Контрольные вопросы

1. В каком виде аммиак и аминный азот попадают из периферических тканей в печень для образования мочевины?

2. Дефект какого из ферментов орнитинового цикла может быть причиной увеличения суточной экскреция аргининосукцината?

3. Почему при поражениях печени наблюдается аминоацидурия?

4. Приведите уравнения нейтрализации ацетоуксусной и -гидроксимасляной кислот аммиаком.

Работа 5. Гормоны

1. Качественные реакции на адреналин.

В основе химической структуры адреналина лежит ядро пирокатехина. Биосинтез адреналина происходит в мозговом веществе надпочечников из аминокислоты тирозина. Введение адреналина в организм вызывает гипергликемию, глюкозурию, увеличение концентрации свободных жирных кислот. При введении адреналина в кровь наблюдается учащение и усиление сердцебиения, повышение кровяного давления и др.

1.1. Реакция на адреналин с хлоридом железа (III).

В одну пробирку вносят 0, 5 мл раствора пирокатехина, в другую - 0,5 мл раствора адреналина. В каждую пробирку добавляют по 2 капли 1% раствора хлорида железа (III). Жидкость в пробирке принимает зеленое окрашивание, постепенно переходящее в желтоватое. Реакция обусловлена наличием пирокатехиновой группировки в молекуле адреналина.

1.2. Реакция на адреналин с йодатом калия.

К 0,5 мл раствора адреналина прибавляют 1 мл 1%-ного раствора иодата калия, 10 капель 10%-ного раствора уксусной кислоты, смесь слегка подогревают. Появляется интенсивное красно-фиолетовое окрашивание. Химизм реакции неизвестен.

1.3. Проба с нитритно-молибденовым реактивом.

В пробирку наливают 0,5 мл водного раствора адреналина, 0,5 мл 5%-ного раствора соляной кислоты, 1 мл нитритно-молибденового реактива, смесь перемешивают. Возникает желто-оранжевая окраска. При добавлении нескольких капель 10%-ного раствора гидроксида натрия появляется малиново-красная окраска, переходящая при внесении нескольких капель концентрированной соляной кислоты в лимонно-желтую.

1.4. Диазореакция.

В пробирку вносят 0,5 мл 1%-ного раствора сульфаниловой кислоты, 0,5 мл 5%-ного раствора нитрита натрия, 1 мл раствора адреналина и 0,5 мл 10%-ного раствора карбоната натрия. При взаимодействии адреналина с диазореактивом образуются продукты, окрашенные в красный цвет.

2. Качественные реакции на инсулин.

Инсулин вырабатывается β-клетками островков Лангерганса поджелудочной железы. Он является белком, состоящим из двух полипептидных цепей, соединенных двумя дисульфидными мостиками. Инсулин увеличивает проницаемость мембран клеток по отношению к глюкозе, активирует синтез гексокиназы печени, усиливает синтез гликогена и жиров из глюкозы, замедляет окисление жирных кислот, тормозит глюконеогенез. Это вызывает гипогликемию. Недостаток инсулина при заболевании сахарным диабетом приводит к гипергликемии. Инсулин можно обнаружить реакциями, характерными для белков.

2.1. Биуретовая реакция.

К 1 мл раствора инсулина добавляют 2 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия и 2 капли 1%-ного раствора сульфата меди, перемешивают. Развивается красно-фиолетовое окрашивание.

2.2. Реакция Миллона.

В пробирку наливают 0,5 мл раствора инсулина и 3 капли реактива Миллона. Образуется белый осадок. При слабом нагревании осадок окрашивается сначала в розовый, а затем в красный цвет от образования ртутной соли нитропроизводного тирозина.

2.3. Реакция Фоля.

К 1 мл раствора инсулина добавляют 2 мл концентрированного раствора гидроксида натрия и кипятят 1-2 минуты. Добавляют 1 мл 10%-ного раствора ацетата свинца. Развивается буро-черное окрашивание.

2.4. Проба Геллера.

В пробирку наливают 0,5 мл концентрированной азотной кислоты и, наклонив пробирку, осторожно приливают по стенке равный объем раствора инсулина. В месте соприкосновения двух жидкостей появляется белый аморфный осадок белка в виде кольца. Осторожно встряхивают пробирку и добавляют избыток азотной кислоты. Осадок не исчезает.

3. Качественная реакия на тироксин.

В щитовидной железе вырабатывается два йодсодержащих гормона, которые можно рассматривать как производные L-тиронина: трийодтиронин и тетрайодтиронин (тироксин). Они образуются путем йодирования тирозина, входящего в состав белка тиреоглобулина. При гипофункции щитовидной железы наблюдаются отечность, задержка воды в тканях, понижение обмена, вялость, ожирение. В условиях недостатка экзогенного йода развивается эндемический зоб – реактивное разрастание ткани щитовидной железы. Гормоны щитовидной железы и препараты, получаемые из нее, применяются с лечебной целью.

Обнаружение тироксина ведут, отщепляя от него с помощью кислотного гидролиза иодоводородную кислоту. В пробирку вносят полтаблетки тироксина и 0,5 мл концентрированной азотной кислоты, осторожно нагревают в течение 1-2 мин. Затем в пробирку добавляют 1 мл 1%-ного раствора иодата калия, перемешивают и охлаждают. Иодат калия окисляет освободившуюся при гидролизе иодоводородную кислоту в свободный иод:

В пробирку добавляют 1-2 мл хлороформа и хорошо встряхивают. После отстаивания слой хлороформа (нижний) окрашивается иодом в фиолетовый цвет.