18Ед. Карбоангидразы (по Раутану и Мальдруму). После деления

числа единиц карбоангидразы на показатель гематокрита получа-

ется так называемый индекс карбоангидразы, который у здоровых

особей составляет 0,32—0,39 и имеет весьма высокую стабиль-

ность.

Активность карбоангидразы понижена при анемиях, однако

индекс карбоангидразы при этом обычно повышен как показатель

увеличения насыщенности эритроцитов энзимом по сравнению с

нормой. Снижение карбоангидразной активности бывает при де-

компенсированных пороках сердца, сопровождающихся общим

цианозом, а также при желтухе.

Активность карбоангидразы крови определяют по методу

Мальдрума и Раугана. Единица активности — количество фермен-

та, сокращающее в стандартных условиях время реакции наполо-

вину.

Рибонуклеаза представляет собой термостабильный фермент,

расщепляющий рибонуклеиновую кислоту (РНК). Она имеется в

поджелудочной железе, панкреатическом соке, печени, селезенке,

почках и полиморфноядерных лейкоцитах. Для ДНК она неактив-

на. Температурный оптимум рибонуклеазы близок к 60 "С, а рН

около 7,6 (активность сохраняется при рН от 5,0 до 6,0). Актива-

тором энзима являются ионы магния. При 85 "С активность фер-

мента исчезает, но после охлаждения полностью восстанавливает-

ся. При лейкемиях содержание рибонуклеазы в моче повышается,

а в сыворотке крови удерживается в пределах нормы. Повышение

активности рибонуклеазы сыворотки крови выражено при уре-

мии.

Активность рибонуклеазы сыворотки крови определяют по ме-

тоду Куница, а также Фирса и Миллера.

Пептидазы (карбоксипептидаза, аминопептидаза, пролиназа и

пролидаза) принадлежат к пептидазам, катализирующим гидролиз

продуктов распада белков — полипептидов, под действием кото-

рых они гидролизуются до аминокислот. Пептидазы вырабатыва-

ются в слизистой оболочке тонких кишок и выделяются с кишеч-

ным соком. В составе пептидаз обычно выделяют карбоксипепти-

дазу, аминопептидазу, пролиназу и пролидазу, обладающие боль-

шой специфичностью действия.

Повышение уровня пептидаз в крови отмечается при массив-

ных поражениях тканей (обширные ожоги), лобарной пневмонии,

переломах костей, раке и лейкемиях. Повышение их активности

обычно имеет место при острых и подострых воспалениях печени,

обтурационной желтухе, гломерулонефрите, что широко исполь-

зуется при их диагностике. После обработки четыреххлористым

углеродом отмечается закономерное повышение зеркала пептидаз

в крови жвачных.

Определение активности карбоксипептидазы основано на

способности ее освобождать карбоксильные группы, прирост

содержания которых определяется титрометрически. Ход опре-

деления: в две колбочки (проба и контроль) вносят по 1 мл пре-

парата фермента и 10 мл буферного раствора с рН 8,0. Содержи-

мое контроля нагревают до кипения. В обе колбочки вносят по

5 мл гидролизата эдестина и ставят в термостат при 37 °С на 1 ч,

затем нагревают до кипения. В обе колбочки вносят по 0,5 мл

0,1%-ного раствора фенолфталеина и титруют до одинаково ро-

зовой окраски 0,02 н. раствором натрия гидроксида (едкого на-

трия).

За единицу активности карбоксипептидазы принимают актив-

ность, при которой за 10 мин освобождается такое количество

карбоксильных групп, которое соответствует 1 мл 0,02 н. раствора

натрия гидроксида.

Определение активности аминопептидазы сыворотки крови

методом Грина в модификации Гольдберга основано на колори-

метрическом вычислении количества р-нафталамина, освобож-

денного аминопептидазой из субстрата а-лейцин-р-нафтилами-

да.

Глютаматдегидрогеназа. Определение ее активности основано

на том, что дегидрогеназа катализирует обратимую реакцию пре-

вращения ос-кетоглютаминовой кислоты в сс-кетоглютаровую. На

стадии а-кетоглютаровой кислоты в цикле трикарбоновых кислот

возможен выход этой кетокислоты из цикла и превращение ее в

а-глютаминовую кислоту посредством аминирования за счет сво-

бодного аммиака или обратимой реакции переаминирования.

Фермент содержится прежде всего в печени, миокарде, почках.

Содержание дегидрогеназы глютаминовой кислоты (глютаматде-

гидрогеназы) в лейкоцитах при лимфоидном и миелоидном лей-

козах в 4—5 раз выше, чем у здоровых животных, но повышается

при заболеваниях печени (гепатит, цирроз), отравлении четырех-

хлористым углеродом.

Методика определения активности глютаматдегидрогеназы ос-

нована на ее воздействии на глютаминовую кислоту при рН 7,6 и

температуре 37 °С в присутствии никотинамидадениндинуклеоти-

да. Увеличение экстинкции при 340 нм во время перехода оксиди-

рованной формы кофермента в редуцированную является пропор-

циональным концентрации фермента.

Фруктозо(кетозо)-1-фосфатальдолаза содержится в клетках пе-

чени наряду с 1,6-дифосфатальдолазой (альдолазой) и расщепляет

фруктозе-1-фосфат на фосфодиоксиацетат и альдегид глицерина.

У здоровых животных фруктозо-1-фосфатальдолаза обычно отсут-

ствует или имеется в незначительных количествах, но обнаружи-

вается в сыворотке крови при остром гепатите, что является важ-

ным диагностическим тестом в подобных случаях, более ранним,

чем повышение активности альдолазы. Кроме того, альдолаза в

отличие от этого энзима обнаруживается в различных органах

при их патологии. Следует отметить, что появление и повыше-

ние активности фруктозо-1-фосфатальдолазы в сыворотке крови

свидетельствует о поражении паренхимы печени при условии,

что исключается заболевание почек, также вызывающее активи-

зацию этого фермента. По зеркалу фруктозо-1-фосфатальдолазы

в сыворотке крови можно судить о течении болезни, при насту-

пающем выздоровлении ее активность снижается и исчезает со-

всем. Активность фермента обычно измеряют по степени пре-

вращения восстановленной формы никотинамидадениндинукле-

отида (НАД • Н) в никотинамидадениндинуклеотид (НАД) в па-

раллельной обменной реакции:

Активность сывороточной фруктозо-1-фосфатальдолазы опре-

деляют с помощью оптического теста Варбурга.

Креатинфосфокиназа (креатинкиназа) катализирует обратимую

реакцию:

Она содержится только в мышечной ткани, особенно попереч-

нополосатой, что делает повышение ее активности патогномонич-

ным для повреждения миокарда, а также скелетных мышц. Ин-

фекционные и токсические миокардиты обычно протекают со

значительной гиперкреатинфосфокиназемией.

Активность креатинфосфокиназы в сыворотке крови определя-

ют по методу Миллера. Принцип метода состоит в образовании в

сильнокислой среде креатина и фосфата из креатинфосфата. За-

тем колориметрически измеряют образовавшийся при этом орга-

нический фосфат.

За единицу активности креатинфосфокиназы принимают фер-

ментную активность 1 мл сыворотки крови, которая в стандарт-

ных условиях расщепляет за 1 мин 1 мкмоль/л фосфокреатина,

определенного в виде неорганического фосфата.

Определение активности креатинфосфокиназы в сыворотке

крови по методу Эннера и Розенберга в модификации Гринио и

Консисторума основано на образовании под действием фермента

креатина из сыворотки крови в инкубационной смеси, содержа-

щей креатинфосфат и АДФ. Креатин определяют посредством

цветной реакции с а-нафтолом и диацетилом. Об активности эн-

зима судят по количеству образовавшегося креатина, измеряя ин-

тенсивность окраски реактивов.

Активность энзима пропорциональна разности экстинкций

между опытным и контрольным определениями. Расчет произво-

дят по стандартной кривой, построенной по креатину. За единицу

активности принимают ферментную активность, при которой в