Лекция № 14 (2 часа) Тема «Транспортировка спермы. Техника безопасности. Искусственное осеменение самок »

1. Вопросы лекции

1.1. Расфасовка и упаковка замороженной спермы при транспортировке.

1.2.Техника безопасности при работе с жидким азотом.

1.3.Обоснование методов искусственного осеменения самок.

1.4.Техника искусственного осеменения коров, лошадей, свиней, овец и коз.

1.5.Выбор времени и кратности осеменения.

2 Литература

2.1 Основная

2.1.1 А.П. Студенцов, в.С. Шипилов, в.Я. Никитин, м.Г. Миролюбов.

Ветеринарное акушерство, гинекология и биотехника размножения./ Под ред. В. Я. Никитина, М.Г. Миролюбова. Учеб. для студ. высш. учеб. завед. -7 -е изд.. перераб. и дои. - М.: Колос, 2000. - 495 с.

2.1.2 В.Я. Никитин, М.Г. Миролюбов, В.П. ГончаровДЗ.В. Храмцов. Практикум по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных. Учеб. и учеб пособие для студ. высш. учеб. завед. - М.: КолосС, 2004. - 208 с.

2.2 Дополнительная

2.2.1 Н.Н. Михайлов, Г.В. Паршутин, В.П. Гончаров и др. Акушерство, гине­кология и искусственное осеменение с.-х. животных. Под ред. Н.Н. Михайлова.-М: Агропромиздат, 1990.- 527с.

2.2.2 В.К. Пономарев. Ветеринарное акушерство и гинекология (цикл лекций). Учебное пособие для вузов. - Оренбург: Издательство «1МЕХТ», 1997. -176 с.

3. Краткое содержание вопросов

3.1. Сперму обычно перевозят в термосах, в которых она хранится.

Сперму, помещённую для кратковременного хранения, нужно предохранять от колебаний температуры.

Замороженную сперму перевозят в сосудах Дьюара, в которых её и хранят. Падение сосуда может сопровождаться взрывом, поэтому необходимо хорошо закреплять. При перевозке сосудов Дьюара на самолёте их заполняют азотом только на половину гидравлической ёмкости.

К каждой партии отправляемой спермы прикладывают ордер, в котором указывают дату и часы получения спермы, кличку производителя, дозу и оценку спермы.

При искусственном осеменении животных всё шире используют сперму, замороженную при температуре -196 С, которую хранят в жидком азоте в специальных ёмкостях сосуда Дьюара.

В животноводстве используют различные типы сосудов отечественного и импортного производства. Наибольшее распространение получил сосуд отечественного производства « сосуд Дьюара-50 » ёмкостью 52 литра.

3.2. При работе персонала с жидким азотом и сосудами Дьюара возможны:

1. Обмораживание открытых участков тела при контакте с охлаждёнными поверхностями или попадании жидкого азота.

2. Обмарок или удушье в результате снижения концентрации кислорода в воздухе при испарении большой массы жидкого азота.

3. Взрыв сосуда Дьюара в следствии внезапной потери вакуума, быстрой десоркции газов при отогревании сосудов, а также из за испарения азота при герметично закрытой горловине.

4. Конденсация на охлажденных жидким азотам поверхностям кислорода воздуха и возгораниях при контакте с горючими материалами.

В связи с этим обращаться с сосудами Дьюара необходимо осторожно, в строгом соответствии с инструкцией по их эксплуатации. При падении, ударах, резких толчках может произойти нарушение целостности наружного кожуха или внутреннего сосуда, что сопровождается потерей вакуума. Признаком такой неисправности является быстрое испарение жидкого азота и обледенение наружного кожуха. Эксплуатировать или отогревать в рабочих помещениях неисправные сосуды Дьюара категорически запрещается. Потерявший вакуум сосуд Дьюара надо освободить от хранимой спермы и жидкого азота, а затем поставить на отогревание в течение 3-х суток в помещение, куда запрещён доступ людей. Закрывать сосуд Дьюара можно только предназначенными для них крышками. Запрещается плотно закрывать горловину сосуда; испарение части жидкого азота создаёт внутри сосуда избыточное давление, поэтому внутрь сосуда не может попасть кислород из наружного воздуха. Кроме того повышение давления создаёт опасность повреждения сосуда или выброса азота. При транспортировке сосуда Дьюара и находящиеся рядом предметы необходимо надёжно закреплять во избежании падений и повреждений. Заливать жидкий азот в сосуд Дьюара надо через гибкий металлорукав диаметром 18 мл., давление по манометру в транспортной цестерне должно быть не более 5 атмосфер. Гибкий металлорукав должен быть опущен в сосуд до дна, чтобы струя азота не выбросила рукав из горловины, так как могут пострадать работающие рядом люди. Из сосуда Дьюара в сосуд заливку ведут через широкую металлическую воронку. В прорцессе заливки категорически запрещается заглядывать в сосуд Дьюара для определения уровня жидкости. Заправка считается законченной при появлении из горловины первых брызг жидкости. Особую осторожность следует соблюдать во время заполнения теплых сосудов Дьюара, т. е. Новых или отогретых. Заполняют сосуд Дьюара жидким азотом, в одиночку запрещается. Вводить пинцет, канистры и другие предметы в жидкий азот надо медленно во избежании разбрызгивания, вызванного «кипячением» жидкости при контакте с тёплыми предметами. Чтобы сперма всегда находилась в жидком азоте, сосуд Дьюара предназначенный для её хранения, периодически дозаправляют, при понижении уровня жидкости до 1/3 ёмкости азота. Контроль за уровнем азота проводят периодическим погружением в азот металлическую или деревянную линейки. Жидкий азот как более летучий компонент, постепенно обогощает ся примесью кислорода в техническом продукте. Недопустимо в смеси с выше 15% кислорода, так как такая смесь может воспламениться при контакте с органическими продуктами. Соединение кислорода контролируют газоанализатором типа ГХП-3. При отсутствии газоанализатора после каждых 12 дозаправок жидкость из сосуда Дьюара сливают и заливают сосуд свежим азотом. Слив проводят на открытой специальной площадке в безопасном месте. Вблизи мест слива не должно быть деревьев, бумаги, асфальта и т. д. Промывку и очистку сосудов проводят на гос. плем. предприятиях и гос. плем. станциях. Нельзя нагревать сосуды. Такая операция может привести к взрыву. Персонал работающий с сосудом Дьюара и жидким азотом, обязан надевать защитные очки, перчатки или рукавицы. Одежда должна быть без карманов, брюки без манжет и закрывать верх обуви. Рукавицы должны быть свободными, чтобы при необходимости можно было их легко сбросить. При попадании жидкого азота на кожу, поражённый участок обмыть водой, обильно. Помещение, где работают с жидким азотом или хранят сосуды Дьюара, должно быть оборудовано вытяжной - приточной принудительной вентиляции, обеспечивающее содержание кислорода в воздухе не менее 19%. При естественной вентиляции работа с жидким азотом допускается в помещении, объём которого в 7000 раз больше объёма находящегося там жидкого азота. Снижение концентрации кислорода в воздухе ниже 16% приводит к головокружению, обморокам или удушьям без каких – либо предварительных симптомов. Пострадавшего следует вынести на свежий воздух.

3.3. Осеменение животных

Выбор времени осеменения

Его необходимо производить во время половой охоты, когда создаются наиболее благоприятные условия для капацитации спермиев и оплодотворяемости. Наиболее точным методом диагностики охоты является рефлексологический.

Пробу на охоту у коров проводят в специальном загоне с твердым покрытием и высоким навесом. Быка-пробника выпускают к самкам на 1,5-2 часа 2 раза в день – утром и вечером. В это время тщательно наблюдают за животными. После выявления охоты у коровы или телки их немедленно выводят из загона, для того, чтобы пробник отыскал других самок в охоте.

Пробу молодых кобыл на охоту жеребцом-пробником начинают с начала полового осеменения, а подсосных – с третьего дня после родов.

Для выявления охоты у свиней вначале прогоняют хряка-пробника по проходу свинарника. В этом случае на него реагируют не только матки в охоте, но и матки с признаками течки, планового возбуждения и даже вне периода стадии возбуждения полового цикла.

Затем охоту достоверно определяют путем индивидуального контакта свиньи с хряком-пробником в специальном станке или загоне.

Кратность осеменения, способы и дозы спермы

Коров после выявления охоты вазэктомированным быком-пробником следует немедленно однократно осеменить. При выявлении половой охоты быком-пробником, неспособным к коитусу, охота более продолжительная. Поэтому, если через 10-12 часов охота продолжается, проводят вторичное осеменение.

Цервикальный способ осеменения с визуальным контролем

Заключается во введении коровам и телкам 1-1,5 мл разбавленной спермы в канал шейки матки на глубину 4-5 см шприцем-катетером с использованием влагалищного зеркала.

Перед осеменением инструменты обеззараживают.

Стерилизация кипячением

Кипятят 15-20 минут. Затем шприц-катетер берут стерильным пинцетом и вставляют поршень. Многократным движением поршня удаляют из шприца воду. Для удаления остатков воды, которая губительно действует на спермиев, канал шприца 5-6 раз промывают теплым (40ºС) стерильным 1%-ным раствором натрия бикарбоната.

Влагалищные зеркала обезвреживают кипячением в течение 15-20 минут. После этого зеркала просушивают.

Стерилизация сухим жаром

Длительность обезвреживания 15-20 минут при температуре 160-180 ºС в сушильном электрическом шкафу. Обезвредить влагалищное зеркало можно и пламенем спиртовки или спиртового тампона.

Стерилизация 70%-ным спиртом

Берут четыре стерильные баночки с притертыми пробками и пишут на них номера – 1, 2, 3, 4. В три баночки (№1, 2, 3) наливают свежеприготовленный стерильный 2,9%-ный раствор натрия лимоннокислого, а в баночку №2 – 70% спирт. Шприц обрабатывают снаружи спиртовым (96%) тампоном. Затем обезвреживают канал шприца 70%-ным спиртом, который не менее трех раз набирают в шприц и сливают в баночку №2. Остатки спирта в катетере тщательно удаляют теплым (40ºС) 2,9%-ным раствором натрия лимоннокислого, набирая его 5-6 раз из баночки №3 и 4 и выливая в сливную чашу.

После подготовки инструментов подготавливают корову:

наружные половые органы обмывают теплой водой с мылом;

орошают раствором фурацилина (1:5000);

насухо вытирают.

Цервикальное осеменение с ректальной фиксацией шейки матки

Корове или телке сперму вводят в шейку матки с помощью стерильных одноразовых пластмассовых или стеклянных инструментов без применения влагалищного зеркала, фиксируя шейку матки рукой через прямую кишку.

В набор инструментов входят:

стерильная полистироловая или стеклянная пипетка;

стерильный пластмассовый двухграммовый шприц с соединительной муфтой;

полиэтиленовые перчатки.

Последовательность действий

надеть полиэтиленовую перчатку;

увлажнить руку теплой мыльной водой;

раскрыть срамные губы животного;

не касаясь их пипеткой, ввести пипетку другой рукой снизу вверх до верхнего свода влагалища, а затем горизонтально, до упора в область шейки матки;

придерживая пипетку горизонтально, руку в перчатке ввести в прямую кишку;

зафиксировать шейку матки кистью руки;

под контролем пальцев ввести пипетку в цервикальный канал;

захватить кистью руки шейку матки и, вращая ее в разные стороны, продвинуть пипетку в переднюю часть шейки матки;

выдавить сперму в дозе 1 мл, нажав на поршень шприца.

Оплодотворяемость этим способом повышается на 8- 10 %.

Маноцервикальный способ осеменения

Заключается в том, что сперму вводят в шейку матки рукой, используя для этой цели стерильные одноразовые полимерные инструменты (полиэтиленовую ампулу с полистироловым катетером и полиэтиленовую перчатку).

Последовательность действий

достать из термоса ампулу со спермой (объем 1,2 мл);

протереть ее тампоном, пропитанным 96%-ным спиртом;

стерильными ножницами срезать колпачок ампулы и соединить ее с катетером;

надеть стерильную полиэтиленовую перчатку;

смочить руку 0,9 %-ным раствором хлористого натрия;

ввести руку во влагалище коровы;

определить степень раскрытия шейки матки;

вызвав сокращение матки, не вынимая руки из влагалища, другой рукой подать подготовленный для осеменения инструмент;

массируя шейку матки кончиками пальцев, подтолкнуть ампулу ладонью до тех пор, пока катетер полностью (на глубину 6-7 см) не войдет в канал шейки матки;

приподнять ампулу вверх на 2-3 см;

выдавить из нее сперму большим и указательным пальцами в момент расслабления шейки;

не разжимая ампулы, осторожно извлечь катетер из канала шейки матки.

Первотелок, а также телок с узким влагалищем осеменять этим способом нельзя.

После введения спермы животное нужно выдержать на привязи не менее 20-30минут, чтобы предотвратить вытекание спермы из канала шейки матки во влагалище.

Этот прием повышает оплодотворяемость на 5-6 %.

Осеменение кобыл

Кобыл осеменяют разбавленной и неразбавленной спермой. Неразбавленную сперму необходимо использовать в течение 30 минут с момента ее получения. Сперму, разбавленную и сохраненную при температуре 2-4 ºС, разрешается использовать до 2 суток.

Первое искусственное осеменение кобыл проводят на второй день после выявления охоты и повторяют через 48 часов до отбоя, а при наличии ярко выраженной охоты – через 24-36 часов.

Сперму в полость матки вводят при помощи ампулы и катетеров. Мягкий эластичный резиновый катетер И. И. Иванова вводят в шейку матки рукой без влагалищного зеркала на глубину 10-12 см. Стеклянный и эбонитовый катетеры вводят в шейку матки на глубину 10-15 см только через обеззараженное влагалищное зеркало. Крупным, а также старым кобылам вводят максимальную долю спермы – 40 мл, молодым кобылам – 25-30 мл.

Осеменение овцематок

Овцематкам вводят сперму в шейку матки, применяя свежую неразбавленную сперму в дозе 0,05 – 0,1 мл. Для осеменения используют микрошприц или шприц-полуавтомат.

При двукратной в течение суток диагностике охоты вазэктомированными пробниками овец осеменяют однократно через 4-5 часов после окончания ее выявления. Если применяют обычных баранов-пробников с фартуками и выявляют половую охоту однократно, то осеменение проводят дважды: первый раз немедленно после выявления охоты и второй раз через 24 часа.

Сперму, разбавленную (в 2-3 раза) и охлажденную до 2-4 ºС, используют в течение 24 часов в дозе 0,1 – 0,15 мл.

Ярок, у которых из-за узости влагалища, плохо выраженной шейки матки, ввести шприц в канал шейки матки трудно, целесообразно осеменять влагалищным способом с использованием укороченного микрошприца. Для этого узкий конец катетера (канюлю) обрезают и оплавляют на пламени горелки. Дозу спермы по сравнению с цервикальным способом увеличивают в 2-3 раза.

Осеменение свиней

Свиней осеменяют по методу ВИЖа, используя полиэтиленовый прибор ПОС-5, разбавленной в 2-6 раз спермой из расчета 1 мл на 1 кг массы животного, но не более 150 мл. В дозе должно содержаться 4-5 млрд. активных спермиев.

По методу Полтавского научно-исследовательского института свиноводства ( фракционный способ) осеменяют с помощью специального термоса-прибора или универсального зонда УЗК-5 неразбавленной спермой, вводя взрослым свиноматкам 50 мл, молодым – 30-35 мл. При этом число подвижных спермиев в дозе должно быть 3 млрд. для основных и 2 млрд. для ремонтных маток.

Вслед за спермой в матку вводят глюкозо-солевой раствор из расчета взрослым свиноматкам – 100 мл, молодым – 70-80 мл.

Свиноматок, выявленных в охоте утром, осеменяют первый раз вечером, а выявленных вечером – утром следующего дня. Повторно осеменять следует через 10-12 часов. При однократном выявлении охоты маток осеменяют немедленно и затем повторно через 24 часа.

Осемененных свиноматок независимо от примененного способа необходимо в течение 6-8 часов после осеменения содержать в отдельных станках для предупреждения обратного вытекания спермы и разбавителя при впрыгивании их одна на другую.

Искусственное осеменение сельскохозяйственных птиц

Получение спермы от петуха

клоаку освобождают от остатков каловых масс;

протирают отверстие стерильной марлевой салфеткой;

один человек ставит петуха на стол, левой рукой придерживая в области груди;

одновременно ладонью правой руки массирует всю спину петуха;

массаж производят 3-4 раза в течение нескольких секунд до тех пор, пока петух не начнет реагировать на это подниманием хвоста;

левой рукой фиксируют конечности петуха и берут его подмышку;

правой рукой производят легкий нажим в каудальной части абдоминальной области тела петуха, что приводит к выпячиванию клоаки;

помощник подставляет стерильную пробирку (спермоприемник) к клоаке петуха и пальцами слегка нажимает на нее с обеих сторон. Это приводит к эрекции копуляционного органа и выделению спермы.

Оценка спермы:

объем 0,2-0,5 мл;

концентрация спермиев 2-3 млрд. в 1 мл;

Получение спермы от индюка

Используют специальный станок, в котором фиксируют индейку и накрывают ее сеткой. Подпускают самца и во время спаривания массируют мягкую часть живота. Через 30-40 с происходит выделение спермы, которую собирают в теплый стерильный спермоприемник. Сперму получают 2 раза в неделю.

Оценка спермы:

объем 0,25-0,4 мл;

концентрация спермиев 2-3 млрд. в 1 мл.

Получение спермы от гусаков

Сперму от гусаков получают так же, как от индюков.

Оценка спермы:

0,1-1,3 мл;

концентрация спермиев – 0,3-0,9 млрд. в 1 мл.

Для разбавления спермы гусаков рекомендуется среда ВНИИТИП, а остальные среды – для разбавления спермы петухов и индюков.

Для спермы петухов предложена усовершенствованная среда ВНИИТИП-С2 следующего состава (г):

сахароза или сахар-рафинад – 4,

д-глюкоза (ГОСТ 6038-79) – 1,

натрий уксуснокислый – 1,

натрий двууглекислый – 0,15,

калий фосфорнокислый двузамещенный – 0,15,

уксусная кислота 10%-ная – 0,2 мл,

вода дистиллированная – 100 мл.

Птиц осеменяют во второй половине дня:

кур раз в 5 дней, гусынь – раз в 6 дне, индеек – в начале сезона 2-3 раза с интервалом 1-2 дня, а затем через каждые 10-12 дней. В весенне-летний сезон при снижении оплодотворяемости яиц индеек осеменяют через каждые 7 дней.

При осеменении неразбавленную или разбавленную сперму вводят в яйцевод в дозе:

курам 0,028-0,03 мл с количеством спермиев в дозе 100-150 млн;

гусыням 0,05 мл свежеполученной и 0,1-0,2 мл разбавленной спермы с содержанием в дозе 30-50 млн. активных спермиев;

индейкам 0,025-0,03 мл неразбавленной или разбавленной спермы с содержанием в дозе 80-100 млн. спермиев.

Организация искусственного осеменения птиц

Искусственное осеменение кур проводит бригада, состоящая из двух звеньев. Одно звено из двух человек получает сперму от петухов, второе звено из двух или трех человек искусственно осеменяют кур.

Для искусственного осеменения индеек оборудуют при птичнике небольшую лабораторию, моечную, комнату для получения спермы и в каждом птичнике-маточнике изолированное помещение для осеменения индеек. Сперму от индюков получают один или два человека

Для искусственного осеменения гусей оборудуют пункт, где содержат самцов. В нем должны быть лаборатория, моечная и комната для получения спермы. Осеменяет гусей бригада из четырех человек. Сперму от гусей получают лаборант и техник. Они же оценивают качество и производят разбавление спермы. Двое других (техник и его помощник) ловят и осеменяют гусынь.