Задания

1. Приготовление мазка тампоном для выявления корине­бактерий дифтерии. Окраска по Леффлеру.

2. Посев тампоном отделяемого слизистой оболочки зева на свернутую сыворотку и кровяной теллуритовый агар.

3. Окраска по Граму и уксуснокислым метиловым фиоле­товым препаратов дифтерийной культуры.

4. Посев дифтерийной культуры для определения ее ток­сигенности in vitro.

5. Демонстрация культуральных и ферментативных свойств дифтерийных коринебактерий типа гравис и митис.

6. Изучение препаратов, применяемых для профилактики и лечения дифтерии.

242

тором NaOH до рН 8—8,2, кипятят 10 минут, фильтруют, разливают в бутылки и, добавив 1% хлороформа, сохраняют в прохладном месте.

б) Приготовление фосфатного агара. На 1л дистилли­рованной воды берут 40 г агар-агара, 7,125 г Na₂HP0₄ и 3,75 г КН2РО4. Смесь ставят в автоклав и выдерживают 20 минут при текучем паре и 10 минут при 115°. Оставляют в автоклаве на 2 часа для отстаивания, Затем фильтруют и стерилизуют 30 минут при 115°.

Для приготовления фосфатно-пептонного агара смешивают подогре­тые 50 мл пептона и 50 мл фосфатного агара. Устанавливают рН 7,8—8, добавляют 0,5% ацетата натрия и 0,3% мальтозы, разливают по 10 мл и стерилизуют текучим паром 30 минут.

После застывания питательной среды на середину чашки помещают полоску стерильной фильтровальной бумаги (2,5X8 см), смоченной антитоксической сывороткой, содер­жащей в 1 мл 500 АЕ. Чашку подсушивают 15—20 минут в термостате, затем сеют исследуемую культуру штрихами, перпендикулярными фильтровальной бумаге, или бляшками диаметром 1 см на расстоянии 1 см от края полоски. В од­ной чашке можно сеять 3—4 культуры (одна из них кон­трольная— заведомо токсигенная). Посевы помещают в термостат. Учет производят через 24, 48, 72 часа. Если культура токсигенна, на некотором расстоянии от полоски бумаги возникают линии преципитата, совпадающие с ли­ниями преципитата контрольной культуры. Они имеют вид «стрел-усиков», которые видны в проходящем свете уже че­рез 24 часа. Более заметными они становятся через 48—72 часа (см. рис. 68). Необходимость постановки контролей вызывается тем, что образование «стрел-усиков» может быть и у нетоксигенных штаммов, усики которых не соединяются с усиками токсигенного контрольного штамма, а пересекают их.

Определение токсигенности in vivo. Внутри-кожный метод. Накануне испытания подготавливают 2 сви­нок (лучше белой масти), удаляют у них шерсть с боков, контрольной свинке вводят внутрибрюшинно 1000 АЕ анти­токсической противодифтерийной сыворотки. В день опыта делают 100- и 200-миллионную взвеси исследуемой куль­туры и заражают 0,2 мл каждой взвеси внутрикожно 2 мор­ских свинок. Спустя 4 часа для предотвращения гибели подопытной свинке вводят внутрибрюшинно 100 АЕ анти­токсической противодифтерийной сыворотки. Если культура токсигенна, у подопытной свинки в месте введения появля­ется покраснение, отечность, а в дальнейшем некроз; окон­чательный учет производят через 72 часа. У контрольного животного никаких изменений не отмечают. Внутрикожный

241

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ТУБЕРКУЛЕЗА И ЛЕПРЫ