Контрольные вопросы

1. Почему чаще встречается гиперхолестеролемия, а не гипохолестеролемия?

2. Как изменится синтез холестерина при питании только растительной пищей? Почему?

3. Укажите, в каких органах происходит синтез холестерина «на экспорт».

4. Каким образом большая часть холестерина выводится из организма?

5. В чем различие функций фосфолипидов и триацилглицеролов?

Работа 3. Переваривание белков. Определение кислот желудочного содержимого

Опыт 1. Переваривание белков пепсином.

Переваривание белков начинается в желудке под влиянием желудочного сока. Пепсин является эндопептидазой. В результате гидролиза белков пепсином образуются пептоны - смесь более или менее сложных полипептидов, а также в небольшом количестве свободные аминокислоты.

В 4 пробирки наливают по 2 мл молочноацетатной смеси. пробирку 1 помещают в кипящую водяную баню, 2 – в водяную баню при 40⁰С, 3 – оставляют при комнатной температуре, 4 пробирку помещают в лед. Через 10 минут во все пробирки добавляют по 0,1 мл желудочного сока, перемешивают. Под действием протеолитического фермента пепсина растворимый казиноген молока переходит в нерастворимый пепсин. Наблюдают за временем появления первых сгустков казеина на стенках пробирок. Делают вывод об оптимальной температуре действия фермента.

Опыт 2. Качественное открытие свободной соляной кислоты в желудочном соке с помощью индикатора конго-красный.

Нормальный желудочный сок обладает сильнокислой реакцией (рН около 1) вследствие наличия соляной кислоты (0,4-0,5% НС1). Обычно для исследований пользуются желудочным содержимым, извлекаемым зондом через определенное время после пробного завтрака. Оно в норме имеет рН 1,5-2,5, а концентрация НС1 составляет 0,1-0,2%. При клиническом анализе желудочного сока различают: 1) «свободную соляную кислоту», находящуюся в свободном состоянии и диссоциирующую на ионы; 2) «связанную соляную кислоту» в виде солеобразных соединений с белками и продуктами их переваривания; 3) «общую соляную кислоту», которая представляет собой совокупность свободной и связанной соляных кислот; 4) «общую кислотность», обусловленную суммой всех веществ кислотного характера (свободная и связанная соляные кислоты, кислые фосфаты, а при патологиях - молочная кислота и летучие жирные кислоты).

В кислой среде конго-красный имеет синюю окраску, в слабокислой, нейтральной и щелочной средах - красную. Зона перехода индикатора конго-красный лежит при рН 3,0-5,2. Такое значение рН в желудочном соке обусловливает только свободная соляная кислота.

1-2 капли раствора соляной кислоты наносят на бумагу конго-красный. В случае пользования раствором конго-красный к 1 мл раствора соляной кислоты прибавляют 1-2 капли индикатора. Тот же опыт проделывают с пробами желудочного сока (пробы 1 и 2). Наблюдают изменение окраски индикатора и делают вывод о наличии или отсутствии соляной кислоты в исследуемых соках.

Опыт 3. Качественное открытие свободной соляной кислоты в желудочном соке с помощью раствора тропеолина.

Зона перехода индикатора тропеолина лежит в пределах рН 1,3-3,0. При рН выше 3,0 цвет индикатора оранжево-желтый. Только в присутствии минеральных кислот (при рН 1,3 и ниже) окраска делается малиново-красной.

В пробирки наливают по 1 мл исследуемых проб желудочного сока (1 и 2) и раствора соляной кислоты и по 1-2 капли раствора тропеолина. Сравнивают цвет индикатора во всех пробах и убеждаются в том, что малиново-красная окраска возникла только в присутствии соляной кислоты.

Опыт 4. Титрование кислот желудочного содержимого.

Кислоты желудочного содержимого оттитровывают 0,1 н. раствором гидроксида натрия. Применяют различные индикаторы с разными зонами перехода окраски: фенолфталеин - интервал перехода окраски при рН 8,2-10,0; конго-красный - при рН 3,0-5,2; ализариновый красный - при рН 4,3-6,3.

В колбу наливают 5 мл желудочного содержимого, добавляют 10 капель 1% спиртового раствора фенолфталеина, 1-2 капли 1% раствора конго-красного и титруют 0,1 н. раствором гидроксида натрия до перехода первоначального синего цвета в красный. Количество щелочи, израсходованной на титрование, соответствует количеству свободной соляной кислоты и выявляется индикатором конго-красным. Не доводя уровня щелочи в бюретке до первоначального, продолжают титрование до перехода окраски в стойкий малиновый цвет. Общее количество щелочи, считая от начального уровня ее в бюретке, соответствует общей кислотности и выявляется индикатором фенолфталеином. В другую колбу отмеривают 5 мл желудочного содержимого, добавляют 1-2 капли 1% водного раствора ализаринового красного и титруют до перехода первоначальной желтой окраски в фиолетовую. Количество щелочи, использованной на титрование, соответствует сумме всех веществ, дающих кислую реакцию, кроме связанной соляной кислоты, и выявляется индикатором ализариновым красным. Результаты заносят в таблицу 5.

Таблица 5. Результаты определения кислотности желудочного сока.

Кол-во желудочного сока, мл	Кол-во 0,1 н. раствора гидроксида натрия, израсходованного на титрование, мл			Кол-во титрационных единиц, моль/л
	до красного цвета	до малинового цвета	до фиолетового цвета	свободная соляная кислота	общая кислотность	связанная соляная кислота

Результаты титрования выражают в мл 0,1 н. раствора едкого натра, затраченных на нейтрализацию свободной соляной кислоты и других соединений кислотного характера в 100 мл желудочного содержимого (условные титрационные единицы). Одна условная титрационная единица соответствует концентрации соляной кислоты, равной 1 ммоль/л.

Сопоставить полученные при титровании данные с нормой. Сделать вывод о характере секреции желудочного сока (гипер-, нормо-, гипо- или ахлоргидрия).

Опыт 5. Качественная реакция на молочную кислоту (реакция Уфельмана).

Реакция основана на взаимодействии молочной кислоты с фенолятом железа, который окрашен в фиолетовый цвет. В результате реакции образуется лактат железа с зеленовато-желтой окраской. Фенолят железа получают воздействием хлорида железа (III) на фенол:

К 3 мл 2% раствора фенола добавляют 2-3 капли 1% раствора хлорида железа (III). Образуется темно-фиолетовое окрашивание. Реактив разводят водой до слабой окраски и разливают в три пробирки. В первую пробирку вносят по каплям 1% раствор молочной кислоты до появления зеленовато-желтого окрашивания. Во вторую и третью пробирки добавляют по каплям желудочный сок. Зеленовато-желтая окраска появляется только в том случае, если в желудочном соке соляная кислота или отсутствует, или содержится в незначительном количестве. Сильная соляная кислота полностью разрушает комплекс железа с фенолом, а также вытесняет более слабую молочную кислоту из ее соли.

В выводах привести заключение о наличии исследуемых кислот в желудочном соке.