22. Количество билирубина в сыворотке крови животных

	Общий б	илирубин	Прямой б	илирубин
Вид животных	мг/100 мл	мкмоль/л	мг/100 мл	мкмоль/л
Коровы	0,11-0,48	1,88-8,21	_	_
Телята 15 -дневные	0,16-1,86	2,74-31,81	0,0-0,72	0,0-14,31
Лошади	0,62-1,42	10,6-24,29	0,04-0,58	0,68-9,92
Овцы	0,0-0,39	0,0-6,67	0,0-0,27	0,0-4,62
Собаки	0,12-0,14	2,05-2,39	—	—
Куры	0,1-0,35	1,71-5,99	—	—
Свиньи	0,0-0,4	0,0-6,84	—	—

Примечание. Коэффициент для пересчета количества билирубина из

мг/100 мл в мкмоль/л равен 17,104.

Билирубинемия (гипербширубинемш) связана с повышением

концентрации непрямого и прямого билирубина или того и дру-

гого.

Повышение содержания непрямого билирубина бывает при ге-

молитических желтухах, когда печень неспособна перерабатывать

в прямой билирубин большое количество непрямого билирубина.

Это отмечается при отравлениях гемолитическими ядами (куколь,

соляник, мышьяк), переливании несовместимой крови.

Повышенное содержание прямого билирубина в сыворотке от-

мечают при механической желтухе. Механическая желтуха разви-

вается при закупорке желчных путей камнями, паразитами, сдав-

ливании новообразованиями, лимфатическими узлами, абсцесса-

ми, а также вследствие их сужения и при воспалении слизистой

оболочки двенадцатиперстной кишки. При этом устанавливают

небольшое увеличение непрямого билирубина.

При паренхиматозной желтухе прямой билирубин попадает в

кровь и его содержание в ней возрастает. Поражение гепатоцитов

ухудшает перевод непрямого билирубина в прямой, что обуслов-

ливает повышение его в крови. При паренхиматозной желтухе в

крови увеличивается концентрация непрямого и прямого билиру-

бина.

ОСНОВЫ КЛИНИЧЕСКОЙ ЭНЗИМОЛОГИИ

(ФЕРМЕНТОЛОГИИ)

•

Интенсивная разработка теоретических основ и практических

аспектов клинической ферментологии в последние десятилетия

позволила получить новые исключительной важности сведения о

строении, свойствах, методах выделения, кинетике и механизме

действия, а также биологических функциях ферментов в норме и

при патологии. Это открыло новую эру в вопросах ранней, докли-

нической идентификации возникающих в организме нарушений

здоровья, позволило на основе высокоспецифичных и чувстви-

тельных тестов получить представление о сущности возникающих

нарушений, их патогенезе, следить за тенденцией развития и ин-

тенсивности их, а также о времени завершения репаративных про-

цессов в стадии реконвалесценции, и судить о витальном и функ-

циональном прогнозе болезней. Установлено, что все виды обме-

на веществ и все обменные реакции протекают при активном уча-

стии ферментов.

На этой основе использование ферментных (энзиматических)

методов лабораторного исследования крови животных, особенно в

условиях перевода животноводства на промышленную технологи-

ческую основу, трудно переоценить, так как чем раньше устанав-

ливают нарушения здоровья, тем своевременней и эффективней

бывают их лечение и профилактика.

Известно, что ферменты имеют белковую природу, молекуляр-

ная структура их еще недостаточно ясна. Поэтому прямых методов

изучения концентрации ферментов в биологических субстратах не

существует, наоборот, широко используются методы косвенного

изучения их констилляций по продуктам специфической актив-

ности, что выражается, как правило, в условных единицах на еди-

ницу объема субстрата при стандартных температурных условиях

и рН. Клиническое значение при этом имеют 3 типа изменений

ферментного зеркала в организме:

1) понижение активности или исчезновение имеющихся в кро-

ви ферментов (гипоферментемия, аферментемия);

2) повышение их активности и концентрации (гиперферменте-

мия);

3) появление в крови ферментов, несвойственных здоровому

организму (неоферментемия).

Клиническая биохимия приводит все большее число примеров,

свидетельствующих о нарушении функций отдельных ферментов

и их координированной деятельности при самых разнообразных,

порой неожиданных, ситуациях и в зависимости не только от па-

тологических, но и от физиологических предпосылок. Кроме того,

выявление гетерогенной природы ряда ферментов, связанное с от-

крытием изоэнзимов (изоферментов), открыло новые возможнос-

ти для использования ферментов в органоспецифической диагно-

стике и терапии. Установлено много ферментов, существующих в

двух и более формах (трансаминазы, энзимы конденсации, изоме-

разы). Как выяснилось, даже такие хорошо известные в клинике

ферменты, как амилаза, фосфатаза, глюкозо-6-фосфатдегидроге-

наза, фосфогексоизомераза, малат- и лактатдегидрогеназа, в орга-

низме животных представлены также в виде нескольких молеку-

лярных структур. Однако, несмотря на эти различия, они сохраня-

ют свою специфичность к субстрату, в каталитическом превраще-

нии которого они участвуют, что и используется при

органоспецифической диагностике и идентификации метаболи-

ческих изменений в организме.

Поскольку процессы обмена по своей сущности являются фер-

ментативными, то принято считать, что в основе патогенеза раз-

личных заболеваний лежат нарушения функций энзиматических

систем.

Ферменты крови (плазмы, сыворотки) по происхождению ус-

ловно можно разделить на 3 группы:

1) собственные ферменты крови, например, энзимы свертыва-

ния крови (протромбин, проакцелерин, проконвертин, факторы

IX — XII), церулоплазмины, холинэстераза и др.;

2) ферменты, поступающие в кровь из различных секретов (ду-

оденальный сок, слюна и т. п.), например амилаза, липаза;

3) клеточные ферменты, появляющиеся в крови при поврежде-

нии или разрушении клеток и тканей организма.

Огромный клинический материал свидетельствует о том, что

ферментологические исследования функционального состояния

органов и систем превышают по чувствительности другие приме-

няемые с этой целью методы.

Вместе с тем недостатком многих ферментологических тестов

сыворотки крови является их неспецифичность. Например, боль-

шинство клеточных ферментов, особенно основных обменных це-

пей (цикл Кребса, гликолитическая цепь, трансаминирование,

дыхательная цепь и т. д.), встречается в большинстве тканей орга-

низма, так что по изменению их констилляций без соответствую-

щих дополнительных комплексных клинико-лабораторных иссле-

дований трудно судить о том, какой орган и в какой степени по-

врежден. Это еще раз подтверждает фундаментальный принцип

того, что в любом случае речь идет не о болезни отдельного органа

или системы, а о болезни организма, сущность которой, патогенез

и степень нарушений можно объективно распознать лишь на ос-

нове комплексного клинического исследования, изучения химиз-

ма, структуры и функций отдельных органов и систем больного

организма в целом.

Каталаза крови (Н2О2: Н2О2-оксиредуктаза) расщепляет двуок-

сид водорода согласно уравнению 2Н2О2 -»2Н2О + О2. В присут-

ствии спиртов обладает способностью переносить кислород.

Окисляет спирты: метанол, этанол, п-пропанол, изопропанол,

изобутанол, гликол и коламин. Благодаря довольно простой мето-

дике определение каталазной активности широко используется в

лабораторной практике. Активность фермента зависит от количе-

ства эритроцитов, поэтому необходим их подсчет для интерпрета-

ции результатов исследования. Высокий индекс каталазной актив-

ности (активность энзима в единице объема крови, деленная на

количество эритроцитов в млн/мм3) отмечается при пернициоз-

ной и других макроцитарных анемиях. Содержание каталазы в

крови при пневмониях, заболеваниях печени (цирроз, гепатит),

сердца, почек (нефрит, пиелонефрит, нефросклероз), в стадии ре-

конвалесценции колеблется в нормальных пределах. При злокаче-

ственных новообразованиях, после радиоактивного облучения ак-

тивность каталазы снижается, но повышается в последние меся-

цы беременности и при лактации. Активность энзима падает при

отравлениях фосфором, мышьяком, свинцом, ртутью, наркоти-

ками, цианидами, сульфидами, азидами, фторидами. Кофеин,

теобромин, ацетоновые тела, алкоголь повышают активность ка-

талазы.

Каталаза активно участвует в кислородном обеспечении тех

тканей, в которые кислород поступает в меньших количествах,

чем необходимо для нормального течения окислительных реак-

ций. Каталаза эритроцитов вдвое активнее каталазы печени.

Определение ее активности в крови дает объективные данные

для суждения о степени обеднения организма железом при ане-

миях.

Активность каталазы крови обычно определяют по методу Баха

и Зубковой. Принцип метода основан на способности двух моле-

кул пероксида водорода (Н2О2) разлагаться каталазой до 2Н2О и

О2. Избыток пероксида водорода титруют раствором перманганата

калия в присутствии серной кислоты:

2КМпО4 + 5Н2О2 + 3H2SO4 = 2MnSO4 + 8Н2О + 5О2 + K2SO4.

В опытной пробе определяют количество неразложившегося

пероксида водорода в присутствии каталазы, а в контрольной про-

бе — общее количество его в присутствии инактивированной ки-

пячением каталазы. По разнице между контролем и опытом рас-

считывают количество распавшегося в течение определенного

времени (30 мин) пероксида водорода, дающее косвенное пред-

ставление о каталазной активности.

Активность каталазы (каталазное число) делят на количество

эритроцитов (млн/мм3). Частное от деления представляет собой

каталазный индекс, по которому судят о результатах анализа.

Лактатдегидрогеназа (ЛДГ, дегидрогеназа молочной кислоты)

катализирует обратимую реакцию восстановления пировиноград-

ной кислоты в молочную при участии НАД • Н (восстановленной

формы никотинамидаденилдинуклеотида):

Оптимум действия фермента отмечается при рН 7,4 и темпера-

туре 39 °С, а также при рН 8,0 и температуре 20 °С. В заморожен-

ных тканях и жидкостях фермент сохраняет активность длитель-

ное время. Много его содержится в гладких и скелетных мышцах,

миокарде, почках, обкладочных клетках желудочных желез, осо-

бенно в поджелудочной железе, селезенке, легких и в тканях зло-

качественных опухолей. В крови содержится в относительно не-

большом количестве.

Оксалаты тормозят активность фермента в крови, поэтому

кровь лучше стабилизировать гепарином. В гемолизированной

крови активность ЛДГ многократно возрастает за счет высокой ее

концентрации в эритроцитах. Продолжительное парентеральное

введение ЛДГ вызывает образование в организме животных анти-

фермента, снижающего до 75 % его активность.

Повышение активности ЛДГ в сыворотке крови бывает после

хирургических операций, травмирования скелетных мышц, при

мышечной атрофии не нейрогенной природы. При циррозе, вос-

палении печени и обтурационной желтухе отмечают лишь незна-

чительное увеличение активности энзима. Резкое повышение ЛДГ

бывает при метастазировании рака в печень. Активность ЛДГ по-

вышается при нефрите, панкреатите, пернициозной анемии, ин-

фаркте миокарда, гемобластозах (лейкозе, ретикулезе) и при бере-

менности.

У новорожденных животных активность ЛДГ в 1,5—2 раза

выше, чем у взрослых.

Большую ценность для диагностики заболеваний печени имеет

определение изоферментов ЛДГ сыворотки крови методом элект-

рофоретического расщепления ее на отдельные фракции. Обычно

выделяют до 5 фракций (изоферментов), из них 5-я содержится в

гепатоцитах. При заболеваниях печени содержание 5-го изофер-

мента в сыворотке крови возрастает соответственно тяжести пато-

логического процесса.

Активность ЛДГ определяют по Шенеду и Товареку. Принцип

метода состоит в способности ос-лактата в щелочной среде в при-

сутствии ЛДГ и НАД окисляться в пируват, по количеству которо-

го судят об активности фермента. Определение активности ЛДГ в

сыворотке крови проводят также по методу Нейтельсона. Об ак-

тивности ЛДГ сыворотки крови судят по количеству образовав-

шейся под действием фермента в стандартных условиях пирови-

ноградной кислоты, определяемой колориметрически с реактивом

динитрофенил гидразином.

Нормальные величины активности ЛДГ сыворотки крови по

этому методу колеблются между 200—450 ед.

Трансаминазы (аминотрансферазы) представляют собой фер-

менты, катализирующие реакции переноса аминогрупп с амино-

кислоты на кетокислоту с образованием новой кетокислоты и но-

вой аминокислоты. Известно несколько трансаминаз, но в клини-

ческой практике наиболее широко исследуют активность глюта-

минопировиноградной (ГПТ) и глютаминощавелевоуксусной

(ГОТ) трансаминаз (глютаминоаспарагиновой и глютаминоалани-

новой трансаминаз, или ACT и АЛТ).

Коэнзимом трансаминаз является пиридоксальфосфат. Суль-

фат магния повышает активность фермента вдвое. Трансаминазы

довольно стабильны и в холодильнике сохраняют активность до