
- •Микроорганизмы рода Pseudomonas
- •Pseudomonas в систематике бактерий
- •Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка)
- •Распространение
- •Морфология и тинкториальные свойства возбудителя
- •Культуральные свойства
- •Биохимические свойства
- •Пигментообразование
- •Патогенез
- •Антигенная структура
- •Патогенез
- •Лабораторная диагностика
- •Микроорганизмы рода Haemophilus
- •Haemophilus influenzae (палочка Афанасьева-Пфейффера)
- •Морфология
- •Культуральные свойства
- •Клинический материал
- •Выделение Haemophilus influenzae из клинического материала
Лабораторная диагностика
На наличие синегнойной инфекции может указать голубовато-зеленое окрашивание краев и отделяемого ран, перевязочного материала (особенно после обработки Н2О2), развитие синдрома ectyma gangrenosa (патогномоничного для синегнойных септицемий) при ожогах, поражениях мочеполовой системы. Однако следует учитывать, что диагностируют то или иное поражение только выделением возбудителя. Существует несколько схем выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa. Наиболее распостраненная схема приведена на рис. 11. Д.А. Васильевым и А.Э. Афониным предложена оригинальная схема выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa, позволяющая в более короткие сроки идентифицировать данную культуру. В любом случае для успешного проведения анализа важное значение имеет способ взятия исследуемого материала. Техника взятия и первичного посева клинического материала аналогична таковой при лабораторной диагностике возбудителей других бактериальных кишечных и гнойно-воспалительных инфекций. Однако при взятии материала для исследования следует соблюдать и учитывать следующие важные моменты.
Исследуемый материал желательно забирать до начала терапии антибактериальными препаратами или (если она начата) только после выведения препарата из организма.
Материал для бактериологического исследования следует забирать непосредственно из очага поражения с соблюдением всех необходимых правил асептики.
При невозможности взятия материала непосредственно из очага инфекции, или если он сообщается с внешней средой, проводят исследование отделяемого (например, мочи при пиелонефритах, мокроты при пневмониях отделяемого цервикального канала или влагалища при воспалениях половых органов и др.).
Схема бактериологического выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa, предложенная Д.А. Васильевым, Э.А. Афониным.
Посев на накопительную среду УСХИ (37°С 24-48 часов).
Перенос бактериальной суспензии на элективную среду КМ УСХИ (37°С – 24 часа).
Пересев выделенных колоний на ацетамидный агар, питательный агар с хлоридом бария, МПА (42°С – 24 часа).
По результатам культивирования - идентификация выделенной культуры.
Особые трудности представляет профилактика синегнойной инфекции, т.к. возбудитель также устойчив к действию антисептиков и дезинфектантов. Более того, доказана возможность длительного сохранения возбудителя в растворах фурацилина, предназначенного для хранения катетеров и хирургического инструмента, а также для промывания ран. Pseudomonas aeruginosa способна вырабатывать факторы, нейтрализующие некоторые дезинфектанты, а в средах с достаточным содержанием питательных веществ, будучи аэробом, она может до 2 недель оставаться жизнеспособной в условиях анаэробиоза. В то же время она чувствительна к высушиванию, действию хлорсодержащих дезинфицирующих препаратов, легко инактивируется действием высокой температуры и давления (при кипячении, автоклавировании).
Микроорганизмы рода Haemophilus
Систематика микроорганизмов данного рода не завершена и требует дальнейшей доработки. Достаточно указать, что по справочнику Берджи (1997 г., издания США-1994) в род Haemophilus входит 11 видов; Kilian, Biberstein (1984) авторитетно настаивают на 16 видах. Микроорганизмы рода - неподвижные, грамотрицательные коккобациллярные или палочковидные бактерии, характеризующиеся полиморфизмом; иногда могут образовывать нити. Облигатные паразиты; для роста необходимы ростовые факторы, содержащиеся в эритроцитах (что отражает название Haemophilus), особенно Х (протопорфирин IХ) и/или V (никотинамидадениндинуклеотид – NAD или NAD-фосфат – NADP). Температурные границы роста 24-43°С, оптимальная температура 35-37°С. Некоторые виды Haemophilus входят в состав нормальной микрофлоры организма человека и животных, другие вызывают тяжелые инфекции (менингит, эпиглоттит, пневмонию, перикардит и др.). Типовой вид — Haemophilus influenzaе. Внутри рода микроорганизмы дифференцируют по потребности в указанных факторах роста и биохимическим свойствам (табл. 20). ^ Таблица 20. Биохимические свойства различных видов Haemolphilus
Вид |
Гемо-лиз* |
Ката-лаза |
Окси-даза |
Порфириновый тест |
Потребность в факторах |
Образование кислоты из: |
||||
Глюкозы |
Фруктозы |
Сахарозы |
Лактозы |
Маннозы |
||||||
H.influenzae |
– |
+ |
+ |
– |
X,V |
+ |
– |
– |
– |
– |
H.parainfluenzae |
– |
± |
+ |
+ |
V |
+ |
+ |
+ |
– |
+ |
H.haemolyticus |
+ |
+ |
+ |
– |
X,V |
+ |
± |
– |
– |
– |
H.parahaemolyticus |
+ |
± |
+ |
+ |
V |
+ |
+ |
+ |
– |
– |
H.aprophilus |
– |
– |
– |
± |
– |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
H.paraprophilus |
– |
– |
+ |
+ |
V |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
H.segnis |
– |
± |
– |
+ |
V |
± |
± |
± |
– |
– |
H.ducreyi |
– |
+ |
+ |
– |
X |
– |
– |
– |
– |
– |
*На КА с эритроцитами лошади Фактор роста Х содержится в эритроцитах в виде термостабильной группы тетрапирролов, входящих в состав гематина и гемина (принимают участие в цитохромном транспорте электронов и синтезе каталазы и пероксидазы). Виды, нуждающиеся в Х-факторе, не способны синтезировать протопорфирин из -аминолевулиновой кислоты, что используют для их идентификации (см. ниже), фактор роста V — термолабильный кофермент, включающий НАД (коэнзим I) или НАДФ (коэнзим II). Этот фактор — составная часть витаминов группы В, участвующих в окислительно-восстановительных реакциях бактериальных клеток. V-фактор присутствует в некоторых продуктах (например, в дрожжах), а также синтезируется некоторыми бактериями (например, сарцинами, стафилококками, нейссериями и др.). Добавление в питательную среду НАД, НАДФ или никотинамидрибозида удовлетворяет потребность микроорганизма в V-факторе. Также рост гемофилов стимулирует посев вблизи колоний микроорганизмов, продуцирующих V-фактор. Потребность в его присутствии испытывает незначительное число видов, а Н. aprophilus не нуждается в обоих факторах. ^