Техніка приготування живих препаратів мікроорганізмів

Мікробіологічні спостереження за м/о можна здійснювати, розглядаючи їх як в живому стані без забарвлення, так і у фіксованому - спеціально приготовлених постійних препаратах з застосуванням забарвлення. Живі препарати м/о застосовуються на практиці рідше через обмежену контрасність живих клітин. Винятки становлять лише великі м/о, наприклад мікроскопічні гриби; у живих препаратах досліджують переважно рухливість клітин. У живому стані м/о вивчають у препаратах, які називаються "роздавлена крапля" чи "висяча крапля", які мікроскопують у затемненому полі зору при звуженій діафрагмі і піднятому конденсорі.

Приготування препарату “роздавлена крапля” Хід роботи

На центральну частину добре знежиреного предметного вносять краплю фізіологічного розчину, у яку петлею вносять мікробну культуру і розтирають у суспензію, після чого накривають її покривним склом, обережно накладаючи його, щоб у рідині не утворювалися бульбашки повітря. Крапля досліджуваного матеріалу повинна бути невеликою, щоби після притискання її покривним склом не було надлишку рідини, який би виступав за краї покривного скельця. Надлишок рідини забирають фільтрувальним папером. Препарат встановлюють на предметний столик мікроскопа і розглядають з об'єктивами 8^х-10^х. Тубус опускають на віддаль 5 мм від покривного скла, встановлюють освітлення і досліджують з імерсійним об'єктивом. Після закінчення дослідження препарат знімають з предметного столика, обережно зсувають покривне скло, щоби край його виступав за предметне, і пінцетом скидають у кристалізатор з дезінфікуючим розчином. При спостереженні під мікроскопом можна помітити активний рух бактерій, які переміщуються у різних напрямках з різною швидкістю. Потрібно розрізняти самостійний рух бактерій та броунівський рух завислих у воді найдрібніших частинок. Броунівський рух характеризується невпорядкованим коливанням бактерій на одному місці з відхиленням в одну чи в іншу сторони. Як рух бактерій також не потрібно сприймати механічне переміщення, коли з течією рідини всі частинки пересуваються в одному напрямку із однаковою швидкістю.

Приготування препарату “висяча крапля” Хід роботи

К

раплю досліджуваного матеріалу вносять на центральну частину знежиреного покривного скла. Після цього беруть предметне скло з "луночкою", змащують вазеліном, прикладають до покривного скла так, щоби крапля знаходилася у центрі луночки. Предметне і покривне скло обертають і крапля є герметично закритою у вологій камері і має захист від висихання. Для того, щоб стінки утвореної камери не запотіли предметне скельце і лунку злегка зволожують. В якості матеріалу для вивчення на рухливість використовують молоді (6-12-18-годинні, але не старші однодобових) бульйонні культури. Можна брати і молоді агарові культури. Для цього попередньо готують суспензію на стерильнім фізіологічнім розчині чи у стерильній протічній воді. Для дослідження під мікроскопом звужують діафрагму і знаходять край краплі з сухим об'єктивом малого збільшення (8^х). Знайдену краплю пересувають у центр поля зору і розглядають з імерсійним об'єктивом. У цьому випадку діють наступним чином: на поверхню покривного скла вносять краплю кедрової олії: імерсійний об'єктив опускають під контролем, дивлячись збоку, на препарат в краплю кедрової олії і трохи її роздавлюють, не допускаючи, щоб об'єктив торкався покривного скла, а після цього, спостерігаючи в окуляр, повільно піднімають тубус мікроскопа до моменту виникнення чіткого зображення.

Рис. 2. “Висяча крапля” а – вигляд зверху; б – вигляд збоку.