Лабораторная диагностика лептоспирозов

Возбудитель желтушного лептоспироза — Leptospira ic-terohaemorrhagiae, возбудители безжелтушного лептоспи­роза—Leptospira grippotyphosa и др. Патогенез этих за­-

255

болеваний, по-видимому, не имеет существенных различий, поэтому для лабораторной диагностики их применяют одни и те же методы: микроскопический, выделение культур леп­тоспир, серологический и заражение животных (биологи­ческий).

От больного берут кровь, мочу, спинномозговую жид­кость. В зависимости от эпидемиологических показаний до­полнительно исследуют воду, пищевые продукты, выделения животных.

Микроскопическое исследование. В 1-ю не­делю заболевания лептоспиры можно обнаружить в крови на 10—14-й день в моче; при тяжелой форме с менингеаль-ными явлениями — в спинномозговой жидкости.

Кровь берут из вены в количестве 2—3 мл и смешивают с 2—3 мл 2% раствора лимоннокислого натрия, центрифу­гируют и отделяют плазму. Затем центрифугируют плазму 30 минут при 3000 об/мин, после чего исследуют осадок.

Мочу и спинномозговую жидкость изучают непосредст­венно после взятия или после центрифугирования в течение 2 часов при 4000 об/мин.

Исследуемый материал наносят на тонкие предметные стекла (не толще 1 мм), закрывают покровным стеклом (не толще 0,2 мм). Полученный препарат «раздавленной» капли изучают сухим объективом при боковом освещении. При микроскопии обнаруживают весьма подвижные тонкие лептоспиры с характерными изгибами на концах (вторич­ные завитки), придающие им вид скобы или буквы S, иног­да можно различить мелкие первичные завитки (см. рис. 24). На концах видны пуговчатые утолщения. Микроско­пическое исследование крови редко дает положительные результаты, поэтому используют другие методы иссле­дования.

Выделение культур лептоспир из крови. Кровь с целью посева берут в количестве 4—5 мл в 1-ю не­делю заболевания. Выращивают лептоспиры в жидких средах.

1. Водно-сывороточная среда Уленгута состоит из сте­рильной воды с 10% сыворотки кролика, прогретой при 56° в течение 30 минут.

2. Фосфатно-сывороточная среда Терских представляет собой смесь 10 мл фосфатного буфера (М/15 раствор Na₂HP0₄ и М/15 раствор КН₂Р0₄ или NaH₂P0₄) с 90 мл дистиллированной воды. После стерилизации к смеси добав­ляют 10% инактивированной сыворотки кролика.

К стр. 290

Рис. 95. Плазмодии малярии. / — Plasmodium vivax;

2. — Plasmodium malariae;

3. — Plasmodium falciparum.

133

Рис. 96. Лейшмании из ткани.

Посевы заливают вазелиновым маслом для создания ана­эробных условий и помещают в термостат при 28°. Про­смотр посевов в препарате «раздавленной» капли при боко­вом освещении начинают с 5—7-го дня. Макроскопически установить наличие роста не удается, даже при большом количестве размножившихся лептоспир. Отсутствие лепто­спир при микроскопии в ранние сроки не позволяет считать результат исследования отрицательным. Нередко они обна­руживаются через 2—3 недели и позже. Посевы следует выдерживать в термостате до 2 месяцев.

Для индентификации выросшей в жидкой среде чистой культуры лептоспир применяют реакцию агглютинации с агглютинирующими сыворотками различных типов и за­ражение животных. Серологическую и биологическую про­бы проводят так же, как при изучении нативного мате­риала.

В посеве осадка мочи наряду с размножением лептоспир наблюдают появление посторонней флоры. Выделение леп­тоспир производят в таком случае путем фильтрации сме­шанной культуры через мембранный фильтр № 1, или внут-рибрюшинным введением ее морской свинке с последующим быстрым (через 5—10 минут) взятием крови и посевом в жидкую питательную среду.

Серологические методы. Антитела в сыворотке больного появляются со 2-й недели болезни. Количество их нарастает и достигает максимума к периоду выздоровления. Для выявления антител ставят реакции агглютинации и лизиса. Предварительно разводят сыворотку больного от 1 : 50 до 1 : 800. В ряд пробирок вносят по 0,2 мл разведен­ной сыворотки и равный объем живой культуры лептоспир. Так как лептоспиры содержат неоднородные антигены, ста­вят несколько рядов разведений сыворотки, в каждый вно­сят лептоспиры определенного типа (L. icterohaemorrhagiae, L. grippotyphosa, L. pomona и др.). После выдерживания в термостате при 37° в течение часа из каждой пробирки готовят препарат «раздавленной» капли и микроскопируют в темном поле.

Наличие в сыворотке антител обусловливает в первых разведениях лизис: полное растворение лептоспир, частич­ный лизис или зернистое набухание. В последующих разве­дениях обнаруживают агглютинацию — появление агломе­ратов в виде паучков (см. рис. 73). Диагностическое значе­ние имеет положительная реакция в разведении сыворотки 1 : 400; иногда наблюдается положительная реакция в очень

135

17 Заказ № 7

больших титрах, особенно при желтушном лептоспирозе (1 : 10 000, 1 : 20 ООО).

Постановка реакции агглютинации очень громоздка и трудоемка. В настоящее время изготовляют диагностикумы (взвеси убитых лептоспир) для макроскопической реакции агглютинации; внедрение в практику последних упростит технику постановки серологических реакций.

Для диагностики лептоспирозов может быть применена также реакция связывания комплемента. В качестве анти­гена используют культуры лептоспир, концентрированные центрифугированием на ультрацентрифугах (5000—10 000 об/мин) или аутолизаты старых культур лептоспир. Сыво­ротки больных разводятся 1 : 10, Г: 100 и более.

Биологическая проба проводится на морских свинках, молодых кроликах и щенятах в возрасте от 2 до 4 недель.

Животным внутрибрюшинно или подкожно вводят цит-ратную кровь, осадок мочи, изучаемую культуру. При на­личии иктерогеморрагических лептоспир у подопытных жи­вотных через 5—7 дней появляется лихорадка, видимые слизистые оболочки становятся желтушными, при явлении гипотермии через несколько дней животные погибают. Все органы трупа имеют желтушную окраску. Лептоспиры обна­руживаются в печени, почках, легких и надпочечниках, реже в других органах и тканях.

В результате заражения щенят материалом, содержа­щим возбудителей водной лихорадки, у животных возникает хронический процесс, они являются носителями и выделяют лептоспиры в течение 3 месяцев.