1000Мл, 37 °с) можно произвести путем умножения Be на 5,35;
КАена 1,8иВаВена 16,7.
При расчетах необходимо исходить из следующих соотноше-
ний:
Следует также отметить, что кроме гидролитической функции
фосфатазы обладают также способностью переносить фосфатные
остатки , т. е. функцией трансферазы. Донорами в таких реакциях
служит ряд эфиров (фосфокреатин, глюкозо-1-фосфат, п-нитро-
фенилфосфат и др.). Акцепторами остатков фосфорной кислоты
могут быть простые спирты, глицерин, фруктоза, глюкоза и др.
Однако в настоящее время недостаточно ясно, какое значение
имеют реакции подобного типа и в какой степени они могут быть
использованы в диагностическом отношении, так как реакции,
катализируемые фосфатазами, являются равновесными, причем
это равновесие так далеко смещено в направлении гидролиза, что
маловероятно, чтобы эти реакции синтеза фосфатных эфиров
имели значительное физиологическое значение.
Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови определя-
ют по И. М. Белякову. Принцип метода основан на способности
фермента отщеплять при рН 8,6 и температуре 37 °С неорганичес-
кий фосфор от фосфорного эфира р-глицерофосфата натрия. Оп-
ределение активности щелочной фосфатазы заключается в уста-
новлении разности между содержанием неорганического фосфора
(с использованием аскорбинового редуцента) в сыворотке крови
до и после инкубации с р-глицерофосфатом натрия. Активность
фермента выражается в единицах Боданского. Одна единица соот-
ветствует 1 мг фосфора, отщепляемого под действием фермента в
течение 1 ч при температуре 37 °С.
Диастаза (а-амилаза). Определение ее активности в сыворотке
крови нашло широкое применение при диагностике заболеваний
поджелудочной железы. Патогномоничность этого теста сделала
его ценным методом дифференциации особенно острых панкреа-
титов от колик, связанных с желчно-каменной болезнью, язвами
желудка и кишок, острой непроходимостью кишечника. При ост-
ром панкреатите активность энзима возрастает в 10—30 раз по
сравнению с исходным уровнем. При некротических панкреати-
тах активность диастазы падает, так как пораженная некрозом
поджелудочная железа теряет способность продуцировать энзим.
Уровень диастазы в крови понижается также при сахарном диа-
бете, тяжелых ожогах, тиреотоксикозе, отравлении хлороформом,
четыреххлористым углеродом, барбитуратами, после тяжелых
операций. Повышается он при воспалениях слюнных желез, ост-
ром и хроническом холецистите, токсических гепатитах, циррозе
печени.
Одновременное определение активности диастазы в крови и
моче оказалось важным для суждения о состоянии почечной фун-
кции, так как нефрозы, гломерулонефриты, нефроциррозы и т. п.
обычно сопровождаются увеличением активности этого энзима в
крови, в то время как содержание его в моче резко снижается. Та-
ким образом коэффициент активность амилазы крови/активность
амилазы мочи может служить критерием функциональной полно-
ценности почек.
Активность диастазы сыворотки крови определяют по методу
Вольгемута. В тех пробирках, где крахмал не расщепился полнос-
тью, жидкость остается окрашенной в синий цвет, а в пробирках,
в которых крахмал под действием диастазы превратился в декст-
рин, — окрашивается в фиолетовый или желтоватый цвет. Допус-
тим, что содержимое шестой пробирки окрасилось в синий, а пя-
той — в фиолетовый цвет. Тогда результат определяют по пятой
пробирке, в которой, например, было разведение 1 : 32. Разведе-
ние умножают: 32 • 2 = 64. Норма активности по этой методике
около 32.
Альдолаза катализирует реакции расщепления промежуточного
продукта окисления углеводов — 1,6-дифосфорного эфира фрук-
тозы — на фосфотриозы. Фермент осаждается спиртом и ацето-
ном, в высушенном состоянии длительно сохраняет свою актив-
ность. Хорошо растворяется в воде и легко экстрагируется ею из
ацетонового порошка. Альдолаза довольно стабильна, не разруша-
ется в течение 10 мин при 50 "С и инактивируется при нагревании
выше 60—70 °С.
Энзим относительно малочувствителен к небольшим измене-
ниям рН среды. Оптимум его активности зависит от температуры,
рН и наличия в среде ингибиторов и активаторов.
Для определения активности альдолазы в сыворотке крови
существует несколько методов, основанных на различных прин-
ципах.
Саблей и Лянингер разработали наиболее простой метод оп-
ределения активности альдолазы, основанный на образовании
2,4-динитрофенилгидразинов фосфотриоз и колориметрическом
измерении экстинкции раствора, образующейся при добавлении
щелочи при светофильтре 540 нм. Интенсивность окраски про-
порциональна концентрации фосфотриоз. Дауне, Барнет и Байер,
а затем Брукс и сотр. усовершенствовали этот метод.
Повышение активности альдолазы отмечается при мышечных
дистрофиях (некроз сердечной мышцы), декомпенсированных
пороках сердца, инфаркте, поражении печени при отравлении че-
тыреххлористым углеродом (остром гепатите), механической жел-
тухе.
В эритроцитах здоровых животных альдолазы в 70—80 раз
больше, чем в сыворотке крови, поэтому гемолизированная кровь
совершенно непригодна для анализа сыворотки на активность
альдолазы.
Лизоцим (мурамидаза) в организме животных находится в кро-
ви (сыворотка, плазма, лейкоциты, тромбоциты), слезах, слюне,
выделениях из носа, бронхов, желудочном и кишечном соке,
молоке, влагалищном секрете, сперме, экссудатах брюшной по-
лости, плевры и в моче. Небольшие количества имеются в экск-
ретах.
Лизоцим обладает выраженными бактериостатическими свой-
ствами. К его действию весьма чувствительны Вас. micrococcus,
staphylococcus, streptococcus, proteus, но резистентны грамотрица-
тельные микробы. Лизоцим обладает сильным антибактериаль-
ным действием на грамположительные микробы в среде, содержа-
щей угольную кислоту (Н2СО3) и диоксид углерода (СО2). В при-
сутствии комплемента и специфических антител лизоцим дей-
ствует также и на грамотрицательные микробы.
Предложено два метода определения активности лизоцима —
бактериологический (биологический) и вискозиметрический. При
первом методе (Флеминга) измеряется интенсивность уменьше-
ния получения суспензии из Micrococcus lysodeicticus под влияни-
ем лизоцима. Это весьма простой метод, однако менее точный,
чем вискозиметрический, основанный на измерении снижения
вязкости в полисахаридном субстрате. Единицей активности ли-
зоцима считается количество препарата, которое в течение 10 мин
снижает вязкость полисахаридного раствора наполовину. 0,73 у
кристаллического лизоцима из яичного белка содержит одну еди-
ницу активности лизоцима.
Карбоангидраза катализирует обратимую реакцию: СО2 +
+ Н2О о Н2СО3 о Н+ + НСО3-.
Карбоангидраза получена в кристаллическом виде из эритро-
цитов. Энзим теряет активность после нагревания до 60—65 °С че-
рез 30 мин. Это один из наиболее активных ферментов: одна его
молекула может в течение 1 с произвести гидратацию 45 000 моле-
кул диоксида углерода. Оптимум ее активности находится в преде-
лах рН 5,0-9,0.
Основная функция карбоангидразы эритроцитов — стимуля-
ция отдачи СО2 в легких и ускорение приема СО2 из тканей орга-
низма в кровь. Особенно важную роль выполняет Карбоангидраза
в почках при резорбции ионов натрия и поддержании щелочного
резерва крови.
Образующийся при обменных процессах диоксид углерода пе-
реводит энзим в угольную кислоту (Н2СОз), которая затем диссо-
циирует на Н+ и НСО3~. В 10 мл крови животных содержится 14—