Показатели клеточного иммунитета периферической крови новорожденных (субпопуляции лимфоидных популяций)

(Торубарова Н.А. и соавт., 1993 год)

Показатели (маркеры лимфоидных популяций)	Средние значения, %
	Доношенные дети	Недоношенные дети
CD 3	44,2	36,0
CD 4	29,9	27,0
CD 8	14,8	12,0
CD 1	0,88	2,4
CD 38	0	5,0
CD 2	38,4	38,0
D (slg +)	12,7	12,3
CD10	0	3,1

Приложение 3

Количественные соотношения лимфоцитов крови у новорожденных первых 10 дней жизни (M ± m)

( по Афониной Л.Г. и Михайловой З.М., 1976 год).

Возраст, сутки	Т-лимфоциты
	Е-РОК, %	Абс. число	Бластные клетки, %	Абс. число
1-е	50,5 ± 1,9	2763 ± 220	55,07 ± 1.58	3007 ± 260
3-5-е	51, 25 ± 2,8	2450 ± 250	67,5 ± 2.29	3227 ± 440
7-10е

Возраст, сутки	В-лимфоциты		О-лимфоциты
	%	Абс. число	%	Абс. число
1-е	35,2 ± 2,300	19222 ± 280	14.3 ± 2.9	781 ± 22.0
3-5-е	27,8 ± 2,2	1325 ± 210	21, 0 ± 4,1	1004 ± 29,0
7-10е	29,2 ± 2,4	1650 ± 310	16, 9 ± 3.4	914 ± 30. 0

Приложение 4

Метод полимеразной цепной реакции (пцр).

Этот метод основан на выделении, многократном размножении и детекции ДНК. Метод изобретен в 1983 году Кэрри Мюллис, за что автор был удостоен Нобелевской премии.

Материал для исследования- ткань или кровь, содержащий ДНК (РНК) возбудителя.

ПЦР – это многократное увеличение числа копий специфического участка ДНК путем комплементарного достраивания ДНК матрицы, катализируемое ферментом ДНК-полимеразой.

Методика проведения ПЦР анализа включает три этапа:

1. выделение ДНК (РНК) из клинического образца;

2. увеличение числа копий специфических фрагментов ДНК;

3. детекция полученных копий фрагментов ДНК.

Для выделения ДНК (РНК) клиническая проба подвергается специальной обработке, в результате которой происходит лизис клеточного материала, удаление белковых и полисахаридных фракций и получение раствора ДНК (РНК).

При многократном повторении циклов синтеза увеличивается число копий специфического фрагмента ДНК, что позволяет из небольшого количества анализируемого материала, который может содержать лишь единичные клетки микроорганизмов, получить достаточное количество копий ДНК для идентификации их методом электрофореза. Для определения специфических участков генома РНК-содержащих вирусов, сначала получают ДНК-копию с РНК-матрицы, используя реакцию обратной транкрипции, катализируемую ферментом ревертазой (обратной транскриптазой).

После этого проводят разделение полученных продуктов электрофорезом в агарозном или полиакриламидном геле и при осмотре в ультрафиолетовых лучах сравнивают с контрольным образцом ДНК.

Преимущества ПЦР:

- высокая чувствительность и специфичность;

- возможность диагностики латентной инфекции при наличии единичных микроорганизмов.

Недостатки ПЦР:

- высокая стоимость;

- специальное оснащение и организация лаборатории, подготовка персонала;

- применение возможно на базе крупных клиник и научно-исследовательских учреждений;

- низкая информативность для контроля излеченности, так как возможно определение ДНК нежизнеспособных микроорганизмов.

Приложение 5