Задания

1. Изучение морфологических и культур альных свойств актиномицетов.

2. Приготовление и окраска по Романовскому—Гимзе «толстой» капли крови.

3. Изучение морфологии Borrelia recurrentis в окрашен­ном препарате.

4. Изучение ингредиентов, подготовленных для постанов­ки реакции Вассермана.

5. Постановка реакции Вассермана.

Демонстрация осадочных реакций,

7. Изучение морфологии живых лептоспир и реакции аг- глютинации в темном поле (демонстрация).

7. Изучение морфологии живых лептоспир и реакции аг- глютинации в темном поле (демонстрация).

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БОЛЕЗНЕЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ МИКОПЛАЗМАМИ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БОЛЕЗНЕЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ РИККЕТСИЯМИ И ХЛАМИДИЯМИ

Лабораторная диагностика болезней, вызываемых микоплазмами

Микоплазмы —мельчайшие (100—150 тр) микроорганиз­мы, принадлежащие к классу шизомицетов, порядку Мусо-plasmatales. Они не образуют спор, не имеют жгутиков, ядерный аппарат у них расположен беспорядочно. Вслед­ствие отсутствия истинной клеточной стенки микоплазмы характеризуются довольно выраженным полиморфизмом (шаровидная, палочковидная, зернистая, нитевидная, гроз­девидная, кольцевидная, фильтрующаяся формы). Мико­плазмы широко распространены в природе. Они были об­наружены в почве, сточных водах, на различных субстра­тах, в организме животных и человека. Наиболее типичным представителем патогенных видов микоплазм является воз­будитель плевропневмонии крупного рогатого скота. У че­ловека микоплазмы (Mycoplasma hominis) вызывают плев­ропневмонию, воспалительные процессы гениталий, неспецифические уретриты, негонококковые артриты, трихо-монадоподобные поражения, эндокардиты и септические заболевания. Как теперь доказано, возбудителем первичных атипичных пневмоний, геморрагических ларингитов и пу­зырчатого воспаления барабанных перепонок является Mycoplasma pneumoniae.

Для дифференциации микоплазм с другими микроорга­низмами бактериальной природы используют морфологиче­ские, культуральные, ферментативные и биологические методы исследования. В частности, при атипичной пневмо­нии в сыворотке людей происходит нарастание титра не­специфических Холодовых агглютининов к эритроцитам крови I группы человека и специфических антител к Myco­plasma pneumoniae. Эта бактерия вызывает пневмонию у хлопковых крыс, в культуре тканей и на крупных эмбрио­нах не дает цитопатического эффекта.

В связи с тем что микоплазмы в течение длитель­ного периода относили к вирусным агентам наиболее со­вершенных методик выявления микоплазм пока не разра­ботано.

258

259

Лабораторная диагностика болезней, вызываемых риккетсиями

Возбудители риккетсиозов — риккетсий по своей морфо­логии сходны с бактериями (см. рис. 25), но являются об-лигатными внутриклеточными паразитами, размножаются в клетках тканей чувствительных к ним животных, куриных эмбрионах илтереживающих тканях.

Для лабораторной диагностики риккетсиозов обычно ис­пользуют серологические методы. Выделение риккетсий из крови больных и другого материала производят в специаль­ных лабораториях.

Лабораторная диагностика эпидемического сыпного ти­фа. Возбудителем эпидемического сыпного тифа и болезни Брилля является риккетсия Провачека (Rickettsia prowa-zekii; рис. 89). Для лабораторной диагностики этих болез­ней применяют реакцию связывания комплемента, непря­мую гемагглютинацию и агглютинацию с риккетсиями Про­вачека.

Реакция связывания комплемента позволяет диагностировать как активную форму болезни, так и пере­несенную в прошлом (ретроспективный диагноз). Ставят ее по общепринятой методике для выявления антител в сы­воротке крови больных и переболевших. Кровь у больного берут на 5—7-й день болезни. Сыворотку разводят от 1 : 10 до 1 :2560. В качестве антигена используют хорошо очищен­ную и высушенную в вакууме взвесь риккетсий (корпуску­лярный антиген) или антиген из частично растворенных рик­кетсий.

Связывание комплемента (первая фаза реакции) прово­дится при температуре +4° в течение 18—20 часов или при 37° в течение часа. Большая чувствительность реакции про­является на холоде. Ее считают положительной, если за­держка гемолиза регистрируется в разведении сыворотки 1 : 160 и в разведении 1 : 10 — при ретроспективном диаг­нозе.

Реакцию непрямой гемагглютинации ставят по методике, описанной на стр. 155. Кровь у больных берут на 4—5-й день болезни. Антиген для этой реакции готовят из риккет­сий, выращенных в желточном мешке куриных эмбрионов и высушенных в вакууме. В день постановки реакции ад­сорбируют антиген на эритроцитах барана. Сыворотку больного после адсорбции гетерогенных гемагглютининов разводят от 1 :250 до 1 :16 000 и больше. Реакция считается

260

положительной при наличии гемагглютинации в разведении сыворотки 1 : 250. Не учитывают реакцию в том слу­чае, если в одной из контрольных пробирок (контроль сы­воротки, антигена или эритроцитов) произойдет гемагглю-

тинация. „

Реакция агглютинации риккетсий Прова­чека дает положительный результат у больных сыпным ти-

Рис 89. Риккетсий Провачека. а — в световом микроскопе; б — в элект­ронном микроскопе.

фом почти в 100%. Кровь берут из локтевой вены или из пальца на 4—7-й день от начала болезни, отделяют сыворот­ку и разводят ее изотоническим раствором от 1 :20 до 1 : 1280. В пробирки наливают по 0,2 мл соответствующей концентрации сыворотки, затем в каждую пробирку добав­ляют по 0,2 мл риккетсиозного диагностикума (реакция ставится в объеме 0,4 мл), в результате чего сыворотка до­полнительно разводится в 2 раза, что соответствует концент­рациям от 1 :40 до 1 : 2560. Контроли: 1) сыворотка больно-

lg Заказ № 7

261

го в разведении 1 : 20 в объеме 0,2 мл с равным количеством изотонического раствора хлористого натрия и 2) 0,2 мл диагностикума и 0,2 мл изотонического раствора. Наличие агглютината учитывают в агглютиноскопе после 18—20 ча­сов пребывания в термостате и 2 часов при комнатной тем­пературе. Он имеет мелкозернистый характер. Реакция счи­тается положительной вЗ (+ + + ) и 4 ( + + + + ) плюса в разведении сыворотки 1:40, 1:80, но обычно для выявления нарастания титра ее ставят повторно.

Болезнь Брилля является рецидивирующей формой эпи­демического сыпного тифа у людей, перенесших эту болезнь в прошлом, и отличается от классического сыпного тифа меньшей продолжительностью течения болезни (от 7 до 12 дней). С целью диагностики определяют нарастание титра комплементсвязывающих антител. При болезни Брилля на­растание специфических антител обнаруживают между 4 и 6-м днем от начала болезни, максимальный титр дости­гает на 10-й день; реакция агглютинации Вейля—Феликса, как правило, бывает отрицательной.

Лабораторная диагностика эндемического сыпного тифа. Возбудителем эндемического сыпного тифа являются рик­кетсии Rickettsia typhi (Rickettsia mooseri).

Для дифференциации эндемического и эпидемического сыпного тифа ставят реакцию связывания комплемента, не­прямую реакцию гемагглютинации и агглютинацию риккет­сии параллельно с антигенами из риккетсии Провачека и риккетсии Музера. В случае эндемического сыпного тифа диагностический титр с риккетсиями Музера в 3—4 раза превосходит титр с риккетсиями Провачека.

Морских свинок-самцов заражают внутрибрюшинно кровью больных. Появление скротальной реакции, лихорад­ки и обнаружение риккетсии в соскобах влагалищных обо­лочек яичек безусловно подтверждает диагноз эндемиче­ского сыпного тифа.

Лабораторная диагностика Ку-лихорадки. Возбудителем Ку-лихорадки являются риккетсии Бернета (Coxiella bur-netti). С целью лабораторной диагностики этого риккетсиоза используют реакции связывания комплемента, агглютина­ции, аллергическую и биологическую пробы.

Реакция связывания комплемента для выяв­ления антител бывает положительной в конце 1-й недели болезни. Комплементсвязывающие антитела достигают наибольшей концентрации на 3-й неделе болезни. Техника постановки та же, что и при сыпном тифе.

262

Реакцию агглютинации используют на 2-й неделе болезни (10—12-й день). Сыворотку крови больного, ввиду низких титров агглютининов, разводят от 1 : 4 до 1 : 64, разливают в пробирки по 0,25 мл и добавляют по 0,25 мл антигена. Учет реакции производят после 18—20 часов пре­рывания пробирок в термостате. Диагностическим титром является положительная реакция в разведении 1:4 и выше. Реакцию повторяют для установления нарастания титра.

Аллергическую пробу производят со специальным антигеном путем внутрикожного введения 0,1 мл аллергена. В положительных случаях через 30—36 часов на месте инъ­екции появляется гиперемия размером 2,5X2 см с инфильт­ратом в це *тре.

Заражение морских свинок дает возможность выделить возбудителя. Кровь от больных берут в количест­ве 3—5 мл во время лихорадки и вводят морской свинке внутрибрюшинно или интратестикулярно (в толщу яичек 0,3—0,5 мл). Материалом от инфицированной свинки зара­жают куриные эмбрионы по Коксу. При повторных пасса­жах риккетсии из фильтрующихся форм переходят в види­мые и обнаруживаются при окраске по Романовскому — Гимзе и Здродовскому (см. стр. 39, 41).

Лабораторная диагностика болезней, вызываемых хламидиями

Лабораторная диагностика трахомы. Возбудитель трахо­мы — Chlamydia trachomatis вызывает хроническое инфек­ционное воспаление соединительной оболочки глаз и глазно­го яблока. Заболевание распространяется на роговую обо­лочку, сопровождается гиперплазией аденоидной ткани и ги­пертрофией фолликулов, имеющих вид прозрачных зерен.

С целью лабораторной диагностики после анестезии глаза ватным тампоном удаляют с конъюнктивы гной, слизь и ту­пым скальпелем соскабливают поверхность эпителиального покрова. Соскоб наносят тонким слоем на предметные стек­ла: препараты фиксируют и окрашивают в течение 3—4 ча­сов по Романовскому—Гимзе. В положительных случаях обнаруживают коккоподобные включения в клетках эпите­лия (рис. 90, /) величиной до 10 \х (тельца Провачека — Гальбертшедтера). Для обнаружения телец-включений ме­тодом люминесцентной микроскопии препараты-соскобы окрашивают акридин оранжевым и они приобретают ярко-зеленое свечение.

263

В настоящее время рекомендуется выращивать возбуди­тель трахомы в желточном мешке куриного зародыша. Ма­териал обрабатывают до заражения стрептомицином, нео-мицином, полимиксином и другими антибиотиками в течение нескольких часов при 4°.

Сходным по локализации возбудителя с трахомой и гоно­кокковой бленнореей является фолликулярный конъюнкти­вит, или бленнорея с включениями, которая вызывается Chlamydia oculogenitalis (рис. 90, 3). Дети заражаются от матерей, у которых возбудитель локализуется в мочеполо­вой системе и передается во время родов; взрослые инфи­цируются при купании в небольших непроточных водоемах (прудах), нехлорированных бассейнах. Лабораторная ди­агностика такая же, как и при трахоме.