Работа 14. Качественные реакции на витамин а.

Витамин А при взаимодействии с серной кислотой окрашивается в красно-фиолетовый или красно-бурый цвет, при взаимодействии с хлорным железом - в желто-зеленый цвет.

Реактивы, исследуемый материал

1. Масляный раствор ретинола ацетата, 34,4 г/л. 2. Серная кислота концентрированная. 3. Хлороформ. 4. Треххлористая сурьма, 23% хлороформный раствор.

Ход работы

Реакция на витамин А с концентрированной серной кислотой. В сухую пробирку внести 1 каплю раствора ретинола ацетата и 5 капель хлороформа, перемешать и добавить 1 каплю концентрированной серной кислоты. Отметить результат реакции.

Реакция на витамин А с хлорным железом. В сухую пробирку внести 1 каплю ретинола ацетата и 5 капель хлороформа. Перемешать, добавить 3 капли хлорида железа. Отметить результат реакции.

Реакция на витамин А с треххлористой сурьмой. В сухую пробирку вносят 1 каплю раствора ретинола ацетата и добавляют 2-3 капли 23% хлороформного раствора треххлористой сурьмы. При смешивании содержимое пробирки окрашивается в синий цвет.

Работа 15. Количественное определение витамина а в рыбьем жире.

Принцип метода. Метод основан на реакции витамина А с треххлористой сурьмой в присутствии уксусного ангидрида, в результате чего развивается синяя окраска. Интенсивность окраски, прямо пропорциональную количеству витамина А в пробе, определяют фотометрически.

Реактивы и исследуемый материал

1. Хлороформ. 2. Уксусный ангидрид. 3. Треххлористая сурьма, 23% раствор.

Ход работы

Навеску рыбьего жира 2,5 г растворяют в хлороформе в мерной колбе на 25 мл. В кювету КФК помещают 0,4 мл хлороформного раствора рыбьего жира, прибавляют 1-2 капли уксусного ангидрида (для предотвращения появления мути) и 4 мл раствора треххлористой сурьмы. Через 10 с фотометрируют при 620 нм против раствора треххлористой сурьмы. Концентрацию витамина А в исследуемом растворе находят по калибровочному графику, на котором каждому значению найденной оптической плотности соответствует определенное содержание витамина А в 0,4 мл раствора. Построение калибровочного графика производится с помощью стандартизованного концентрата витамина А в рыбьем жире. Если содержание витамина А в 1 г концентрата 500 МЕ, то для приготовления первоначального раствора берут навеску 10 г и растворяют в хлороформе в мерной колбе на 50 мл. В 1 мл этого раствора содержится 100 МЕ витамина А. Из этого раствора готовят еще 5-6 разведений с таким расчетом, чтобы в 0,4 мл раствора содержалось от 20 до 70 МЕ витамина А. Это количество (0,4 мл) берут для определения оптической плотности раствора. Полученные данные оптической плотности используют для построения калибровочного графика, где на оси ординат наносят найденное значение оптической плотности для каждого разведения раствора, а на оси абсцисс – содержание витамина А в тех же растворах. Содержание витамина А в 1 г рыбьего жира вычисляют по формуле: Х=А25/0,42,5, где Х – содержание витамина А в 1 г рыбьего жира в МЕ, 0,4 – количество раствора в мл, взятое для определения, 25 – общий объем исследуемого раствора в мл, 2,5 – навеска рыбьего жира в г.

Работа 16. Качественные реакции на витамин д.

Витамин Д при взаимодействии с анилиновым реактивом при нагревании окрашивается в красный цвет, при взаимодействии с раствором брома в хлороформе приобретает зеленовато-голубую окраску.

Реактивы, исследуемый материал

1. Анилиновый реактив (15 частей и 1 часть концентрированной соляной кислоты). 2. Хлороформ. 3. Раствор брома в обезвоженном хлороформе в соотношении 1:60. 4. Масляный раствор эргокальциферола, 1,25 г/л.

Ход работы

Реакция на витамин Д с анилином. В сухую пробирку внести 2 капли масляного раствора эргокальциферола, 10 капель хлороформа и 1-2 капли анилинового реактива, осторожно нагреть при постоянном помешивании. Отметить результат реакции.

Реакция на витамин Д с бромхлороформом. В сухую пробирку внести 2-3 капли раствора эргокальциферола и 2-4 капли раствора брома в хлороформе. Отметить полученный результат.