121… Определение резус-принадлежности крови

В эритроцитах человека имеются 5 основных антигенов системы резус (D, C, c, E, e), из которых наиболее иммуногенным является антиген D – Rh(D). Наличие или отсутствие этого антигена определяет резус-принадлежность крови: лица, имеющие D-антиген, принадлежат к группе резус-положительных (среди лиц белой расы их приблизительно 85%); лица, не имеющие его, относятся к резус-отрицательным (их, соответственно, около 15%). Иммуногенность других (минорных) антигенов системы Rh значительно ниже и убывает в ряду: с>Е>С>е. Определение минорных антигенов системы резус, как правило, производится при необходимости многократных трансфузий, в тех случаях, когда в сыворотке реципиента обнаружены иммунные антитела к антигенам системы резус, в том числе при индивидуальном подборе крови. Антиген D имеет слабые варианты, объединяемые в группу ^ Dweek (Du), частота которой в популяции составляет около 1% . Эти эритроциты слабо или вообще не агглютинируются полными анти-Rh-антителами в реакции прямой агглютинации. Доноры, содержащие Du, должны быть отнесены к резус-положительным, так как, во-первых, переливание их крови сенсибилизированным к D-антигену резус-отрицательным реципиентам может вызвать тяжелые трансфузионные реакции и, во-вторых, может вызвать иммунный ответ у резус-отрицательных реципиентов. Поэтому кровь доноров должна обязательно тестироваться на присутствие Du и, в случае его обнаружения считаться резус-положительной. Реципиенты, содержащие антиген Du, должны быть отнесены к резус-отрицательным и им должна быть перелита только резус-отрицательная кровь, так как нормальный антиген D может вызвать у таких лиц иммунный ответ. Поэтому кровь реципиентов не обязательно тестировать на присутствие Du. Резус-принадлежность определяется в реакции агглютинации с помощью моноклональных реагентов или изоиммунных антирезусных сывороток, предназначенных для выявления Rh(D)-aнтигена в реакции прямой агглютинации (на плоскости и в пробирочном тесте; в солевой среде; в присутствии высокомолекулярных усилителей; с эритроцитами, обработанными протеолитическими ферментами) или в непрямом антиглобулиновом тесте (непрямая проба Кумбса). Метод определения зависит от класса антител в реагенте: если в нем присутствуют полные антитела (класса IgM), то реагент используется для определения резус-фактора методом прямой агглютинации в солевой среде; если в нем содержатся неполные антитела (класса Ig G), то он используется в реакции агглютинации в присутствии высокомолекулярных усилителей (альбумина, желатины и др.), с эритроцитами, обработанными протеолитическими ферментами, в непрямом антиглобулиновом тесте. Реакция агглютинации на плоскости с помощью анти-D моноклональных реагентов (полных антител) Определение проводят в помещении с хорошим освещением. Наилучшие результаты тест дает при использовании высокой концентрации эритроцитов и температуре около +37° С, поэтому желательно использовать подогретую пластинку. Для исследования используют цельную кровь, отмытые эритроциты, эритроциты в плазме, сыворотке, консерванте или физиологическом растворе. Процедура проводится в следующей последовательности:

1. Наносится большая капля (около 0,1 мл) реагента на пластинку или планшет.

2. Рядом наносится маленькая капля (около 0,03 мл) исследуемой крови (эритроцитов).

3. Тщательно смешивается реагент с кровью чистой стеклянной палочкой.

4. Через 10–20 с пластинка мягко покачивается. Несмотря на то, что четкая агглютинация наступает в первые 30 с, результаты реакции следует учитывать через 3 мин после смешивания.

5. Результаты реакции записываются немедленно после окончания.

При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус-положительная, если агглютинация отсутствует – как резус-отрицательная. Если агглютинация намного слабее наблюдаемой с Rh (D)-положительными эритроцитами, исследуемая кровь принадлежит к подгруппе слабых антигенов Rh – Du. Для уточнения принадлежности такого образца крови к группе Du исследование проводят со вторым реагентом, содержащим IgG (неполные) анти-D антитела (см. гл. 6.2.2.3).

122..

Как определить группу крови - деление групп крови по системе АВО Как происходит деление групп крови по системе АВО? В настоящее время больным переливают исключительно одногруппную кровь. В крови человека обнаружено более 300 антигенов. Все форменные элементы крови, белки плазмы, а также ткани имеют свою антигенную структуру, различную у каждого человека. По сочетаниям антигенов, содержащихся только в эритроцитах, можно выделить 1,5 млн. групп крови. Основой гёмотрансфузий являются группы системы АВО. Деление крови на группы в этой системе основано на обнаружении в эритроцитах групповых антигенов (агглюти-ногенов) А и В, а в сыворотке крови — соответствующих им антител (агглютининов) а и b. Присоединении соответствующих агглютиногенов (А и а или В и b) происходят агглютинация (склеивание) эритроцитов и их разрушение (гемолиз). Группа крови человека является его биологической особенностью, которая не изменяется в течение всей жизни. Известно 4 группы системы АВО. Группы крови системы АВО Обозначение группы крови Агглютиногены, содержащиеся в эритроцитах Агглютинины, содержащиеся  в сыворотке крови 0(I) 0 a и b A(II) A b B(III) B a AB(IV) A и B 0 Как проводится определение группы крови человека «простой реакцией»? Для определения группы крови простым методом необходимы 8 глазных пипеток (отдельная для каждой группы серии сыворотки), мелкая тарелка, флаконы с изотоническим раствором хлорида натрия и гемагглю-тинирующие сыворотки 4 групп двух серий. Определение крови с помощью стандартных сывороток называется «простой реакцией». Определение производится на тарелке, на которой восковым карандашом наносят-обозначения групп сывороток. Сначала на тарелку наносят по 1—2 капли стандартных сывороток соответственно сделанным надписям в 2 ряда для двух различных серий. В каждую каплю сыворотки добавляют испытуемую кровь, взятую из пальца или из вены, и перемешивают покачиванием. Количество крови должно быть в 10—15 раз меньше, чем сыворотки. За реакцией наблюдают не более 5 минут, после чего делают заключение о группе крови по наличию агглютинации. Различают 4 классические реакции, характерные для 4 групп крови. Возникновение агглютинации эритроцитов (+) при смешивании крови со стандартными сыворотками   Группа крови  Группа стандартной сыворотки 0(1) А (II) В(Ш) AB(IV)   0(1) - - - + А (II) + - + + В(Ш) + + - + АВ (IV) + + + - Агглютинация, образование «песка» в капле со смесью свидетельствуют о наличии группового антигена. Как проводится двойная перекрестная реакция в сыворотке крови больного? Простой метод определения группового антигена (группы крови) уточняется в изосерологической лаборатории с помощью двойной перекрестной реакции — определением групповых антител а и b в исследуемой сыворотке. Они выявляются с помощью стандартных эритроцитов А и В, заготовленных от доноров, имеющих соответственно А (II) и В (III) группы крови. В 2 отдельные капли сыворотки, нанесенные на тарелки, добавляют стандартные эритроциты групп А и В. Через 5 минут определяют результат по наличию агглютинации, которая выявляет агглютинин а в крови В (III) группы, агглютинин b в крови А (II) группы, агглютинины а и b в крови О (I) группы и отсутствие агглютинации в крови АВ (IV) группы.

123… Агглютинин — антитело, которое выполняет реакцию агглютинации клеток крови, бактерий и ряда других антигенных частиц. Агглютинин расположен в плазме крови. Наличие его в крови определяет групповую принадлежность, так наличие α-агглютинина свойственно первой и третей группе крови, а β-агглютинин присутствует в первой и второй. Данное белковое соединение является одним из участников иммунного ответа. В крови существуют и агглютиногены, специфичные для четвертой группы (АВ), также присутствующие в третей (В) и во второй (А), выступающие в роли компенсации отсутствующих агглютининов.

Агглютиногены (от латинского agglutinare — «приклеивать» и греческого γεννάω — «порождать») — антигены, вызывающие в организме образование агглютининов (изоантител).

Агглютинины содержатся в клетках (например, в эритроцитах человека) и обозначаются прописными латинскими буквами А и В.

У одних людей в эритроцитах имеется агглютиноген А, у других — В, у третьих — А и В, у четвёртых он вообще отсутствует (0).

По системе АВ0, занимающей в исследованиях группы крови основное место, всех людей делят на четыре основные группы: 0(I), А(II), В (III) и АВ (IV).

Если дифференциации крови по системе АВ0 недостаточно, прибегают к исследованию других эритроцитарных, сывороточных и ферментных систем.

Все системы крови передаются по наследству.