19 Заказ № 7

281

отсутствует цитопатическое действие, то это, возможно, ви­рус Коксаки А; если мыши болеют и ткань дегенериро-вана, предполагают наличие вируса Коксаки В; положи­тельный результат в культуре ткани и отрицательный на мышах чаще дают вирусы ECHO.

Для определения типа выделенного вируса ставят реак­цию нейтрализации, вначале со смесью сывороток, при положительном результате —с отдельными сыворотками.

Определение антител в сыворотках больных проводят при помощи реакции нейтрализации и связывания компле­мента. Кровь у больных берут в первые дни и спустя 2—3 недели после начала болезни. Сыворотку прогревают 20 минут при 60° и сохраняют в холодильнике (при —25— 30°). Реакцию нейтрализации ставят на культуре ткани и мышах-сосунках.

Задания

1. Изучение действия вируса полиомиелита на клетки культуры ткани.

2. Учет результатов титрования антител в опыте цвет­ной реакции.

3. Демонстрация различных методов заражения мышей-сосунков.

4. Демонстрация препаратов, применяемых для профи­лактики и лечения полиомиелита.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА И БЕШЕНСТВА

Лабораторная диагностика клещевого энцефалита

Возбудитель клещевого энцефалита относится к семей­ству Arbovidiae. Лабораторная диагностика клещевого эн­цефалита включает биологический и серологический мето­ды. Материалом для выделения вируса служат кровь и спинномозговая жидкость. У трупов — мозг. К этому ви­русу чувствительны белые мыши, куриные эмбрионы . и культуры тканей.

Кровь берут в первую неделю болезни, вводят ее одной и той же белой мыши в мозг 0,3 мл и внутрибрюшинно 0,25 мл, заражают не менее 4 взрослых животных. Инку­бационный период заболевания у мышей 4—5 дней. Харак­терными первичными симптомами являются резкое воз­-

282

Лабораторное исследование заключается в микроскопии препаратов из мозга, в которых обнаруживают внутрикле­точные включения Бабеша—Негри, и биологических про­бах на лабораторных животных для воспроизведения бо­лезни.

Микроскопические исследования. Внутри­клеточные включения Бабеша — Негри (см. рис. 79, и) пред­ставляют собой круглые или вытянутые образования, раз­мером 0,25—0,28 (я. В одной клетке их может быть несколько. Тельца Бабеша—Негри состоят из сравнительно плотного образования в центре, периферическая часть имеет зерни­стое строение. Встречаются они в ганглиозных клетках ам-монова рога, а также мозжечка и продолговатого мозга. Извлеченный мозг кладут основанием вверх, удаляют моз­жечок и обнажают с внутренней стороны извилину, под которой расположен аммонов рог. Пробы отбирают одно­временно для биологических исследований, гистологических срезов, мазков-отпечатков и обычных мазков.

Гистологические срезы делают из кусочков мозга толщиной 3—4 мм, фиксированных специальной жидкостью. Мазки-отпечатки изготовляют из нефиксированного мозга на обезжиренном предметном стекле, кото­рые слегка надавливают на срез мозга, расположенный на 4—6 слоях фильтровальной бумаги. Ткань берут в различных участках аммонова рога, растирают в ступке до образования гомогенной массы и делают не менее трех толстых мазков.

Мазки чаще окрашивают по способу Муромцева, гисто­логические препараты — по Туревичу, Муромцеву (см. стр. 44, 45), Романовскому — Гимзе.

Хороший результат получают при использовании люминес­центной микроскопии мазков-отпечатков мозга или слюн­ных желез, обработанных антирабическим гамма-глобули­ном, меченным флюоресцирующим красителем — флюорес-цеинизоцианатом.

Биологические исследования. OTcyfствие в препаратах внутриклеточных включений Бабеша—Негри не исключает заболевания бешенством. С целью установления окончательного диагноза производят заражение животных. Наиболее чувствительными к вирусу бешенства являются кролики и белые мыши. Кроликам вводят суспензию мозга в количестве 0,2—0,3 мл под твердую оболочку мозга в большую цистерну. Мышам в количестве не менее 5—6 штук, весом 8—12 г внутримозговым способом вводят по 0,03 мл материала. Инкубационный период у мышей колеб­лется от 8 до 14 дней, у кроликов он равняется 12—15 дням,

284

буждение и повышенная чувствительность, сменяющаяся заторможенностью, параличами задних конечностей. За животными наблюдают в течение 7—8 дней. При отсутст­вии заболеваний среди зараженных мышей 2 животных забивают и взвесью мозга заражают свежую группу — первый пассаж. При отрицательном результате через 7—8 дней делают второй пассаж. Заболевших или погибших животных используют для идентификации вируса.

Куриные эмбрионы 8—9-дневного возраста заражают в желточный мешок, 10—12-дневные — в хорионаллантоис-ную полость. Материал вводят в количестве 0,25—0,3 мл, вскрывают эмбрионы после 3 суток инкубации при 37°, в хо-рионаллантоисной жидкости взвешивают извлеченный мозг. Полученной взвесью заражают 3—4 белых мышей и не­сколько куриных эмбрионов. При положительном результа­те вирус обнаруживают у животных после первого зараже­ния эмбрионов.

Из наиболее чувствительных культур тканей считаются фибробласты куриных эмбрионов и клетки почек свиней, в которых регулярно наблюдается цитопатический эффект. ц_ерез з_4 _дня после заражения культуральную жидкость вводят в мозг белых мышей и делают второй пассаж на культуре ткани. Для идентификации выделенных штаммов применяют реакцию нейтрализации на мышах со стандарт­ной типовой сывороткой.

С целью серологической диагностики для обнаружения антител в конце первой недели ставят реакцию связывания комплемента. Антигены получают из мозга зараженных мышей или куриных эмбрионов. Иногда в первые дни за­болевания по известной сыворотке выявляют антиген в кро­ви больных.

Вируснейтрализующие антитела в высоких титрах появ­ляются в сыворотке больных через 2-^2¹/₂ месяца. Их об­наруживают реакцией торможения гемагглютинации с эрит­роцитами кур, а также ставят реакцию нейтрализации на белых мышах и в культуре тканей HeLa, СОЦ, фибробла-стов эмбриона человека и др.

Лабораторная диагностика бешенства

Возбудитель бешенства (Rabies virus canis) относится к нейротропным вирусам, поэтому исследуют мозг погиб­шего или умерщвленного больного животного с симптома­ми бешенства, а также мозг людей, погибших от бешенства.

283

животные погибают от паралитической формы бешенства. При микроскопии мозга погибших животных обнаруживают внутриклеточные включения Бабеша—Негри.

Для прижизненной диагностики бешенства белых мышей заражают слюной больного человека или животного, пред­варительно обработанной антибиотиками. Через 2—4 дня в мозговой ткани мышей можно обнаружить внутриклеточ­ные включения Бабеша—Негри.