Техника приготовления синтетических сред.

Дистиллированную воду покипятить 1-2 мин., остудить до 80 ⁰ С. Предварительно взвешенное количество глюкозы или лактозы и лимоннокислого натрия высыпать в стерильную колбу добавить воду. Затем ее пастеризовать в водяной бане 5-10 мин. Охладить до 35⁰С добавить антибиотик 50-70 ЕД и желток куриного яйца 20 мл.

1000 ЕД пенициллина = 2 мг (10 тыс ЕД на 1 мл)

1000 ЕД стрептомицина = 1 мг

1000 ЕД спермосана 3 = 3,65 мг

Куриное яйцо перед извлечением желтка вымыть, протереть сухой салфеткой, обработать спиртом. Стерильным пинцетом яйцо раскалывают, пополам сливают белок в сливную чашу. Желток выкладывают на стерильный лист фильтровальной бумаги, подсушивают перекатыванием. Затем осторожно надрезают желток и сливают содержимое в мензурку оставив его оболочку на фильтровальной бумаги.

Желток вносим в колбу с растворенными в ней компонентами, размешиваем.

Подготовленную среду хранят 3-4 часа при температуре 30-35 ⁰С.

Техника разбавления спермы.

Перед разбавлением среда должна иметь температуру для барана, козла 25-30 ⁰С, у остальных животных 30-35⁰С. Разбавлять сперму следует проверенным разбавителем (капля спермы на предметное стекло и капля разбавителя – в микроскоп, активность не должна снизится).

Требования к сперме барана, козла – густая 8 баллов, для быка густая, средняя 8 баллов, для хряка густая, средняя 7 баллов, для жеребца густая, средняя 6 баллов.

Вначале сперму разбавляют 1:1, через 5-10 мин до нужного объема. При разбавлении разбавитель по стенки приливают к сперме, а не наоборот.

Объем разбавителя находят путем подсчета по формуле:

Для охлажденной спермы:

Р = С х V х а / 10 – V

Для замороженной спермы:

Р = С х V х а / 125 – V,

Где,

Р – количество разбавителя

С – концентрация спермы в 1 мл спермы

V – объем эякулята

а – активность спермиев в баллах

10 – коэффициент при разбавлении в 1 мл содержится 10 млн активных спермиев

125 – коэффициент при использовании глубоко замороженной спермы в гранулах по 0,2 мл при оттаивании 1 гранулы в ней содержится 10 млн активных спермиев.

Краткосрочное хранение спермы при плюсовых температурах

Цель краткосрочного хранения: Запас спермы для внутрихозяйственного осеменения самок, транспортировка свежеполученной спермы, хранение спермы с целью контроля качества спермы после разбавления.

Краткосрочное (в пределах 1-5 суток) хранение спермы сельскохозяйственных животных основано на создании искусственного анабиоза одним из трех спо­собов:

• понижением температуры до 2—5°С;

• созданием слабокислой реакции среды;

• внесением в разбавитель химических ингиби­торов метаболических процессов.

Два температурного режима хранения спермы:

• при комнатной температуре 16-20⁰С

• пр температуре тающего льда 2-5⁰С.

При понижении температуры до 2-5 °С замедля­ются примерно в 10 раз расход энергетических ресур­сов и накопление конечных продуктов метаболизма, в результате спермин дольше сохраняют подвижность и оплодотворяющую способность. Пониженная темпера­тура тормозит размножение микроорганизмов.

Разбавление проводят не позднее чем через 30 минут после получения. Степень разбавления спермы барана, козла подсчитывают исходя из расчета, что концентрация спермиев в одной спермодозе не менее 80 млн спермиев, разбавляют в 2-4 раза.

Сперму, сохраняемую при 2-5 °С, разбавля­ют глюкозо-цитратно-желточной, молочно-желточной, глюкозо-цитратно-желточной с хелатоном и ар­гинином, гликокол-цитратно-желточной средами.

После разбавления сперму расфасовывают в од­норазовые стерильные полиэтиленовые ампулы, по­лиэтиленовые пробирки или во флаконы из-под ан­тибиотиков; их обертывают теплоизолирующим ма­териалом (для постепенного охлаждения), заключа­ют в полиэтиленовый пакет. Пакеты с расфасован­ной спермой вкладывают в широкогорлый термос со льдом или помещают на полку бытового холодиль­ника.

По исследованиям ряда авторов, при данном ме­тоде хранения оплодотворяющая способность спермы быка и хряка снижается ежедневно на 4-7%, барана — на 10-30%. Поэтому сперма быков и хряков, со­храняемая при 2-5 °С, пригодна для использования не более трех суток, баранов — в течение суток.

В настоящее время этот метод применяется весь­ма ограниченно, в основном при искусственном осеме­нении овец.

Краткосрочное хранение спермы при плюсовых температурах путем блокирования метаболических процессов в спермиях основано на использовании трилона Б (хелатона). Среды с хелатоном получили ши­рокое применение в практике искусственного осемене­ния свиней.

Для разбавления и хранения спермы хряков предложены различные по составу среды с хелатоном. Ее разбавляют через 40-60 мин после получения. По результатам сравнительных испытаний, наи­более эффективной оказалась глюкозо-хелато-цитратно-сульфатная среда (ГХЦС-среда); она выпускается фармпредприятиями в виде сухих заготовок. Един­ственный ее недостаток — непродолжительный срок хранения (2—4 месяца).

Во ВГНКИ ветпрепаратов была проведена работа по совершенствованию ГХЦС-среды путем замены ча­сти компонентов, в результате предложена ГХЦСН-Р"У-1 -среда со сроком хранения 6—12 месяцев. В средах с хелатоном сперму хряков можно хра­нить при двух температурных режимах: 6—10 °С и 16— 18 °С. Хранение при пониженной температуре предус­матривает обязательное внесение 3—4% желтка кури­ных яиц.

Разбавленную сперму, предназначенную для ис­пользования на месте, переливают в стеклянные узко­горлые колбы, заполняя их на 2/3 объема; горловины колб закрывают стерильными бумажными колпаками, которые закрепляют резиновыми кольцами. Колбы обертывают теплоизоляционным материалом (вата, синтепон) для постепенного охлаждения спермы и пе­реносят в бытовой холодильник, оснащенный специ­альным устройством для поддержания заданной тем­пературы (6—10 °С).

Разбавленную ГХЦСЖ-средой сперму хранят в холодильнике 2—3 суток. Во время хранения колбы со спермой периодически (2 раза в сутки) встряхивают, чтобы предотвратить образование плотного осадка на дне.

Если сперма предназначена для транспортиров­ки, ее расфасовывают в полиэтиленовые флаконы от осеменительного прибора. Флаконы ополаскивают разбавите­лем и заполняют разбавленной спермой на 3/4 их объема, завинчивают крышку на горловине (неплотно, чтобы обеспечить доступ воздуха).

Флакон укладывают в термостатирующее уст­ройство (сумка-термос и др.), положив на дно предва­рительно охлажденные до 6°С пластины от бытового морозильника «Атлант» и накрыв их теплоизолирую­щей прокладкой. На время транспортировки крышки флаконов завинчивают полностью. После доставки на пункт искусственного осеменения флаконы перестав­ляют в ячейки поролонового термоса конструкции ВИЖ или пенопластовой упаковки из-под химреактивов и опускают в погреб.

Степень разбавления в 3-4 раза концентрация в дозе не менее 3 млрд спермиев.

Сперма жеребцов разбавляют в 3-4 раза, в дозе 50 млн спермиев. При температуре 2-4⁰С хранится 48 часов. Перевозят в стеклянных банках.

Может быть и медовый разбавитель.