Задания

1. Изучение основных форм бактерий: кокковидных (мик­рококки, диплококки, стрептококки, стафилококки, сарци­ны), палочковидных (бактерии, бациллы, клостридии), из­витых (вибрионы,спириллы).

2. Приготовление препаратов-мазков из культуры стафи­лококка, окраска водно-спиртовым раствором метиленового синего.

3. Приготовление мазков из культуры кишечной палочки, окраска фуксином Пфейффера.

МОРФОЛОГИЯ И СТРОЕНИЕ БАКТЕРИЙ (ПРОДОЛЖЕНИЕ). ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ СЛОЖНОЙ ОКРАСКИ БАКТЕРИЙ

Для использования сложных методов окраски применя­ется несколько красителей. Эти методы окраски позволяют дифференцировать одни бактерии от других и изучить осо­бенности строения бактериальной клетки. К ним относят окраску по Граму, Цилю — Нильсену, Нейссеру, Романов­скому— Гимзе и др.

Окраска по методу Грама, предложенная в 1884 г., не утратила практического значения до настоящего времени.

25

Механизм окраски по Граму объясняется физико-химиче-скими особенностями строения цитоплазмы и оболочечных структур грамположительных и грамотрицательных микро­организмов. У грамположительных микробов по сравнению с грамотрицательными содержится значительно больше ри­бонуклеиновой кислоты и белков. Поэтому при обработке препарата метиловым фиолетовым или генцианом фиолето-ным и раствором Люголя в цитоплазме грамположительных микробов образуется более прочное соединение красителя п йода с белками цитоплазмы клетки. При обработке спир­том грамположительные бактерии удерживают краситель, ;i грамотрицательные обесцвечиваются и окрашиваются фук­сином в розово-красный цвет (рис. 12, /).

Результаты окраски по Граму зависят от техники приго­товления мазка, продолжительности окраски и обесцвечива­ния. Грубые толстые мазки из заведомо грамотрицательных бактерий могут окрашиваться грамположительно. Кроме то­го, большое значение имеет возраст культуры и изменчи­вость микробов. Грамположительные бактерии в старых культурах красятся грамотрицательно. Изменчивость в от­ношении окраски свойственна Corynebacterium diphtheriae, Proteus vulgaris и др.

Окраска по Граму является вспомогательным методом для определения вида возбудителей инфекционных заболева­ний. Так, например, все болезнетворные кокки, кроме го­нококка и менингококка, являются грамположительными; вибрионы, трепонемы, возбудители кишечных заболева­ний— грамотрицательными, все патогенные бациллы и кло-стридии — грамположительными.

Окраска микроорганизмов по Цилю—Нильсену исполь­зуется для выявления кислотоустойчивых микобактерий ту­беркулеза, лепры и некоторых актиномицетов. Эти микробы плохо окрашиваются разведенными растворами красителей. С целью увеличения проницаемости красителя используется фиолетовый фуксин Циля при подогревании.

Окрашенные микробы не обесцвечиваются слабыми рас-I порами минеральных кислот и спирта. Явление кислото­устойчивое™ объясняется наличием в микробных клетках .шпидов, воска и оксикислот.

Техника окраски. 1. Фиксированный мазок по­крывают полоской фильтровальной бумаги и наливают фе­ноловый фуксин Циля (можно пользоваться фильтроваль­ной бумагой, предварительно пропитанной раствором фук­сина и высушенной). Мазок подогревают над пламейем

27

горелки до появления паров, затем отводят в сторону для охлаждения и добавляют новую порцию красителя. Подо­гревание повторяют 2—3 раза. После охлаждения снимают бумагу и промывают водой.

2. Препарат обесцвечивают 5% раствором серной кисло­ты, погружая его 2—3 раза в раствор или наливая его на мазок, затем препарат промывают несколько раз водой.

3. Окрашивают водно-спиртовым раствором метиленового синего 3—5 минут, промывают водой, высушивают.

При микроскопии кислотоустойчивые бактерии определя­ют по интенсивно красному цвету, остальная микрофлора окрашивается в светло-синий цвет (рис. 12, 2 и 12, 3).

Для дифференцирования микобактерий туберкулеза и лепры применяют метод Семеновича — Марци-н о в с к о г о.

1. Фиксированный мазок окрашивают 2 минуты разведен­ным (1:3) феноловым фуксином Циля и промывают во­дой.

2. Обрабатывают щелочным раствором метиленового си­него в течение 3—5 минут, промывают и высушивают.

Микобактерий лепры окрашиваются в красный цвет, ми­кобактерий туберкулеза не окрашиваются.

Прижизненная окраска микробов. Для этого метода ис­пользуют метиленовый синий, нейтральный красный и дру­гие малоядовитые красители в разведении до 1 : 10 000. На предметном стекле смешивают каплю исследуемого мате­риала с раствором красителя, накрывают покровным стек­лом. Микроскопируют объективом 40.

При негативном способе изучения живых бактерий по ме­тоду Бурри бактерии остаются неокрашенными на темном фоне. В каплю исследуемой культуры на предметном стек­ле вносят тушь, разведенную дистиллированной водой в 10 раз, равномерно распределяют петлей или краем пред­метного стекла. Мазок сушат на воздухе. Вместо туши иног­да используют нигрозин, конго красный и др.