2. Какие основанные на антителах тесты вы можете купить в аптеке?

Тест-системы, основанные на тех же принципах, что и ИФА, это например тесты на беременность и тесты на присутствие наркотиков, таких как кокаин или марихуана.

Лабораторный протокол в картинках

Список для проверки рабочих мест. Одно рабочее место рассчитано на 4 учеников

Предмет	Содержимое	Количество	()
Желтые пробирки	Образцы для анализа (0.25 мл)	4 шт (по 1 на ученика)	
Фиолетовая пробирка (+)	Положительный контроль (0.5 мл)	1 шт	
Синяя пробирка (-)	Отрицательный контроль (0.5 мл)	1 шт	
Зеленая пробирка (П.А.)	Первичные антитела (1.5 мл)	1 шт	
Оранжевая пробирка (В.А.)	Вторичные антитела (1.5 .мл)	1 шт	
Коричневая пробирка (Субстрат)	Субстрат пероксидазы (ТМБ) 1.5 мл	1 шт	
12-луночные стрипы		2 шт	
Микропипетка		1 шт	
Желтые носики для микропипетки		10-20 шт	
Одноразовые пластиковые пипетки		1 шт	
70-80 мл промывочного буфера в стакане	Фосфатно-солевой буфер (PBS), содержащий 0.05% Твин 20	1 шт	
Большая пачка бумажных полотенец		2	
Черный фломастер (маркер)		1 шт	

1. Подпишите желтую микроцентрифужную пробирку вашими инициалами (именем).

2. В озьмите ваш 12-луночный стрип. Подпишите первые три лунки «+» (это будет положительный контроль), следующие три лунки «-» (отрицательный контроль). Следующие шесть лунок предназначаются для вашего опыта и опыта вашего напарника по работе (по три)

3. Ч истым носиком перенесите по 50 мкл положительного контроля в первые три («+») лунки.

4. Чистым носиком перенесите по 50 мкл отрицательного контроля в следующие три («-») лунки.

5. Вместе с вашим напарником перенесите по 50 мкл ваших образцов в подписанные вашими именами лунки. Обязательно используйте чистый носик для каждого образца!

6. П одождите 5 минут, для того чтобы все белки в составе образца связались с плашкой.

7. ПРОМЫВКА:

А. Переверните стрип, положите его на пачку бумажных полотенец и легонько постучите по дну. Убедитесь, что брызги не попали обратно в лунки.

Б. Выкиньте верхнее полотенце.

В. Чистой пипеткой заполните каждую лунку буфером для промывки, стараясь не переливать его через стенки. Для всех стадий промывки можно использовать одну и ту же одноразовую пипетку.

Г. Опять положите стрип на пачку полотенец и постучите по дну.

Д. Выкиньте 2-3 верхних полотенца (которые промокли).

8. П овторите промывку (шаг 9) еще раз.

9. Чистым носиком добавьте по 50 мкл раствора первичных антител во все 12 лунок.

10. П одождите 5 минут, чтобы антитела могли связаться с антигеном

11. Промойте лунки, повторив процедуру промывки (шаг 9) ДВА раза.

12. Ч истым носиком добавьте по 50 мкл раствора вторичных антител во все 12 лунок.

13. П одождите 5 минут, чтобы вторичные антитела могли связаться с первичными.

14. Промойте лунки, повторив процедуру промывки (шаг 9) ТРИ раза.

15. Чистым носиком добавьте по 50 мкл субстрата пероксидазы во все 12 лунок.

16. Подождите 5 минут. Наблюдайте за тем, что получилось, и запишите ваши результаты.

Руководство для учеников

Введение

Когда вы заболеваете, ваш организм вырабатывает иммунный ответ. Молекулы, в ответ на которые вырабатывается иммунный ответ, это чужеродные молекулы, не встречающиеся в норме в вашем организме. Это могут быть части бактерий, вирусов или грибов. Через несколько дней в вашей крови уже циркулируют миллионы антител – белков, которые распознают антигены и прочно связываются с ними. Антитела нейтрализуют токсины и, с помощью других клеток или молекул иммунной системы, уничтожают чужеродные объекты.

Около 100 лет назад биологи обнаружили, что иммунная система животных реагирует на появление «чужеродных объектов», или антигенов. Сейчас антитела являются незаменимым средством, используемым в научных исследованиях, биотехнологии и для диагностики и лечения заболеваний. Число видов различных антител, циркулирующих в крови, по разным оценкам составляет от ¹⁰⁶ до 10¹¹; это означает, что существует антитело практически на любой возможный антиген. Антитела составляют до 15% общего белка вашей сыворотки крови. Антитела необычайно специфичны: каждое из них узнает только свой антиген.

А) Структура иммуноглобулина (антитела) IgG, связанного со своим антигеном – капсидным белком ВИЧ p24, определенная с помощью рентгеноструктурного анализа (Harris et al., 1998, Momany et al., 1996). Эти структуры можно найти в базе данных PDB (Protein Data Bank, www.pdb.ufmg.br (Berman et al., 2000)) по кодам 1IGY и 1AFV и просмотреть на компьютере с помощью бесплатных программ, таких как JMol, Rasmol, Protein Explorer. Б) Распространенное схематичное изображение антитела, связанного с антигеном.

Как делаются антитела?

У ченые научились использовать иммунный ответ животных для того, чтобы производить антитела для диагностики и лечения болезней, а также для научных целей. Наука, изучающая иммунную систему, называется «иммунология». Животным, таким как куры, кролики, козы, овцы, лошади и др. можно ввести антиген (это называется «иммунизацией») и через какое-то время сыворотка «иммунизированных» животных будет содержать антитела к этому антигену. Если антиген имел отношение к агенту, вызывающему болезнь, полученные антитела можно использовать для диагностических тестов на данную болезнь. Антитела, узнающие антиген, в иммунологических тестах называются «первичными» антителами, они придают специфичность тесту. Другие виды антител, в том числе вторичные антитела, делаются таким же образом. Вторичные антитела узнают и связывают первичные антитела, которые являются антителами другого вида животных. Для того, чтобы их получить, животных иммунизируют антителами, полученными из другого вида животных. Они узнаются иммунной системой как чужеродные белки, и на них вырабатываются антитела. Например, для того ,чтобы получить вторичные антитела, узнающие первичные человеческие антитела, человеческие антитела можно ввести в животное, например, в кролика. После того, как у кролика выработается иммунный ответ, его сыворотка будет содержать антитела, которые будут узнавать человеческие антитела и связываться с ними. Вторичные антитела, используемые в данной работе, конъюгированы (ковалентно связаны) с ферментом пероксидазой хрена. Пероксидаза катализирует окисление субстрата, ТМБ, перекисью водорода, в результате чего образуется окрашенный в синий продукт.

Как ИФА используется в реальной жизни?

Благодаря своей быстроте, ИФА нашел широкое применение в сельском хозяйстве и медицине. ИФА используют в тестах на беременность и на наркотики, для диагностирования заболеваний у человека, животных и растений, для тестирования качества воздуха в помещениях и правильности маркировки пищевых продуктов. При появлении новых опасных заболеваний, таких как атипичная пневмония, одной из первых задач является создание быстрых и п ростых тестов на то, заражен ли пациент вирусом.

Некоторые тесты могут дать положительный или отрицательный результат в течение нескольких минут. Например, домашние тесты на беременность основаны на принципах, очень похожих на ИФА. Они детектируют человеческий хорионный гонадотропин (ХГЧ) – гормон, который появляется в крови и моче беременной женщины через несколько дней после оплодотворения. Ближе к нижнему краю на тестовую полоску нанесены антитела к ХГЧ, связанные с розовым красителем (шаг 1). После того, как нижний край полоски погружается в мочу, жидкость начинает подниматься наверх под действием капиллярной силы, вместе с ней перемещаются и антитела. Если в моче содержится ХГЧ, он связывается с антителами (шаг 2). Когда комплексы достигают первой тестовой зоны, они связываются с антителами к ХГЧ, фиксированными на полоске, и концентрируются в виде розовой полосы (шаг 3). На полоске всегда есть внутренний контроль в виде фиксированных вторичных антител (узнающих антитела к ХГЧ как связанные, так и не связанные с антигеном) (шаг 4). Таким образом, любой работающий тест дает одну розовую полосу, но только при положительном результате теста можно увидеть две полосы.

Зачем нужны контроли?

Положительный и отрицательный контроли являются необходимой частью любого теста. Они позволяют нам убедиться в том, что тест работает корректно. Положительный контроль это образец, в котором заведомо содержится исследуемый антиген, а отрицательный контроль – заведомо чистый образец.

Ваша задача сегодня

Вам будут предоставлены средства и экспериментальный протокол для выполнения ИФА. Вам будет дан образец, который вам надо будет проверить на наличие антигена. Вам также будут предоставлены контрольные образцы (положительный и отрицательный контроли).

Давайте приступим к работе.

Основные шаги в тесте ИФА на присутствие антигена

Шаг 1: Добавить ваши образцы и контроли в лунки плашки. Ваши образцы содержат много разных белков и могут содержать или не содержать антиген. Подождите 5 минут, чтобы дать возможность всем белкам за счет гидрофобных взаимодействий связаться со пластиком плашки.

Шаг 2: добавить в лунку антитела против антигена – первичные антитела. Если в вашем образце присутствовал антиген, первичные антитела найдут его молекулы среди всех других молекул, и прочно свяжутся с ними.

Шаг 3: добавить соединенные с ферментом – пероксидазой вторичные антитела (антитела на антитела). Если в образце есть первичные антитела, связанные с антигеном, вторичные антитела свяжутся с ними.

Шаг 4: добавить субстрат пероксидазы, подождать 5 минут, и оценить результаты анализа. Если раствор в лунке станет синим, анализ положительный (в вашем образце присутствует исследуемый антиген). Если раствор останется бесцветным, анализ отрицательный.

Вопросы до лабораторной работы

1. Как иммунная система защищает нас от болезней?

2.Как доктора используют наш иммунный ответ, чтобы защитить нас от болезней?

3. Как вырабатываются антитела в вашем организме?

4. Как производятся антитела для ИФА?

5.Почему важна быстрая диагностика заболеваний?

6.Как расшифровывается ИФА?

7.Зачем в этом тесте используются ферменты?

8.Почему в тесте наряду с опытными образцами нужен положительный и отрицательный контроль?

Лабораторный протокол

Список для проверки рабочих мест. Одно рабочее место рассчитано на 4 учеников

Предмет	Содержимое	Количество	()
Желтые пробирки	Образцы для анализа (0.75 мл)	4 шт (по 1 на ученика)	
Фиолетовая пробирка (+)	Положительный контроль (0.5 мл)	1 шт	
Синяя пробирка (-)	Отрицательный контроль (0.5 мл)	1 шт	
Зеленая пробирка (П.А.)	Первичные антитела (1.5 мл)	1 шт	
Оранжевая пробирка (В.А.)	Вторичные антитела (1.5 .мл)	1 шт	
Коричневая пробирка (Субстрат)	Субстрат пероксидазы (ТМБ) 1.5 мл	1 шт	
12-луночные стрипы		2 шт	
Микропипетка		1 шт	
Желтые носики для микропипетки		10-20 шт	
Одноразовые пластиковые пипетки		1 шт	
70-80 мл промывочного буфера в стакане	Фосфатно-солевой буфер (PBS), содержащий 0.05% Твин 20	1 шт	
Большая пачка бумажных полотенец		2	
Черный фломастер (маркер)		1 шт	

Выполнение ИФА

1. Подпишите желтую микроцентрифужную пробирку вашими инициалами (именем). Возьмите ваш 12-луночный стрип. Подпишите первые три лунки «+» (это будет положительный контроль), следующие три лунки «-» (отрицательный контроль). Следующие шесть лунок предназначаются для вашего опыта и опыта вашего напарника по работе (по три), подпишите их вашими инициалами. Например, Митя Гиляров и Аня Лопатина подписали бы свои лунки так:

2. Для связывания антигена:

а. Чистым носиком перенесите по 50 мкл положительного контроля из фиолетовой пробирки в первые три («+») лунки.

б. Чистым носиком перенесите по 50 мкл отрицательного контроля из синей пробирки в следующие три («-») лунки.

в. Вместе с вашим напарником перенесите по 50 мкл ваших образцов в подписанные вашими именами лунки. Обязательно используйте чистый носик для каждого образца!

3. Подождите 5 минут, для того чтобы все белки в составе образца связались с плашкой.

4. Промойте лунки:

А. Переверните стрип, положите его на пачку бумажных полотенец и легонько постучите по дну. Убедитесь, что брызги не попали обратно в лунки.

Б. Выкиньте верхнее полотенце.

В. Чистой пипеткой заполните каждую лунку буфером для промывки из стакана, стараясь не переливать его через стенки. Для всех стадий промывки можно использовать одну и ту же одноразовую пипетку.

Г. Опять положите стрип на пачку полотенец и постучите по дну.

Д. Выкиньте 2-3 верхних полотенца (которые промокли).

5. Повторите всю процедуру промывки (шаг 7) еще раз.

6. Чистым носиком добавьте по 50 мкл раствора первичных антител («П.А».)из зеленой микропробирки во все 12 лунок.

7. Подождите 5 минут, чтобы антитела могли связаться с антигеном

8. Промойте лунки, повторив процедуру промывки ДВА раза.

9. Чистым носиком добавьте по 50 мкл раствора вторичных антител («В.А.») из оранжевой пробирки во все 12 лунок.

10. Подождите 5 минут, чтобы вторичные антитела могли связаться с первичными.

11. Промойте лунки, повторив процедуру промывки ТРИ раза.

12. Чистым носиком добавьте по 50 мкл субстрата пероксидазы («Субстрат») из коричневой пробирки во все 12 лунок.

13. Подождите 5 минут. Наблюдайте за тем, что получилось, и запишите ваши результаты.

Результаты

О бозначьте лунки на картинке так же, как лунки в вашем эксперименте и напишите «+» на тех лунках, которые стали синими и «-» - на тех, которые остались бесцветными.

Результат вашего анализа положительный или отрицательный? Объясните ваш ответ.

Вопросы к лабораторной работе

1. Содержал ли ваш образец антиген?

2. Образцы, которые вы добавляете в лунки плашки, содержат множество разных белков, а также могут содержать или не содержать антиген. Что случится с белками в составе образца в лунке в случае, если образец содержит антиген? Если не содержит?

3. Почему необходимо на каждом этапе промывать лунки?

4. Что происходит, когда вы добавляете первичные антитела к образцам, содержащим антиген? Не содержащим антиген?

5. Что происходит, когда вы добавляете вторичные антитела к образцам, содержащим антиген? Не содержащим антиген?

6. Если ИФА дал отрицательный результат по агенту, вызывающему болезнь, означает ли это, что у вас нет данной болезни? По каким причинам результат может быть отрицательным в случае если вы на самом деле больны?

7. Почему вы проводите анализ ваших образцов в трех повторностях?

8. Какие основанные на антителах тесты вы можете купить в аптеке?

Протокол III: ИФА для обнаружения антител

Руководство преподавателя

Этот протокол симулирует диагностический тест на наличие определенных антител в сыворотке крови. Ученикам даются образцы (предполагается, что это образцы сыворотки крови) и они с помощью ИФА определяют присутствие в них антител (антител к каким-то возбудителям болезней, сигнализирующим о заражении этой болезнью). Вы можете придумать любую болезнь, которая будет интересна вам и ученикам (ВИЧ, атипичная пневмония, трихинеллез, туберкулез, клещевой энцефалит и др.). Такой метод диагностики используется, когда антиген по какой-то причине не детектируется с помощью ИФА, но организм уже начал вырабатывать антитела и их можно обнаружить. Например, до недавнего времени, ВИЧ можно было диагностировать только с помощью такого теста. Сейчас, благодаря большим усилиям и вложениям средств в исследования по ВИЧ, стало возможно непосредственно определять антиген ВИЧ в крови с помощью ИФА, что позволяет обнаружить вирус на более ранней стадии, быстрее начать лечение и продлить жизнь больным.

Чтобы лучше подготовиться к урокам и придумать интересный контекст для работы, прочитайте это руководство и приложения А, Б и В.

План уроков

Урок 1	Подготовка к работе	Лекция и обсуждение
Урок 2	Лабораторная работа по ИФА

Общий план работы

Шаг 1: с помощью микропипетки 50 мкл раствора очищенного антигена к исследуемым антителам, добавляется в лунки плашки и инкубируется 5 минут, чтобы дать возможность белкам в составе образца связаться со стенками лунки. Затем лунки промываются промывочным буфером (PBST: фосфатно-солевой буфер, содержащий 0.05% Твин 20) который кроме того блокирует оставшиеся свободными возможные места связывания для белков в лунке.

Шаг 2: в лунки добавляется 50 мкл исследуемого «образца сыворотки» (раствора, которые может содержать первичные антитела), а также положительный и отрицательный контроли (растворы, заведомо содержащие и не содержащие первичные антитела) и инкубируется 5 мин при комнатной температуре. Первичные антитела узнают антигены и связываются с ними. Затем лунки опять промываются промывочным буфером, чтобы удалить несвязавшиеся антитела.

Шаг 3: в каждую лунку добавляется 50 мкл раствора вторичных антител, конъюгированных с пероксидазой и инкубируется 5 мин. Вторичные антитела узнают первичные антитела (например, человеческие антитела, если вы симулируете диагностику определенной болезни) и связываются с ними. Пероксидаза это фермент, который окисляет хромогенный субстрат, что изменению его цвета. Лунки промываются PBST чтобы удалить несвязавшиеся вторичные антитела.

Ш аг 4: в каждую лунку добавляется 50 мкл раствора субстрата (ТМБ) и ученики наблюдают за развитием окраски. Если в образце присутствовали первичные антитела к антигену («положительный дианоз»), то в данной лунке также будет присутствовать пероксидаза, и в течение 5 минут раствор в лунке посинеет. Если антител в образце не было, раствор останется бесцветным.

Типичные результаты ИФА

Подготовка преподавателя к лабораторной работе

Этот раздел предназначен для того, чтобы вы хорошо подготовились к предстоящей работе. Мы рекомендуем вам прочитать все руководство (Протокол III) перед тем, как приступать к работе. Используйте информацию из приложения В, если вы хотите использовать сценарий урока, связанный с конкретной болезнью.

Самым важным для успеха работы будет, чтобы ученики капали в лунки нужные растворы в нужном порядке, поэтому подписывайте пробирки четко и понятно. Используйте пробирки разных цветов, как указано ниже.

Задачи

Шаг 1 Приготовить буферные растворы

Шаг 2 Приготовить 50x стоковые растворы антитела, первичных и вторичных антител

Шаг 3 Развести стоковые растворы

Шаг 4 Приготовить порции (аликвоты) растворов для рабочих мест учеников

Шаг 5 Подготовить рабочие места

Необходимое время

1-3 часа

Мы рекомендуем разводить сухой антиген и первичные антитела не раньше чем за 3 дня до начала работы, а вторичные антитела – в течение 24 часов перед началом работы. Также мы рекомендуем использовать стерильную дистиллированную воду для приготовления однократного PBS, чтобы избежать заражения реагентов. Растворы антител и антигена должны храниться на льду или на +4°С в холодильнике, если они приготовлены более чем за 4 часа до начала работы.

Внимание: если вы планируете использовать набор для проведения нескольких занятий в течение 1-2 недель, мы настоятельно рекомендуем использовать стерильную воду для приготовления PBS! Воду можно стерилизовать в 5-минутным кипячением в микроволновой печи в неплотно закрытой бутылке; когда вы вынете бутылку из микроволновки, дайте ей остыть, потом закрутите крышку. Разводите концентрированные растворы антигена и антител строго в том количестве, какое вам потребуется для урока. Оставшиеся стоковые растворы храните в холодильнике на 4°С, их можно использовать в течение двух недель. Не замораживайте растворы.

Измерение объема

Этот набор содержит одноразовые пластиковые пипетки для измерения объемов от 250 мкл до мл. Соответствующие отметки на пипетке показаны на рисунке. Чтобы добавить несколько миллилитров, просто добавьте нужное число раз по миллилитру. Вам также понадобятся микропипетки для добавления объема в 50 мкл. Для каждого шага подготовки к работе, используйте новую одноразовую пипетку или чистый носик для микропипетки.

Для измерения объема пенящихся жидкостей, содержащих детергент, отмеривайте объем по границе жидкости и пузырей.

Протокол III: пошаговое руководство для подготовки

Рассчитано на подготовку 12 рабочих мест, каждое для 4 учеников

Реагенты в составе набора	Необходимое количество
Антиген, куриный гамма-глобулин, сухой	1 флакон
Первичные антитела, кроличьи анти-куриные поликлональные антитела, сухие	1 флакон
Вторичные антитела, козлиные анти-кроличьи антитела, конъюгированные с пероксидазой, сухие	1 флакон
Субстрат пероксидазы (ТМБ)	1 банка
10х фосфатно-солевой буфер (PBS)	1 банка
10% Твин 20	1 банка
Дополнительные реагенты
Дистиллированная вода (рекомендуется стерильная вода)	1 л

Шаг 1. Приготовьте буферные растворы

Мы рекомендуем вам использовать градуированные цилиндры на 100 мл и на 1 л для приготовления растворов. Вам также понадобится 1 л дистиллированной воды.

Буфер	Объем	Реагент	Используется для
1х PBS, 100 мл	90 мл	Дистиллированная вода	Приготовления стоковых (50x) растворов антигена, первичных и вторичных антител и для разведения 50х раствора антигена
	10 мл	10х PBS
Промывочный буфер, 900 мл	805 мл	Дистиллированная вода	Разведение 50x растворов антител Промывка плашек Положительный и отрицательный контроли Положительные и отрицательные образцы учеников
	90 мл	10х PBS
	4.5 мл	10% Твин 20

Шаг 2. Приготовьте стоковые растворы антигена и антител

Осторожно откройте флаконы с лиофилизованными антигеном и антителами и чистой пипеткой добавьте 0.5 мл 1x PBS в каждый из них. Закройте флаконы и хорошо перемешайте. Получившиеся растворы это 50-кратные концентраты, или «стоковые» растворы. Внимание: на этом этапе не используйте промывочный буфер.

Шаг 3. Разведите 50-кратные растворы

Подготовьте по 50 мл бутылке или пробирке для каждого из растворов. Используйте чистую пипетку, чтобы добавить нужное количество концентрированного стокового раствора в соответствующую бутылку или пробирку.

Раствор	Объем	Реагент	Используется для
1х антиген	24.5 мл	1х PBS	Очищенный антиген
	0.5 мкл	50x антиген
	Внимание: не добавляйте раствор, содержащий Твин 20 в раствор антигена, иначе эксперимент не будет работать
1х раствор первичных антител («1х сыворотка»)	24.5 мл	Промывочный буфер	Положительный контроль Положительные образцы учеников
	0.5 мл	50х кратный раствор первичных антител
	С помощью пипетки промойте флакон с 50х раствором антител приготовленным однократным раствором, чтобы смыть остатки стокового раствора со стенок Закройте бутыль или пробирку с приготовленным раствором крышкой и хорошо перемешайте
1х раствор вторичных антител	24.5 мл	Промывочный буфер	Вторичные антитела
	0.5 мл	50х раствор вторичных антител
	Разводите вторичные антитела не ранее чем за сутки до начала работы С помощью пипетки промойте флакон с 50х раствором антител приготовленным однократным раствором, чтобы смыть остатки стокового раствора со стенок Закройте бутыль или пробирку с приготовленным раствором крышкой и хорошо перемешайте

Шаг 4. Приготовьте аликвоты растворов для обеспечения всех рабочих мест

Пробирки		Описание	Подписать	Содержимое
Фиолетовые пробирки, 12 шт		Положительный контроль	«+»	0.5 мл раствора первичных антител («сыворотки»)
Синие пробирки, 12 шт		Отрицательный контроль	«-»	0.5 мл 1х PBS
Зеленые пробирки, 12 шт		Очищенный антиген	«Антиген»	1.5 мл 1х раствора антигена
Оранжевые пробирки, 12 шт		Вторичные антитела	«В.А.»	1.5 мл 1х раствора вторичных антител
Коричневые пробирки, 12 шт		Субстрат пероксидазы (ТМБ)	«Субстрат»	1.5. мл раствора ТМБ
		Внимание: ТМБ чувствителен к свету, поэтому важно хранить его именно в темных пробирках.
Желтые пробирки	Положительные образцы		Выберите сами*	0.25 мл 1х раствор первичных антител «сыворотка»
	Отрицательные образцы		Выберите сами*	0.25 мл промывочный буфер
	Мы рекомендуем вам сделать половину образцов «положительными» т.е., содержащими первичные антитела, и половину «отрицательными». Тем не менее, вы можете выбрать любую пропорцию. Перемешайте пробирки, и пусть каждый ученик получит один образец.
* Вы можете подписать все пробирки, чистые и содержащие антиген, цифрами, например, от 1 до 48, и отметить, какие из них содержат антиген.

Шаг 5. Подготовьте рабочие места учеников

Список для проверки рабочих мест. Одно рабочее место рассчитано на 4 учеников

Предмет	Содержимое	Количество	()
Желтые пробирки	Образцы для анализа (0.25 мл)	4 шт (по 1 на ученика)	
Фиолетовая пробирка (+)	Положительный контроль (0.5 мл)	1 шт	
Синяя пробирка (-)	Отрицательный контроль (0.5 мл)	1 шт	
Зеленая пробирка (Антиген)	Очищенный антиген (1.5 мл)	1 шт	
Оранжевая пробирка (В.А.)	Вторичные антитела (1.5 .мл)	1 шт	
Коричневая пробирка (Субстрат)	Субстрат пероксидазы (ТМБ) 1.5 мл	1 шт	
12-луночные стрипы		2 шт	
Микропипетка		1 шт	
Желтые носики для микропипетки		10-20 шт	
Одноразовые пластиковые пипетки		1шт	
70-80 мл промывочного буфера в стакане	Фосфатно-солевой буфер (PBS), содержащий 0.05% Твин 20	1 шт	
Большая пачка бумажных полотенец		2	
Черный фломастер (маркер)		1 шт	

Где можно остановиться: эта работа может быть выполнена за один урок, но вы можете остановиться в любом месте, добавив буфер для промывки в лунки (после добавления антигена и перед добавлением субстрата пероксидазы) и убрать все реагенты и плашки на +4ºС

Ответы на вопросы и темы для обсуждения для учителей

Вопросы до лабораторной работы