Контрольные вопросы

1. Пищевые липиды плохо растворимы в воде. Как при этом с ними справляются липолитические ферменты?

2. Клинические симптомы стеатореи, характеризующейся избытком липидов в кале, обусловлены чаще всего 2 причинами: а) недостаточной секрецией желчных кислот; б) отсутствием секрета поджелудочной железы. Почему эти причины приводят к появлению липидов в кале?

3. Объясните, почему у пациентов со сниженной секрецией бикарбонатов поджелудочной железой даже при нормальной секреции липазы и колипазы развивается стеаторея?

Работа 2. Фосфолипиды. Холестерин

Опыт 1. Выделение фосфатидов из тканей головного мозга.

Высушенный с гипсом мозг (5 г) переносят в колбу и заливают 10 мл спирта. Присоединяют обратный холодильник и помещают на 15-20 минут в нагретую до 70⁰С водяную баню, периодически встряхивая. Если значительная часть спирта испаряется, его доливают. По окончании экстракции колбу охлаждают, вытяжку отфильтровывают.

Опыт 2. Качественная реакция на лецитин с хлоридом кадмия.

К 2 мл спиртового раствора лецитина (опыт 1) добавляют 1 мл насыщенного спиртового раствора хлорида кадмия. Выпадает белый хлопьевидный осадок комплексного соединения лецитина с хлоридом кадмия. Эту реакцию не дают растворы холестерина и растительных масел.

Опыт 3. Выделение холестерина из тканей головного мозга.

Высушенный с гипсом мозг (3 г) насыпают в сухую пробирку, приливают 6 мл хлороформа, взбалтывают 10 минут. Экстракт отфильтровывают в сухую пробирку.

Опыт 4. Качественные реакции на холестерин.

4.1. Реакция Шиффа.

В пробирку наливают 1 мл хлороформного раствора холестерина и осторожно по стенке подслаивают 1 мл концентрированной серной кислоты. На границе раздела жидкостей появляется кольцо красного цвета.

4.2. Реакция Сальковского.

Жидкость после проведения пробы Шиффа встряхивают. После расслаивания верхний слой окрашивается в красный цвет, нижний имеет желто-оранжевую окраску с зеленой флуоресценцией.

4.3. Реакция Либермана – Бурхарда.

В пробирку наливают 1 мл хлороформного раствора холестерина, добавляют 0,5 мл уксусного ангидрида и 2 капли концентрированной серной кислоты. Хорошо перемешивают. Образуется красная окраска, переходящая в фиолетовую, затем синюю и зеленую. При незначительном содержании холестерина может сразу появиться зеленая окраска.

Цветные реакции на холестерин определяются дегидратацией и окислением холестерина под действием концентрированной серной кислоты и последующей конденсацией продуктов с образованием соединений с сопряженными двойными связями, дающими с серной кислотой различные окрашенные производные.

Опыт 5. Количественное определение общего холестерина в сыворотке крови прямым методом по реакции Златкис – Зака.

Метод основан на реакции холестерина с уксусной и серной кислотами в присутствии хлорида железа.

К 0,1 мл сыворотки крови прибавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл рабочего раствора хлорида железа, перемешивают. Готовят контроль: к 0,1 мл дистиллированной воды прибавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл рабочего раствора хлорида железа. Оставляют на 15 минут.

Колориметрируют против контроля на фотоэлектроколориметре при длине волны 510-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см.

Из стандартного раствора холестерина готовят разведения, как указано в таблице 4.

Таблица 4. Приготовление растворов холестерина для построения калибровочного графика.

№ пробирок	Стандартный раствор холестерина, мл	Ледяная уксусная кислота, мл	Рабочий раствор хлорида железа, мл	Содержание холестерина в пробе, мг%
1	0,1	3,0	2,0	100
2	0,2	3,0	2,0	200
3	0,3	3,0	2,0	300
4	0,4	3,0	2,0	400
5	0,5	3,0	2,0	500

Через 20 минут пробы фотометрируют против контроля. По результатам строят калибровочный график.

По калибровочному графику определяют содержание холестерина в сыворотке крови. Норма содержания холестерина в сыворотке крови – 120-250 мг% (3,12-6,50 ммоль/л).