работа 7. Определение оптимума рН для действия амилазы.
Реагенты |
Значение рН |
|||||||
6,0 |
6,4 |
6,8 |
7,2 |
7,6 |
8,0 |
|||
Буферный раствор, мл |
2,0 |
2,0 |
2,0 |
2,0 |
2,0 |
2,0 |
||
Крахмал 0,5%, мл |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
||
Слюна, 1:10, мл |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
||
Термостат 38С 10 мин |
||||||||
Раствор I2 в KI, кап |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
||
Окраска |
|
|
|
|
|
|
||
Вывод: |
|
|
|
|
|
|
||
Работа 8. Влияние активаторов и ингибиторов на активность амилазы.
Реагенты |
Контроль |
Опыт 1 |
Опыт 2 |
Слюна 1:10, мл |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
Н2О, кап. |
2 |
- |
- |
NaCl, 1%, кап. |
- |
2 |
- |
СuSO4, 1%, кап. |
- |
- |
2 |
Крахмал, 1%, кап. |
5 |
5 |
5 |
|
Экспозиция |
5 минут |
|
Раствор I2 в KI, кап. |
1 |
1 |
1 |
Результат, окраска |
|
|
|
Вывод: |
|
|
|
Работа 9. Специфичность действия ферментов
Приготовить разведение слюны в 5 раз (1 мл слюны + 4 мл воды)
Реагенты |
Опыт 1 |
Опыт 2 |
Опыт 3 |
Опыт 4 |
Слюна (амилаза), кап |
5 |
5 |
- |
- |
Фильтрат дрожжей (сахараза), кап |
- |
- |
5 |
5 |
Крахмал 1%, кап |
10 |
- |
10 |
- |
Сахароза |
- |
10 |
- |
10 |
Термостат, 37 С, 10 мин |
||||
Реакция Фелинга (по 5 кап раствора из каждой пробирки + 3 кап реактива Фелинга, кипятить 1 мин) окраска |
|
|
|
|
Вывод |
|
|||
Работа 10. Исследование свойств тирозиназы из картофеля.
Тирозиназа - фермент, окисляющий аминокислоту тирозин в темный пигмент за счет кислорода. Этот фермент может окислить и гваяковую смолу. При окислении гваяковой смолы образуется озонид синего цвета.
Реактивы, исследуемый материал
Гваяковая смола. 2. Срезы сырого картофеля. 3. Срезы вареного картофеля
|
Срез сырого картофеля |
Срез вареного картофеля |
Гваяковая настойка, кап. |
1 |
1 |
Результат |
|
|
Вывод |
|
|