Задания

1. Приготовление мазков из мокроты больного туберку­лезом, окраска по Цилю — Нильсену.

2. Вскрытие морской свинки, зараженной мокротой боль­ного туберкулезом. Приготовление мазков из бугорков, ок­раска по Цилю — Нильсену.

3. Демонстрация микрокультур.

4. Изучение культуральных свойств штамма БЦЖ на плотных и жидких средах.

5. Демонстрация препарата с микобактериями лепры.

6. Изучение препаратов, используемых для диагностики, лечения и профилактики туберкулеза.

Лабораторная диагностика актиномикоза и трепанематозов Лабораторная диагностика актиномикоза

Актиномикоз — хроническое инфекционное заболевание, вызываемое актиномицетами (Actinomyces israelii, Aitino-myces bovis, Actinomyces baudetti).

При актиномикозе исследуют гной из свищевых ходов, пунктат из невскрытых очагов размягчения, соскобы грану­ляций, материал биопсии, мокроту.

Микроскопическоеисследование. В гное, мок­роте отыскивают друзы — скопления актиномицетов, кото­рые имеют вид мелких желтоватых или серовато-белых с зеленоватым оттенком зернышек. Для этого пробирку на­клоняют и медленно вращают. Гной стекает, а на стенке остаются зернышки и комочки. Последние захватывают пет­лей и помещают на несколько минут в каплю 5—10% раст­вора едкой щелочи, затем промывают водой и наносят на предметное стекло в каплю такого же раствора щелочи, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. При ма­лом увеличении видны друзы— образования округлой фор­мы с бесструктурным центром и периферией радиального строения. При исследовании иммерсионным объективом в центре видны сплетения тонких гиф с пигментированными зернами. По периферии от этого клубка мицелия отходят

248

радиально в виде лучей гифы, имеющие колбовидные утол­щения на концах. Микроскопическому исследованию под­вергают также окрашенные препараты друз. Для этого зер­нышки и гнойные комочки промывают несколько раз в сте­рильной водопроводной воде, затем помещают на предмет­ное стекло, осторожно раздавливают другим предметным стеклом и получают равномерно распределенные тонким слоем мазки на двух стеклах. Окрашивание производят по Граму и Цилю — Нильсену. Радиально расположенные ги­фы с колбовидными утолщениями воспринимают дополни­тельную окраску по Граму, а окрашенные по Цилю — Ниль­сену приобретают красный цвет.

Если друзы не обнаружены, делают обычные мазки и ок­рашивают их по Граму. При микроскопии видны пучки из обрывков нитей мицелия или отдельные нити, окрашенные грамположительно.

Выделение культур актиномицетов. Перед посевом гной и мокроту центрифугируют в растворе пени­циллина и стрептомицина, содержащем 100—200 ЕД каж­дого в 1 мл. Затем отмывают изотоническим раствором хло­ристого натрия для удаления антибиотиков. Для выращива­ния анаэробных актиномицетов материал вносят петлей в пробирку с высоким столбиком расплавленного и остужен­ного до 45° сахарного агара, который тщательно размеши­вают, охлаждают и помещают в термостат при 37°. Рост актиномицетов появляется через 5 дней в виде окрашенных в белый или желтый цвет колоний. Для получения аэробных культур материал распределяют на поверхности слабо ще­лочного агара или агара с 2% глицерина. Можно пользо­ваться также средой Сабуро (стр. 288). Чашки помещают в термостат при 36°. Рост появляется через 2—4 дня в виде круглых, выпуклых, очень плотных колоний.

Из колоний аэробных и анаэробных актиномицетов го­товят мазки (колонии раздавливают между двумя пред­метными стеклами). Актиномицеты обладают способностью лизироваться. Лизис начинается в центре колонии или в ви­де концентрических зон. Аэробные актиномицеты могут быть выделены не только при актиномикозе. Выделение анаэробных штаммов подтверждает диагноз актиномикоза.

Аллергическиепробы проводятся с актинолизатом. Однако диагностическое значение их снижается в связи с тем, что при висцеральном актиномикозе, клиническая диагностика которого затруднена, аллергические пробы ча­сто дают отрицательный результат.

249

Серологическая диагностика заключается в постановке реакции связывания комплемента (Борде — Жангу). Недостатком этой реакции являются положитель­ные результаты при раке легкого и тяжелых нагноительных процессах.

Лабораторная диагностика эпидемического и эндемического возвратного тифа

Возбудитель эпидемического (вшивого) возвратного ти­фа— Borrelia recurrentis, эндемического (клещевого) — Borrelia persica, Borrelia latyschewii и др.

Основным методом исследования при возвратном тифе является микроскопический — обнаружение возбудителя в крови больного.

Микроскопическое исследование. У больного во время приступа или перед повторным приступом берут кровь из пальца и готовят препарат «толстой» капли и ма­зок. Вначале окрашивают препарат «толстой» капли, так как при его исследовании больше возможности получить положительный результат. На высушенный нефиксирован­ный препарат капли крови наливают на 35—45 минут кра­ситель Романовского—Гимзы. В капле происходит гемолиз (краситель разводят дистиллированной водой), поэтому че­рез 5 минут следует заменить его свежей порцией, которую выдерживают 30—40 минут. Затем препарат осторожно про­мывают водой и высушивают. При микроскопии видны бор-релии в виде тонких нитей (см. рис. 22) с несколькими боль­шими завитками (вторичные завитки). Длина боррелий ко­леблется от 10 до 30 р и более. Иногда их величина в несколько раз превосходит поперечник лейкоцитов (в пре­парате находятся только лейкоциты, эритроциты лизирова-ны). При большом количестве боррелий, что характерно для эпидемического возвратного тифа, наблюдаются их скоп­ления, которые трудно отличить от нитей фибрина. В таком случае производят микроскопию мазка.

Мазок после высушивания фиксируют спиртом или смесью Никифорова и окрашивают по Романовскому — Гим­зе или фуксином Пфейффера. При микроскопии мазка хо­рошо видны боррелий. Длина их всегда превосходит попе­речник эритроцита в 2 раза и больше. Если в «толстой» капле боррелий не обнаружены, мазки не исследуют.

В период апирексии при обычных методах исследования не удается обнаружить боррелий. Рекомендуется применять

250

методы обогащения. У больного из вены берут 8—10 мл крови, после свертывания отделяют сыворотку и центрифу­гируют ее при 3000 об/мин в течение 45—60 минут. Затем быстро выливают жидкость, опрокинув пробирку, а из осад­ки делают препараты «раздавленной» капли, которые иссле­дуют в темном поле зрения и «толстые» мазки, последние после фиксации окрашивают и изучают так же, как мазки из крови.

Биологический метод. Для подтверждения диаг­ноза клещевого возвратного тифа кровью больных заража­ют морских свинок. Им вводят подкожно 0,5—1 мл нитрат­ной крови больного. Через 5—6 дней в крови у животных появляется большое количество боррелий. Этот метод слу­жит одновременно для дифференциации возбудителей эпи­демического и клещевого возвратного тифа. Последний вы* зывает заболевание у морских свинок, тогда как Borrelia recurrentis непатогенна для них.