Задания

1. Изучение готовых препаратов с внутриклеточными включениями Бабеша—Негри.

2. Демонстрация препаратов, применяемых с профилак­тической и лечебной целью против энцефалита и бешен­ства.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ ГРИБАМИ

Лабораторная диагностика кандидамикоза

Возбудителями кандидамикоза являются Candida albi­cans, Candida tropicalis. В отличие от истинных дрожжей они не образуют спор, от других грибов отличаются отсут­ствием истинного мицелия. Псевдомицелий формируется за счет удлинения зрелых клеток.

Лабораторная диагностика заключается в микроскопии, выделении чистой культуры гриба и серологических реак­циях. Взятие и выбор материалов для исследования зави­сит от клинических форм. При поражении наружных покро­вов у больного берут чешуйки кожи и соскоб ногтей, гной­ное отделяемое кожи и слизистой оболочки, пленки из полости рта. При висцеральной форме болезни исследова­нию подлежат кровь, спинномозговая жидкость, испражне­ния, моча, желчь, кусочки биопсированной ткани. От трупов бфут кровь из сердца и материал из внутренних органов.

Микроскопическое исследование патологи­ческого материала производят в неокрашенных и окрашен­ных препаратах. В каплю 5—10% раствора едкой щелочи помещают чешуйки кожи, соскоб ногтей, некротизирован-ные ткани, подогревают над пламенем горелки и накрыва­ют покровным стеклом. Материал жидкой консистенции

285

исследуют в спирте с глицерином (глицерина 4 части, спир­та этилового 2 части, дистиллированной воды 4 части). Для выявления оболочек и глыбок гликогена используют раст­вор Люголя двойной концентрации, который в равном объе­ме добавляют к гомогенной взвеси исследуемых объектов. Микроскопируют вначале объективом 8, а затем объективом 40. При положительных реакциях в препаратах обнаружи­вают круглые или овальные почкующиеся дрожжеподобные клетки размером от 3 до 6 ц и псевдомицелий длиной 20—30 ц и больше (см. рис. 30).

Для исследования препаратов в окрашенном виде на предметном стекле готовят тонкие мазки, подсушивают на воздухе, фиксируют метиловым спиртом или смесью Ники­форова. По Граму Candida окрашиваются в темно-фиолето­вый цвет, иногда с розовой центральной частью клетки, по Цилю—Нильсену — в синий с розовато-желтоватыми включениями липидов и по Романовскому—Гимзе — в розо­вато-фиолетовый цвет, с темно-фиолетовыми включениями волютина и красным хроматиновым веществом.

Выделение чистой культуры производят на плотных пита­тельных средах, на среде Сабуро, пивном сусле-агаре, мор-ковно-картофельном отваре и др. К этим средам добавляют пенициллин, стрептомицин или хлортетрациклин в количе­стве 300—400 ЕД на 1 мл среды для подавления роста со­путствующих бактерий. Посевы культивируют при 30°. Ко­лонии Candida имеют беловато-желтый цвет, по мере роста и увеличения размеров они приобретают перламутровый от­тенок и куполообразное возвышение. Выделенную чистую культуру сеют в жидкие среды для выявления пневдомице-лия. Из жидких сред применяют картофельную воду, мор-ковно-картофельный отвар и др. В жидких питательных средах они образуют равномерную муть или осадок, неред­ко — пленку на поверхности среды. Псевдомицелий при по­ложительном результате можно обнаружить, пользуясь ма­лым увеличением, на 3—5-й день, иногда на 10—15-й день культивирования и позже.

Серологический метод включает реакцию агглю­тинации и связывания комплемента. Эти реакции не обла­дают строгой специфичностью и имеют значение только в общем комплексе диагностики кандидоза.

Реакция агглютинации. К сыворотке больного, разведенной от 1 : 100 до 1 : 800, добавляют по 2—3 капли антигена (взвесь в изотоническом растворе 2-суточной ага­ровой культуры гриба, содержащей 200 млн. микробных тел

286

щиеся гифы (рога оленя, канделябры), круглые и четырех­угольные отрезки гиф и др. Характерно наличие пузырьков воздуха внутри волоса (рис. 94, 5). При эпидермофитии в обрывках эпидермиса среди клеток обнаруживают тол­стые нити гриба.

Выделение и исследование культур. Микро­скопическое исследование дает возможность определить род

/ 3

Рис. 94. Дерматомицеты в пораженных волосах. 1 — Microsporum; 2 — Trichophyton; 3 — Achorion.

¹ 50—100 г прессованных дрожжей размешивают в 1 л воды, кипятят 10 минут, фильтруют через бумажный фильтр и стерилизуют текучим паром.

грибов—возбудителей дерматомикозов: Achorion, Tricho­phyton и др. Виды грибов устанавливают на основании изу­чения культуральных свойств. Исследуемый материал сеют на плотную среду Сабуро (4 г мальтозы, 1т пептона, 1,8 г агара, 100 мл дрожжевой воды¹), к которой добавляют на 1 мл J30—100 ЕД стрептомицина для подавления бакте­риальной флоры. Предварительно волосы или чешуйки из­мельчают и переносят на поверхность среды (4—5 кусочков в одну пробирку). Оптимальный рост отмечается при 27°. Обычно хороший рост наблюдается и при комнатной темпе­ратуре. Растут грибы медленно. Через 3—4 недели разви­ваются колонии, типичные по морфологическому строению, консистенции и цвету. На основании структуры колоний и' их микроскопии определяют вид гриба.

288

в 1 мл). В опыт вводится с соответствующими контролями 2—3 вида культур грибов рода Candida, аутоантиген (если культура получена от больного) и культура истинных дрож­жей. Пробирки помещают в термостат при 37° на 2 часа, а затем оставляют при комнатной температуре на 12—^ча­сов. Диагностическое значение имеет резко положительная реакция агглютинации в разведении 1 : 200.

Реакцию связывания комплемента ставят обычным методом. Антигеном является экстракт 2-суточной взвеси агаровой культуры в 30° этиловом спирте. Обычно берут несколько видов дрожжеподобных грибов, наиболее часто встречающихся возбудителей кандидамикозов, и 2—3 антигена из культур истинных дрожжей.

Аллергическую пробу применяют по типу реакции Манту. В качестве аллергена используют поливалентную вакцину, содержащую 200 млн. клеток грибов в 1 мл и про­гретую при 80° в течение 2 часов. Вакцину в объеме 0,1 мм вводят внутрикожно, для ослабленных детей ее разводят в 10 раз. Результаты реакции (гиперемия, папула, иногда некроз) учитывают через 24 и 48 часов.