Морфология вирусов. Стерилизация. Практика № 4.

Вирусы – мельчайшие микроорганизмы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к царству Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы размножаются в цитоплазме или ядре клетки. Они – автономные генетические структуры. Отличаются особым –- разобщенным (дизъюнктивным) способом размножения (репродукции): в клетке отдельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем происходит их сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется вирионом.

Окрашивание по Романовскому-Гимзе

Окраска по Романовскому-Гимзе. Мазки из исследуемого материала (кровь, гной, тканевая жидкость, мазки-отпечатки и др.)

• высушивают на воздухе,

• фиксируют метиловым спиртом в течение 3 мин,

• снова высушивают на воздухе и

• окрашивают.

Обработку мазков удобно производить в чашках Петри, на дно которых положены две подставки (из предметного стекла, разрезанного вдоль пополам). Препарат кладут мазком вниз на подставки и сбоку подливают разведенный краситель так, чтобы мазок соприкасался с ним. Окраска длится от 30 мин до одного или нескольких часов, после чего мазки промывают водой и высушивают на воздухе.

Краситель Романовского-Гимзы состоит из метиленового синего, эозина и азура, благодаря чему он окрашивает в разные цвета элементы микроорганизма и форменные элементы крови. Перед обработкой препарата краситель разводят водой (рН 7,0-7,2) в 10-20 раз. Степень разведения меняется в зависимости от серии красителя и рН воды. Поэтому рекомендуют каждую новую серию красителя и воду проверять на контрольных мазках крови.

Тельца Бабеша-Негри

В нейронах головного мозга зараженных вирусом бешенства животных (кроликов, белых мышей, крыс, морских свинок и др.) образуются цитоплазматические включения, содержащие РНК и антигены вируса. Эти включения впервые были описаны Бабешем (1892) и Негри (1903) и названы тельцами Бабеша-Негри (представляют собой эозинофильные включения вируса овальной формы размером 1-15 мкм, состоящие из вирусного РНП). Бактериоскопическая диагностика бешенства включает обнаружение телец Бабеша-Негри в мазках-отпечатках или срезах из ткани мозга с помощью окраски по Ром-Гимзе и др.

Практикум: Выявление вируса по внутриклеточным включениям. Внутриклеточные включения образуются при репродукции некоторых вирусов в цитоплазме и ядре клеток (оспы, бешенства, гриппа, герпеса и др.). Они представляют собой участки локализации вирусов и их компонентов в клетках. Включения обнаруживают при микроскопии после окраски монослоя по Романовскому-Гимзе или другими сложными методами, а также при люминесцентной микроскопии после обработки акридиновым оранжевым (1: 20 000).

К 13 лассификация вирусов

В основу современных классификаций вирусов положены следующие основные критерии:

• Тип нуклеиновой кислоты.

• Наличие липопротеидной оболочки (оболочечные и безоболочечные), размер и морфология вириона, тип симметрии, число капсомеров.

• Круг восприимчивых хозяев.

• Патогенность.

• Географическое распространение.

• Способ передачи.

• Антигенные свойства (путем деления на антигенные группы) и др.

Каждая группа признаков детализируется в зависимости от уровня знаний и степени изученности конкретного вируса.

В

14

вирусологии используют следующие таксономические категории: семейство (название оканчивается на viridae), подсемейство (оканчивается на virinae), род (оканчивается на virus). Однако названия родов и особенно подсемейств даны не для всех вирусов. Вид вируса не получил биномиального названия, как у бактерий.

Ведущий признак классификации – тип нуклеиновой кислоты. Вирусы делятся на ДНК- и РНК-содержащие вирусы: всего 19 семейств, из них 7 – ДНК-содержащие и 12 – РНК-содержащие вирусы. Одновременно в классификации учитывается количество нитей ДНК или РНК: они бывают однонитевые и двунитевые:

Группа I: ДНК (двунитевые) вирусы – вирусы натуральной оспы, вакцины, оспы обезьян и др.;

Группа II: ДНК (однонитевые) вирусы – парвовирус человека В19, вирус ТТ (гепатит ТТ?) и др.;

Группа III: РНК (двунитевые) вирусы – вирус Колорадской клещевой лихорадки, ротавирусы человека и др.;

Группа IV: РНК (плюс однонитевые) вирусы – вирусы полиомиелита, Коксаки A и B, ECHO, вирус гепатита A, риновирусы человека, вирусы гепатита B, гепатита C, гепатита G и др. ;

Группа V: РНК (минус однонитевые) вирусы – вирусы гриппа, парагриппа, кори, паротита, гепатита D, бешенства, ГЛПС, Марбурга, Эбола и др.;

Группа VI: РНК-вирусы (обратнотранскрибирующиеся) – ВИЧ ;

Группа VII: ДНК-вирусы (обратнотранскрибирующиеся) – вирус гепатита В.