Высокая чувствительность и специфичность

    ПЦР - метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций "золотым стандартом", проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.     ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоемким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций и заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП).     Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью.     Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно.     Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.     Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т.д.). в урологической и гинекологической практике - для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллеза, микоплазменной инфекции, ВПЧ - вирусов папилломы человека; в пульмонологии - для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулеза; в гастроэнтерологии - для выявления геликобактериоза ; в клинике инфекционных заболеваний - в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллеза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии - для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.

Пробоподготовка. Транспортировка в лабораторию

    Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести пробоподготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для забора крови в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой - позволяют произвести забор материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

Метод ПЦР (метод полимеразной цепной реакции, PCR, polymerase chain reaction) является наиболее популярным методом анализа ДНК на сегодняшний день.

Наша компания предлагает полный перечень оборудования для ПЦР. Мы обладаем значительным опытом оснащения ПЦР-лабораторий "под ключ": мы поможем не только подбрать оборудование и реагенты под ваши конкретные задачи, но и проведем бесплатное обучение методу ПЦР, поможем с подготовкой помещений для будущей лаборатории, предоставим методические указания и нормативные акты.

Метод ПЦР позволяет специфично увеличивать (амплифицировать) количество ДНК исследуемого образца в миллиарды раз. Идея ПЦР основана на том, что конкретный ген можно размножить в пробирке, многократно увеличивая количество его копий. Механизм ПЦР заключается в синтезе in vitro коротких нуклеотидных последовательностей для последующего анализа. Для проведения ПЦР нужны пара олигонуклеотидов (праймеров), комплементарных исследуемому фрагменту, нуклеотидтрифосфаты (dNTP) и фермент ДНК-полимераза. В определенных условиях праймеры способны распознавать комплементарные последовательности в денатурированной ДНК, связываться с ними и служить затравкой для ферментативного синтеза копий участка изучаемого гена. Каждый цикл синтеза удваивает число копий фрагмента-мишени, т.е. количество продукта (амплификата) в процессе ПЦР нарастает в геометрической прогрессии. Для детекции методом гель-электрофореза продукта амплификации необходмо 10¹¹ - 10¹² молекул. 25-35 циклов реакции дают достаточно амплификата для дальнейшего изучения даже из единичного фрагмента ДНК. В течение нескольких часов с помощью ПЦР из одного фрагмента молекулы ДНК можно получить более 50 миллиардов идентичных молекул. Таким образом, можно изучить генетический материал, присутствующий в исследуемом образце в минимальных количествах (напрмер, однокопийный ген).

Метод ПЦР теоретически позволяет обнаружить даже 1 копию ДНК в образце, не имея, таким образом, предела чувствительности. Еще одно преимущество ПЦР заключается в том, что для нее характерна не только абсолютная чувствительность, но и абсолютная специфичность. ПЦР не дает ложноположительных результатов, при условии, что метод выполняется правильно. Не менее важным достоинством ПЦР является простота исполнения.

ПЦР-метод является не заменой традиционных морфологических, биохимических или иммунологических методик, но их существенным и необходимым дополнением. Опыт организации и работы ПЦР-лабораторий в ряде экспертных и санитарно-эпидемиологических учреждений показывает, что, несмотря на первоначальные затраты и накладные расходы, медико-экономический эффект настолько значителен, что позволяет проводить научно-методическую и просветительскую работу, значительно повысив уровень санитарно-эпидемиологической безопасности на территории России.

В настоящее время в практическое здравоохранение внедряется новая технология ПЦР — ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR). Ее принципиальной особенностью является мониторинг и количественный анализ накопления продуктов ПЦР, а также автоматическая регистрация и интерпретация полученных результатов. ПЦР в реальном времени не требует стадии электрофореза, что позволяет снизить требования, предъявляемые к ПЦР лаборатории.