Методы определения чувствительности микроорганизмов к абп.

Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам и другим химиопрепаратам определяют двумя группами методов: дискодиффузионным (метод диффузии в агар с применением бумажных дисков с антибиотиками) и методом разведении антибиотика в плотной или жидкой питательной среде. Выбор метода зависит от цели исследования и возможностей лаборатории. Диско-диффузионный метод следует рассматривать как качественный. Благодаря простоте исполнения он является основным для практических лабораторий. Методы разведения - более точные количественные способы исследования. Их применяют в особо важных практических случаях и научно-исследовательской работе.

Исследованию на чувствительность к антибиотикам должен подвергаться возбудитель инфекции в чистой культуре. Для обеспечения этого требования необходимо соблюдать следующие правила взятия материала на исследование. Материал должен быть получен до начала антибактериальной терапии или после введения антибактериального препарата через такой срок, который необходим для его элиминации из организма. Материей для посева следует брать непосредственно из очага инфекции с соблюдением правил асептики (стерильными инструментами в стерильную посуду). Если взятие материала непосредственно из очага инфекции невозможно, но он сообщается с внешней средой, можно провести исследование соответствующего отделяемого (мочи, мокроты и др.). Материал засевают на соответствующий набор питательных сред, необходимых для выделения чистых культур различных видов микроорганизмов. В смешанной культуре определять чувствительность к антибиотикам не следует, так как можно получить ложные результаты вследствие микробного антагонизма и разной скорости роста микроорганизмов. Если выяснить истинного возбудителя инфекции не удается или патологический процесс вызван микробной ассоциацией, раздельно исследуют чувствительность к антибиотикам всех членов ассоциации, выделенных в чистой культуре.

Исследование чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам проводят стандартными унифицированными методами, регламентированными официальными инструкциями.

Критерии оценки чувствительности, устойчивости и толерантности микроорганизмов к антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам

Используемые в медицине понятия чувствительности и устойчивости микроорганизмов к антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам основаны на клинической точке зрения. В соответствен с этим подходом критерием чувствительности микроба является концентрация антибиотика (химиопрепарата) в организме человека (очаге инфекции) в ED/мл или мкг/мл, достигаемая при терапевтических дозировках препарата. С этим критерием сравнивают минимальную ингибирующую рост микроорганизма концентрацию антибиотика (МИК в ED/мл или мкг/мл), определяемую при выращивании микроба на питательной среде с антибиотиком. Если МИК антибиотика для микроорганизма in vitro меньше или равна концентрации этого антибиотика в организме человека, то этот микроорганизм чувствителен к антибиотику; при противоположном соотношении микроорганизм устойчив к антибиотику.

В соответствии с инструкцией по унифицированным методам в клинической практике микроорганизмы распределяют на ряд групп по степени чувствительности к антибиотикам:

1 группа - "чувствительные" микроорганизмы, когда обычно применяемые дозы антибиотика достаточны для достижения лечебного эффекта;

2 группа - "среднечувствительные" микроорганизмы, когда только повышенные (максимально переносимые) дозы антибиотика могут обеспечить лечебный эффект;

3 группа - "умеренно устойчивые" микроорганизмы, когда лечебный эффект может быть достигнут только при возможности концентрации препарата в очаге или введении непосредственно в очаг инфекции;

4 группа - "устойчивые" микроорганизмы, когда нельзя рассчитывать на лечебный эффект.

В медицинской практике обычно определяют три группы микроорганизмов по чувствительности к антибиотикам: "чувствительные", "среднечувствительные" и "устойчивые". Конкретные критерии их определения методом серийных разведении антибиотиков представлены в табл.3. Диско-диффузионньм методом определяют указанные группы чувствительности микроорганизмов, исходя из различных диаметров задержки роста бактерий вокруг дисков с антибиотиками конкретно для различных антибиотиков в соответствии с табл.4.

Группы микроорганизмов по степени чувствительности к антибиотикам (МИК в мкг/мл или ED/мл)*
Антибиотики	Группы микроорганизмов
	чувствительные	среднечувствительные	умеренноустойчивые	устойчивые
Пенициллин G	0,25	16	128	 128
Пенициллин V	0,25	4	128	128
Метициллин	2	-	-	-
Ампициллин	0,25	16	128	 128
Карбенициллин	-	16	128	 128
Цефалоспорины	2	16	128	 128
Стрептомицин	4	-	128	 128
Канамицин	4	-	128	 128
Неомицин	4	-	128	 128
Гентамицин	0,5	4	64	 64
Левомицетин	1	8	-	 64
Тетрациклины	1	4	64	 64
Эритромицин	1	4	64	 64
Линкомицин	1	4	64	 64
*По унифицированным методам определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам.

Таблица 4 Оценка результатов определения чувствительности бактерии к антибиотикам диско-диффузионным методом
Антибиотики	Диаметр зон задержки роста бактерий. мм
	для сред № 1 и N 2						для среды АГВ
	устойчивые		среднеустойчивые		чувствительные		устойчивые		среднеустойчивые		чувствительные
Бензилпенициллин: для стрептококков для других бактерий		20 11		21-28 12-21		29 10		20 10		21-28 11-16	29 17
Ампициллин: для стафилококков для Г- бактерий и энтеробактерий		20 9		21-28 10-13		29 14		20 9		21-28 10-13	29 14
Карбенициллин: для эшерихий, протея для синегнойной п-ки		14 13		15-18 14-16		19 17		14 13		15-18 12-14	19 15
Метициллин		13		14-17		18		13		14-18	19
Оксациллин		19		20-23		24		15		16-19	20
Цефалексин		11		12-16		17		-		-	-
Цефалотин		11		12-16		17		14		15-18	19
Стрептомицин		13		14-16		17		16		17-19	20
Канамицин		14		15-18		19		14		15-18	19
Неомицин		13		14-17		18		12		13-16	17
Гентамицин		13		-		14		15		-	16
Сизомицин		13		-		14		-		-	-
Тетрациклин		15		16-19		20		16		17-21	22
Доксициклин		12		13-19		20		-		-	-
Эритромицин		14		15-18		19		17		18-21	22
Олеандомицин		12		13-17		18		16		17-20	21
Линкомицин		19		20-23		24		19		20-23	24
Левомицетин		14		15-18		19		1|2		13-15	16
Рифампицин		9		10-12		13		12		13-15	16
Фузидин		12		13-19		20		-		-	-
Полимиксин		8		9-12		13		11		12-14	15
Ристомицин		9		10-11		12		9		10-11	12

В некоторых случаях при длительной химиотерапии инфекций, вызываемых грамположительными бактериями (стрептококками, энтерококками и др.), наблюдается отсутствие санирующего действия бактерицидных антибиотиков (пенициллина и др.) на фоне выделения бактерий чувствительных к используемому антибиотику по минимальной ингибирующей рост концентрации. Это проявление толерантности (терпимости) бактерий к антибиотику. Толерантность бактерий к антибиотику - это утрата ими чувствительности к бактерицидному действию антибиотика при сохранении чувствительности к бактериостатическому действию антибиотика. Условно критерием толерантности микроорганизма к антибиотику считают превышение минимальной бактерицидной концентрации (МБК) антибиотика его минимальной ингибирующей рост концентрации (МИК) в 32 раза и более.