Лабораторная диагностика сифилиса

Возбудитель сифилиса — Treponema pallidum (см. рис, 79, з).

При лабораторной диагностике сифилиса применяют раз­личные методы, исходя из патогенеза этого заболевания. В первом периоде (реже во втором и третьем) используют микроскопический метод, во втором и третьем периодах—-главным образом серологические реакции.

Микроскопическое исследование. У больного берут тканевую жидкость шанкра или пунктат регионарных лимфатических узлов. Перед взятием материала поверх­ность шанкра протирают стерильным ватным тампоном, смоченным раствором хлористого натрия. Затем дно язвы слегка раздражают платиновой лопаточкой или скальпе­лем, жидкость выжимают руками (обязательно в резино-ных перчатках); ее собирают в капилляр пастеровской пя-петки и немедленно готовят препарат «раздавленной» кап­ли для исследования в темном поле. При положительном результате-обнаруживают подвижные трепонемы с правиль­ными крутыми завитками (см. рис. 23). Непатогенные бор­релий (Borrelia refringens), которые могут находиться в ма­териале из гениталии, легко отличить от патогенной трепо­немы. Borrelia refringens имеет более грубое тело с круп­ными завитками, не обладает поступательным движением. Если шанкр расположен на слизистой оболочке полости рта, дифференциация бледной трепонемы. от трепонем —

251

обычных обитателей ротовой полости (Treponema micro-dentium) представляет трудности. В этом случае исследуют пунктат регионарных лимфатических узлов. Обнаружение в последнем типичных трепонем подтверждает диагноз си­филиса.

Изучают также препараты, окрашенные по Романовско­му— Гимзе. Мазки после фиксации метиловым спиртом или смесью Никифорова окрашивают в течение 2—24 часов или трижды подогревают краситель до появления паров, за­меняя его через каждую минуту новой порцией, последнюю порцию красителя выдерживают в течение 5 минут. Окра­шенные препараты промывают водой и высушивают на воз­духе. Бледная трепонема окрашивается в бледно-розовый цвет, Borrelia refringens — в красновато-фиолетовый. Тре-понемы — сапрофиты окрашиваются легко и интенсивно. В негативных препаратах по Бурри на черном фоне хорошо видна форма трепонем и их завитки.

Во втором и третьем периодах таким же способом иссле­дуют различные кожные поражения. Серологические исследования. Наиболее рас­пространенной является реакция Вассермана. Во втором и третьем периодах используют для этой цели сыво­ротку крови, при прогрессивном параличе или спинной су­хотке — спинномозговую жидкость.

По технике постановки реакция Вассермана не отличает­ся от реакции связывания комплемента Борде — Жангу (табл. 26). Однако существенная разница заключается в том, что в качестве антигена используют липиды сифилити­ческой и нормальной ткани.

Специфические антигены (спиртовые экстракты) пред­ставляют собой липиды печени сифилитического плода и тестикулярной ткани зараженного кролика. Они обладают большой активностью. Неспецифические антигены являют­ся липидами нормальной ткани (мышцы сердца быка, ло­шади), они менее активны. Антигены для реакции Вассер­мана готовят специальные институты.

Т аблица 27

Учет результатов

Перед опытом экстракты смешивают с изотоническим ра­створом с соблюдением порядка, изложенного в инструкции или наставлении. В связи с тем, что выпускаемые экстрак­ты обладают не одинаковой чувствительностью, реакцию ставят с несколькими антигенами (один специфический и два неспецифических). Все остальные ингредиенты реакции подготавливают так же, как и для реакции Борде — Жангу.

В качестве контроля в опыт вводят сыворотки заведомо положительную (больного сифилисом) и отрицательную (здорового человека).

При постановке реакции Вассермана со спинномозговой жидкостью последнюю не инактивируют, так как она не содержит комплемента, и вводят ее в опыт неразведенную,

253

разведенную 1:1 и 1:5 изотоническим раствором. Спинно­мозговая жидкость не обладает антикомплементарными свойствами, поэтому комплемент добавляют в количестве, соответствующем его титру (без надбавки 25%).

В серодиагностике сифилиса, кроме реакции Вассермана, обязательно применяют не менее двух осадочных реакций. Последние представляют собой реакцию преципитации, на­ступающую при взаимодействии сыворотки больного с ан­тигенами—тканевыми лилвдами, чувствительность которых повышена добавлением холестерина и других веществ. Ча­ще используют реакции Кана и Закс — Витебского.

Таблица 28 Схема постановки реакции Закс—Витебского

Пробирка Ингредиенты (в мл) —	Опыт	Контроль
	1-я	антитела	сыворотки
		2-я	3-я
Исследуемая сыворотка Антиген Спирт 95°, разведенный 1 : 2 0,85% раствор NaCl	0,2 0,1	0,1 0,2	0,2 0,1

0,85% раствор NaCl Учет результатов

Встряхивать 1 минуту, оставить при комнатной температуре на 30 минут

1 1 1	1	1
1 +++ 1	—	—

Реакция Кана (табл. 27). Сыворотку больного инак-тивируют при 56° в течение 30 минут. Антиген разводят изотоническим раствором соответственно указанию на эти­кетке. В одну пробирку наливают антиген, в другую — изото­нический раствор, затем быстро изотонический раствор вли­вают в антиген (а не наоборот), несколько раз переливают из пробирки в пробирку и оставляют на 10 минут д^уля созре­вания.

Ре а к ц ия Закс — Витебского (цитохолевая) (табл. 28). В этой реакции, так же как в реакции Кана, ис- пользуют инактивированную сыворотку больного. Антиген готовят следующим образом. Одну часть липидного экст- ракта быстро вливают в пробирку с двумя частями изото- нического раствора, после чего смесь оставляют на 10 минут для созревания.

254

Пoлoжительные результаты реакций Кана и Закс — Витеб­ского характеризуются появлением преципитата после до­бавления раствора хлористого натрия. Для учета можно ис­пользовать агглютиноскоп. Осадочные реакции очень чувствительны при диагностике ервичного и латентного сифилиса. Реакция Вассермана ает более четкие результаты при врожденном сифилисе. В настоящее время находит применение реакция им­мобилизации бледных трепонем. Для этой реак­ции изготовляют специальный антиген — живые бледные трепонемы из тестикулярной ткани зараженного кролика. Антиген считают пригодным, если при микроскопии обна­руживают большое количество подвижных трепонем. Кровь у больных берут стерильно. Нельзя ставить реакцию, если больной менее чем за 3 недели получал антибиотики или другие противосифилитические препараты.

При постановке реакции смешивают в пробирке 0,05 мл сыворотки крови, 0,3 мл антигена и 0,2 мл комплемента. Опыт сопровождается контролем сыворотки, антигена и комплемента. Пробирки помещают в анаэростат, который после вакуумирования заполняют смесью азота и углекис­лоты и выдерживают при температуре 35°. Через 18 часов из каждой пробирки делают препараты «раздавленной» кап­ли, насчитывают 25 особей и определяют, сколько в них под­вижных и иммобилизованных. Для вычисления процента иммобилизации используется следующая формула:

itzl . ЮО, А

_где Л —количество подвижных трепонем в контроле, В — количество подвижных особей в опыте. При иммобилизации от 0 до 20% реакция считается отрицательной, от 21 до 50%— слабо положительной и от 51 до 100%—положи­тельной. Если человек болен сифилисом, в первом препа­рате отмечается иммобилизация трепонем, а в контрольных они остаются подвижными. Эта реакция является более специфической и чувствительной по сравнению с реакция­ми Вассермана и осадочными.