Задания

1. Приготовление мазков из смеси культур стафилококка, антракоида и вибриона Мечникова. Окраска по Граму.

2. Окраска готовых мазков из мокроты больного туберку­лезом по Цилю — Нильсену.

3. Микроскопия мазков с микобактериями лепры (демон­страция).

28

А. Уксуснокислый метиловый синий по Нейссеру.

Метиленовый синий 0,1 г

Спирт 96° ....... . 2 мл

Ледяная уксусная кислота ... 5 мл

Дистиллированная вода .... 100 мл

Б. Везувин

Везувин 2 г

Спирт 96° 60 мл

Дистиллированная вода .... 40 мл

Смесь кипятят и после охлаждения фильтруют.

Ядро (нуклеоид) бактериальной клетки содержит дезок-сирибонуклеиновую кислоту, которая выявляется при помо­щи цветной микрохимической реакции Фельгена с примене­нием слабого кислотного гидролиза. При этом освобождает­ся дезоксирибоза, затем она переходит в альдегиды, вступающие в реакцию с бесцветной фуксинсернистой кис­лотой специального реактива Шиффа. В результате этой ре­акции ядерная субстанция окрашивается в красно-фиолето­вый цвет, а цитоплазма — в розовый (рис. 14, /).

Оболочка бактерий состоит из клеточной стенки и цито-плазматической мембраны, прилегающей к внутренней по­верхности стенки клетки. Клеточная стенка содержит поли­сахариды и протеины, ее можно обнаружить специальными методами окраски. Цитоплазматическая мембрана имеет ли-пидный и протеиновый слой.

В концентрированном растворе поваренной соли или са­хара стенка отслаивается от обезвоженной цитоплазмы. Это явление получило название плазмолиза.

У некоторых бактерий вокруг клеточной стенки образует­ся мощный слизистый слой — капсула (рис. 15), которая v одних видов бактерий состоит из полисахаридов, обусловли­вающих их типовую специфичность (Diplococcus pneumo­niae), гликопротеинов или полипептидов, у других — из про­теинов (Bacillus anthracis).

При лабораторной диагностике следует учитывать, что пневмококки, бациллы сибирской язвы, Clostridium perfrin-gens, возбудители чумы и туляремии образуют капсулы только в организме животного и человека; у бактерий пнев­монии, озены и риносклеромы их наблюдают как в организ­ме, так и на питательных средах. При обычных методах ок­раски капсулы не окрашиваются.

Выявление капсул по Гинсу. Высушенный на воздухе препарат, приготовленный по Бурри (см. стр. 28),

30

ИЗУЧЕНИЕ СТРОЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ

С диагностической целью в микробиологических лабора­ториях изучают не только форму бактериальной клетки, но м отдельные элементы ее структуры: цитоплазму, включения, ядро, оболочку, капсулу, жгутики, споры.

Цитоплазма бактерий имеет гомогенную или зернистую структуру. Включения и отложения в цитоплазме бактерий могут быть в виде гранул (зерен) волютина, гликогена, гра-мулезы, капелек жира, кристаллов оксалатов, жидкой серы, скоплений пигмента.

Гранулы волютина содержат значительное количество ме-тлфосфатов и других соединений фосфора. Они обладают мстахромазией. При окраске щелочным метиленовым синим, уксуснокислым метиловым фиолетовым гранулы окрашива­ются более интенсивно, чем цитоплазма.

Наличие гранул волютина у истинных дифтерийных кори­небактерии облегчает дифференциацию дифтерийных и лож-подифтерийных коринебактерии, не содержащих или мало содержащих этих включений.

Окраска гранул волютина щелочным ме­тиленовым синим (по Леффлеру). На фиксиро­ванный мазок наливают щелочной метиленовый синий на Л—5 минут, промывают водой, высушивают фильтроваль­ной бумагой и микроскопируют. Цитоплазма дифтерийных коринебактерии окрашивается в голубой цвет, гранулы во­лютина — в темно-синий.

Окраска уксуснокислым метиловым фио­летовым. Фиксированный мазок обрабатывают в тече­ние 5—10 минут уксуснокислым метиловым фиолетовым (метиловый фиолетовый или кристаллический фиолетовый 0,25 г, 5% раствор уксусной кислоты 100 мл). Мазок про­мывают водой и высушивают. Цитоплазма дифтерийных коринебактерии окрашивается в светло-сиреневый цвет, гра­нулы волютина —в темно-лиловый (рис. 13, а).

При сложном методе окраски по Нейс с еру олктериальные клетки принимают желтый цвет, а гранулы нолютина— сине-черный (рис. 13, б).