Лабораторная диагностика

На наличие синегнойной инфекции может указать голубо­вато-зеленое окрашивание краев и отделяемого ран, перевязочного материала (особенно после обработки Н₂О₂), развитие синдрома ectyma gangrenosa (патогномоничного для синегнойных септицемий) при ожогах, поражениях мочеполовой системы. Однако следует учитывать, что диагностируют то или иное поражение только выделением возбудителя. Существует несколько схем выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa. Наиболее распостраненная схема приведена на рис. 11. Д.А. Васильевым и А.Э. Афониным предложена оригинальная схема выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa, позволяющая в более короткие сроки идентифицировать данную культуру. В любом случае для успешного проведения анализа важное значение имеет способ взятия исследуемого материала. Техника взятия и первичного посева клинического материала анало­гична таковой при лабораторной диагностике возбудителей других бактериальных кишеч­ных и гнойно-воспалительных инфекций. Однако при взятии материала для исследования следует соблюдать и учитывать следующие важные моменты.

• Исследуемый материал желательно забирать до начала терапии антибактериальными препаратами или (если она начата) только после выведения препарата из организма.

• Материал для бактериологического исследования следует забирать непосредственно из очага пора­жения с соблюдением всех необходимых правил асептики.

• При невозможности взятия материала непосредственно из очага инфекции, или если он сообщается с внешней средой, проводят исследование отделяемого (например, мочи при пиелонефритах, мокроты при пневмониях отделяемого цервикального канала или влагалища при воспалениях половых органов и др.).

Схема бактериологического выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa, предложенная Д.А. Васильевым, Э.А. Афониным.

1. Посев на накопительную среду УСХИ (37°С 24-48 часов).

2. Перенос бактериальной суспензии на элективную среду КМ УСХИ (37°С – 24 часа).

3. Пересев выделенных колоний на ацетамидный агар, питательный агар с хлоридом бария, МПА (42°С – 24 часа).

4. По результатам культивирования - идентификация выделенной культуры.

Особые трудности представляет профилактика синегнойной инфекции, т.к. возбу­дитель также устойчив к действию антисептиков и дезинфектантов. Более того, доказана возможность длительного сохранения возбудителя в растворах фурацилина, предназна­ченного для хранения катетеров и хирургического инструмента, а также для промывания ран. Pseudomonas aeruginosa способна вырабатывать факторы, нейтрализующие некото­рые дезинфектанты, а в средах с достаточным содержанием питательных веществ, будучи аэробом, она может до 2 недель оставаться жизнеспособной в условиях анаэробиоза. В то же время она чувствительна к высушиванию, действию хлорсодержащих дезинфицирую­щих препаратов, легко инактивируется действием высокой температуры и давления (при кипячении, автоклавировании).

Микроорганизмы рода Haemophilus

Систематика микроорганизмов данного рода не завершена и требует дальнейшей доработки. Достаточно указать, что по справочнику Берджи (1997 г., издания США-1994) в род Haemophilus входит 11 видов; Kilian, Biberstein (1984) авторитетно настаивают на 16 видах. Микроорганизмы рода - неподвижные, грамотрицательные коккобациллярные или палочковидные бактерии, характеризующиеся полиморфизмом; иногда могут образовывать нити. Облигатные паразиты; для роста необходимы ростовые факторы, содержащиеся в эритроцитах (что отражает название Haemophilus), особенно Х (протопорфирин IХ) и/или V (никотинамидадениндинуклеотид – NAD или NAD-фосфат – NADP). Температурные границы роста 24-43°С, оптимальная температура 35-37°С. Некоторые виды Haemophilus входят в состав нормаль­ной микрофлоры организма человека и животных, другие вызывают тяжелые инфекции (менингит, эпиглоттит, пневмонию, перикардит и др.). Типовой вид — Haemophilus influenzaе. Внутри рода микроорганизмы дифференцируют по потребности в указанных факторах роста и биохимичес­ким свойствам (табл. 20). ^ Таблица 20. Биохимические свойства различных видов Haemolphilus

Вид	Гемо-лиз*	Ката-лаза	Окси-даза	Порфириновый тест	Потребность в факторах	Образование кислоты из:
						Глюкозы	Фруктозы	Сахарозы	Лактозы	Маннозы
H.influenzae	–	+	+	–	X,V	+	–	–	–	–
H.parainfluenzae	–	±	+	+	V	+	+	+	–	+
H.haemolyticus	+	+	+	–	X,V	+	±	–	–	–
H.parahaemolyticus	+	±	+	+	V	+	+	+	–	–
H.aprophilus	–	–	–	±	–	+	+	+	+	+
H.paraprophilus	–	–	+	+	V	+	+	+	+	+
H.segnis	–	±	–	+	V	±	±	±	–	–
H.ducreyi	–	+	+	–	X	–	–	–	–	–

*На КА с эритроцитами лошади Фактор роста Х содержится в эритроцитах в виде термостабильной группы тетрапирролов, входящих в состав гематина и гемина (принимают участие в цитохромном транспорте электронов и синтезе каталазы и пероксидазы). Виды, нуждающиеся в Х-факторе, не способны синтезировать протопорфирин из -аминолевулиновой кислоты, что используют для их идентификации (см. ниже), фактор роста V — термолабильный кофермент, включающий НАД (коэнзим I) или НАДФ (коэнзим II). Этот фактор — составная часть витаминов группы В, участвующих в окислительно-восстановительных реакциях бактериальных клеток. V-фактор присутствует в некоторых продуктах (например, в дрожжах), а также синте­зируется некоторыми бактериями (например, сарцинами, стафилококками, нейссериями и др.). Добавление в питательную среду НАД, НАДФ или никотинамидрибозида удовлетворяет по­требность микроорганизма в V-факторе. Также рост гемофилов стимулирует посев вблизи коло­ний микроорганизмов, продуцирующих V-фактор. Потребность в его присутствии испытывает незначительное число видов, а Н. aprophilus не нуждается в обоих факторах. ^