Лабораторна робота №2

Тема: Правила роботи з культурами мікроорганізмів. Техніка приготування живих і фіксованих препаратів мікроорганізмів. Прості і складні методи забарвлення препаратів. Морфологія бактерій.

Мета роботи. Ознайомотися з правилами роботи з культурами міркоорганізмів (далі - м/о); вивчити методики приготування живих і фіксованих препаратів м/о, способи їх забарвлення, морфологію і структуру бактерій.

Об’єкт та матеріали. Мікроскоп, предметні та покривні скельця, бактеріологічні петлі, розчини барвників, спиртівки, чисті культури бактерій.

Завдання

1. Оформити у протокол лабораторного заняття правила роботи з чистими культурами мікроорганізмів.

2. Навчитися працювати із культурою мікроорганізмів відповідно до правил роботи.

3. Вивчити методи виготовлення живих препаратів “роздавлена крапля” і “висяча крапля”.

4. Вивчити метод виготовлення фіксованого забарвленого препарату (за Грамом).

5. Замалювати у протокол лабораторного заняття форми бактерій (стафілококи, стрептококи, палички) умовно позначивши поле зору у вигляді кола.

Теоретична основа

Вирощування мікроорганізмів на живильних середовищах називається культивуванням (lat. сultus – вирощування), а вирощені мікроорганізми – культурою. При вирощуванні мікроорганізмів у рідкому середовищі культури утворюють суспензії, осад або плівку, при вирощуванні на твердому середовищі – колонії.

Внесення клітин мікроорганізмів чи іншого дослідного матеріалу (зразки ґрунту, проби води) в стерильне поживне середовище для отримання накопичувальної культури називається посівом. Перенесення вже вирощених клітин з одного середовища до іншого (стерильного) називається пересівом. Культивування мікроорганізмів за певної температури називають інкубуванням (лат. іncubatio – вирощування за штучно створеної температури).

Вирощують мікроорганізми у скляному посуді: пробірках, колбах, чашках Петрі. В пробірках мікроорганізми культивують як в рідких, так і на твердих середовищах. Для вирощування аеробних культур пробірки зазвичай заповнюють рідким середовищем на 1/3, для анаеробних – на 2/3 об’єму. Для приготування твердого середовища пробірки заповнюють середовищем на 1/31/4 об’єму. Після стерилізації пробірки з незастиглим середовищем, яке містить агар, розташовують під невеликим кутом для отримання скошеної поверхні. Це так звані скошені середовища. Тверде середовище, яке застигло при вертикальному положенні пробірки, називають стовпчиком. Мікроорганізми в колбах культивують переважно в рідких живильних середовищах. В чашках Петрі мікроорганізми вирощують тільки на твердих середовищах. Для роботи з мікроорганізмами використовують спеціальні бактеріологічні голки, петлі, шпателі, які виготовляють з платинового дроту або ніхрому.

Посів або пересів мікроорганізмів здійснюють поблизу відкритого полум’я. При цьому пробірки необхідно тримати в нахиленому положенні, щоб гарантувати стерильність. Якщо ж їх тримати у вертикальному положенні, то можливе потрапляння сторонніх мікроорганізмів. Пробірки беруть у ліву руку. Правою тримають мікробіологічну петлю, ретельно її обпалюють, виймають корки з пробірок, обпалюють краї пробірок і здійснюють пересів. Перед тим, як закрити пробірки, корки обпалюють у полум’ї.

При тривалому зберіганні мікроорганізмів у лабораторних умовах може відбутися зміна певних фізіолого-біохімічних чи морфологічних характеристик. Тому необхідно здійснювати пересів культур на свіжі середовища з певною частотою залежно від виду, середовища, умов культивування. При такому зберіганні не можна допускати пересихання середовища. Існують й інші способи зберігання культур: під шаром стерильного вазелінового масла, в рідкому азоті, в ліофілізованому стані тощо.