Пересадка гонад и коррекция пола

ГБОУ ВПО

«Кировская государственная

Медицинская академия»

Министерства здравоохранения РФ

КАФЕДРА ОБЩЕЙ ХИРУРГИИ

«УТВЕРЖДАЮ»

«_____»___________________2012 год

Зав. Кафедрой ___________________

Определение принадлежности по аво с помощью стандартных гемагглютинирующих сывороток.

1. Определение манипуляции: традиционный способ типирования крови при отсутствии современных технологий.

2. Показания: обязательный вид исследования в предоперационном периоде, при переливании крови и эритроцитных концентратов, донорстве крови и подборе пары донор-реципиент при трансплантации органов и тканей.

3. Противопоказания: наличие современных гемагглютинирующих реагентов, определяющих РГА с большей точностью.

   4. 0снащение: пластинки (плашки) со смачиваемой светоотражающей поверхностью, набор из двух серий стандартных гемагглютинирующих сывороток, удовлетворяющих по условиям и срокам хранения, стеклянные пипетки для переноса сред, предметные стекла или стеклянные палочки для смешения, физиологический раствор, таймер, помещение, удовлетворяющее по температуре и освещенности, лупа или микроскоп, маркер, перчатки, аптечка первой помощи.

   5. Техника выполнения: на планшете в 6 точек, обозначенных стеклографом как О, А, В, помещают по 2 капли соответствующих гемагглютинирующих сывороток (0,1 мл) и рядом по одной капле осадка эритроцитов (0,01-0,02 мл). Сыворотку и эритроциты перемешивают стеклянными палочками. Пластинку периодически покачивают, наблюдая за ходом реакции в течение 5 минут. По истечении 5 минут в реагирующую смесь добавляют по 1-2 капли физиологического раствора для снятия возможной неспецифической агрегации эритроцитов и интерпретируют результат. При отсутствии РГА во всех каплях кровь принадлежит к группе 0(1), при агглютинации в сыворотках 0(1) и В(Ш) и отсутствии РГА в А(Н) принадлежит к группе А(И), при агглютинации в сыворотках 0(1) и А(И) и отсутствии РГА в В(Ш) кровь принадлежит к группе В(Ш) и при агглютинации по всех сыворотках кровь принадлежит к группе AB(IV). В последнем случае для исключения неспецифической агглютинации эритроцитов каплю их вносят в стандартную сыворотку AB(IV) и отсутствие РГА в ней убеждает в принадлежности эритроцитов к группе AB(IV).

   6. Возможные ошибки в определении возникают при нарушении техники выполнения исследований или в случаях трудноопределимых групп крови.

Технические ошибки обусловлены:

а) ошибкой в порядке расположения реагентов на пластинке и их недоброкачественностью (помутнение, высыхание, истекший срок годности);

б) нарушением температурных условий с холодовой псевдоагглютинацией при температуре ниже 15°С, добавление физиологического раствора и покачивание, как правило, устраняет неспецифическую агрегацию в виде «монетных столбиков», повышение температуры выше 25 С снижает активность агглютининов с получением ложноотрицательного результата исследования;

в) нарушением соотношения эритроцитов и сыворотки 1:10, при избытке эритроцитов РГА может быть не замечена, особенно при сниженных агглютинационных свойствах эритроцитов подгруппы А2(Н), при малом количестве эритроцитов РГА идет замедленно, что может привести к неправильной трактовке результата;

г) нарушением продолжительности наблюдения не менее 5 минут, хотя РГА может проявиться в течение 10 секунд, особенно при выявлении слабого агглютиногена А2.

Трудноопределимость групп крови обусловлена:

а) наличием подгрупп крови с агглютиногенами А1 и А2 и соответствующих агглютининов, что не вызывает посттрансфузионных осложнений, но проявляется в пробе на индивидуальную совместимость;

б) неспецифической агглютинацией эритроцитов стандартными сыворотками всех групп, что наблюдается при аутоиммунных заболеваниях и требует определения группы крови в специализированной лаборатории;

в) явлением кровяного химеризма после многократных трансфузий эритроцитов 0(1) группы реципиентам другой группы или трансплантации аллогенного костного мозга;

г) изменением свойств эритроцитов при различных патологических состояниях: сепсисе, ожогах, циррозе печени с аутоагглютинабельностью эритроцитов, сниженной агглютинабельности у больных лейкозами.

Сомнительный результат определения группы крови требует перепроверки с использованием дополнительных стандартных реагентов другой серии или направления образца крови в специализированную лабораторию

.» ч.

Определение резус-принадлежности.

1. Определение манипуляции: установление резус-принадлежности эритроцитов крови по наличию или отсутствию агглютиногена-D.

2. Показания: необходимо в предоперационном и дородовом периодах, при донорстве крови, переливании эритроцитных концентратов.

3. Противопоказаний не существует

4. Оснащение: реагенты анти-резус (сыворотки анти-D, цоликлоны анти-D), коллоидные среды (альбумин, 10% желатин, 33% полиглюкин или их комбинации), пластинки или планшеты со смачиваемой поверхностью, стеклянные палочки, пробирки, маркер, таймер, физиологический раствор, перчатки, аптечка первой помощи.

5. Техника выполнения: наносят большую каплю (около 0,1 мл) реагента анти-резус на пластинку или планшет. Наносят рядом маленькую каплю (0,02-0,03 мл) исследуемых эритроцитов и тщательно смешивают реагент с эритроцитами стеклянной палочкой. Периодически покачивая пластинку, наблюдают РГА в первые 30 сек., окончательный результат учитывают по истечению 3 минут. При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус-положительная, при отсутствии - как резус-отрицательная. Для определения резус-принадлежности экспресс-методом на плоскости при комнатной температуре могут быть использованы поликлональные сыворотки анти-D с неполными антителами, приготовленные в комбинации с коллоидами (альбумин, полиглюкин). Результат при этом учитывается сравнением с контрольной сывороткой, не содержащей анти- резусных антител, после внесения в обе капли по истечению 5 минут наблюдения физиологического раствора для исключения ложной агглютинации.

Метод конглютинации в пробирке предусматривает использование реагентов, содержащих неполные поликлональные антитела (сыворотка анти-D) или неполные моноклональные антитела (цоликлоны анти-D) в смеси с коллоидами (10% желатин или 33% полиглюкин).

Метод конглютинации с 10% желатином: в 2 пробирки вносят по 00,2-00,3 мл осадка эритроцитов, для чего выдавливают из пипетки небольшую каплю эритроцитов и касаются ею дна пробирки. Затем в первую пробирку добавляют 2 капли желатина (0,1 мл) и 2 капли (0,1мл) реагента, во вторую (контрольную) пробирку добавляют 2 капли (0,1мл) желатина и 2 капли (0,1мл) физиологического раствора.

Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, после чего их помещают в водяную баню на 15 минут или термостат на 30 минут при температуре +46-48°С. По истечению указанного времени в пробирки добавляют по 5-8 мл физиологического раствора и перемешивают содержимое путем 1-2-кратного переворачивания пробирок.

Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооруженным глазом или через лупу. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что исследуемый образец крови резус-положительный, отсутствие агглютинации - о том, что испытуемая кровь резус-отрицательная. В контрольной пробирке агглютинация эритроцитов должна отсутствовать.

Ускоренный метод определения резус-принадлежности в пробирке при комнатной температуре полагает смешивание в пробирке капли эритроцитов с универсальным реагентом, представляющим собой сыворотку анти-D с неполными антителами, разведенную 33% полиглюкином. Результат читается невооруженным глазом в тонком слое реагирующей смеси, распределенной по стенкам пробирки через 3 минуты. Ложная агглютинация исключается добавлением 4-6 мл физиологического раствора и перемешиванием путем переворачивания пробирки. Наличие устойчивой РГА говорит о том, что исследуемые эритроциты резус- положительные, отсутствие агглютинации - о том, что эритроциты резус- отрицательные.

6. Ошибки при определении резус-принадлежности эритроцитов могут быть техническими, аналогичными указанным в методике определения групповой принадлежности крови по АВО, или трудности могут быть связаны со слабостью агглютиногена D (слабо-положительный резус), или с влиянием других агглютиногенов крови. Сомнения в результате исследования требуют проверки альтернативными методами или отправки образца крови в специализированную лабораторию

.

Определение группы крови цоликлонами.

1. Определение манипуляции: современный способ определения группы крови по системе АВО.

2. Показания: определение группы крови по АВО в предоперационном периоде, при гемотрансфузиях, донорстве крови и пересадке органов и тканей.

3. Противопоказаний не существует.

4. Оснащение: набор цоликлонов анти-А, анти-В, анти-АВ, пластинка со смачивающейся светоотражающей поверхностью, пипетки, стеклянные палочки, физиологический раствор, маркер, таймер, перчатки, аптечка первой помощи.

5. Техника выполнения: на пластинку в три точки под обозначениями анти- А, анти-В, анти-АВ помещают по 2 капли реагентов и рядом по одной капле осадка эритроцитов 0,02-0,03 мл. После перемешивания пластинку покачивают в течение 3-х минут, наблюдая за ходом РГА. По истечении времени в реагирующую смесь добавляют по 1 -2 капли физиологического раствора для снятия возможной неспецифической агрегации эритроцитов. Группу крови оценивают как 0(1) при отсутствии РГА во всех реагентах, как А(Н) при агглютинации в цоликлоне анти-А, как В(Ш) при агглютинации в цоликлоне анти-В, как AB(IV) при агглютинации во всех реагентах. В этом случае для исключения неспецифической агглютинации эритроцитов каплю крови смешивают с каплей физиологического раствора и, при отсутствии РГА там, оценивают как AB(IV) окончательно.

Возможные ошибки обусловлены техническими причинами и трудностями аналогичными тем, что встречаются при использовании для определения группы крови стандартных гемагглютинирующих сывороток, но встречаются значительно реже в виду высокого титра и специфичности моноклональных антител