Задания

1. Изучение мазков из чистых культур Clostridium tetani, Clostridium botulinurn, окрашенных по Граму и Пешкову.

2. Вскрытие трупа морской свинки, зараженной взвесью почвы; приготовление мазков из раневого экссудата.

3. Посев раневого материала в среду Китта — Тароцци, молоко и железо-сульфит агар.

4. Демонстрация профилактических и лечебных препара­тов, применяемых при ботулизме, столбняке, газовой и ана­эробной инфекции.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ДИФТЕРИИ Возбудителем дифтерии является Corynebacterium diph-y theriae. Лабораторное исследование на присутствие корине-/ бактерий дифтерии производят с целью выявления больны^ дифтерией и носителей.

237

следовательно: 1) 1% раствор цистнна на 0,1 N растворе NaOH 12 мл, 2) 0 1 N раствора НС1 12 мл; 3) 2% раствор теллурита калия 1,5—1,8 мл; 4) 2 5% раствор гипосульфита натрия 4,8 мл; 5) нормальную лошадиную или'бычью сыворотку 20 мл. Среду перемешивают и разливают в сте­рильные чашки Петри.

При посеве материал втирают тампоном в поверхность среды. Свернутая сыворотка является избирательной (элек­тивной) средой, на которой дифтерийные коринебактерий вырастают раньше других, колонии их мелкие несливающи-еся (шагреневый рост). Через 8—12 часов инкубации гото­вят мазки, при отрицательном результате микроскопическое исследование производят через 18—24 часа. Если дифтерий­ные коринебактерий не обнаружены, посевы выдерживают в термостате 48 часов, после чего можно выдать окончатель­ный результат. В случае обнаружения типичных корине­бактерий выделяют чистую культуру и идентифицируют ее по ферментативным и токсигенным свойствам (табл. 25).

Таблица 25

Свойства дифтерийных и непатогенных коринебактерий

Название видов	Ферментация			Токси-ген-ность	Дополнительные признаки
	саха­розы	глю­козы	крах­мала		проба на цисти- назу	проба на уреазу	агглютина­ция с про­тиводифте­рийной сыворот­кой
Дифтерийные	_	+	+ гра-	+	++	—	+
коринебак-	из-		вис	или			изредка
терий	редка		или	—
	+		— ми-
			тис
Дифтероиды	+	+	—	—	—	—	—
					ИЛИ	ИЛИ
					+	+
Ложнодиф-
терийные						+
бактерии	—	—	—	—	—

Через 24—48 часов изучают колонии в чашках. На кро­вяном теллуритовом агаре дифтерийные коринебактерий ти­па гравис образуют относительно крупные, серовато-черные плоские, шероховатые колонии с радиальной исчерченно-стью (рис. 88, а) и зубчатым краем, напоминающие цве­ток маргаритки; колонии типа митис — мелкие, выпуклые, блестящие черные с гладкой поверхностью и ровными края­ми (рис. 88, б). На цистин-теллурит-сывороточной среде ко­лонии дифтерийных бактерий окружены темно-коричневым

239

ореолом. Для получения чистой культуры и определения ток-сигенности подозрительные колонии микроскопируют, пере­севают на свернутую сыворотку и в чашку с фосфатно-пеп-тонным агаром. Чистые культуры сеют в среды «пестрого» ряда (глюкоза, сахароза, крахмал), среду с цистином (про­ба Пизу), среду с мочевиной (проба на уреазу).

Одновременно ставят реакцию агглютинации на стекле с монотиповыми дифтерийными сыворотками I, II, HI, IV и VI серотипов. Агглютинирующие сыворотки разводят пред­варительно 1 : 25. На ос­новании реакции агглю­тинации устанавливают серологический тип.

При выделении ток-сигенных штаммов окончательный ответ может быть выдан че­рез 48 часов. Если об­наружены нетоксиген-ные штаммы, ответ вы­дают через 72 часа. В ответе указывают культуральный (гравис или митис) и серологи­ческий тип выделенно­го микроба, а также его токсигенность.

Определение токсигенности культур. В настоя­щее время широко ис­пользуют метод опре­деления токсигенности культур in vitro. Для этой цели в чашку Пет­ри наливают 12 мл рас­плавленного и охлаж­денного до 50° фосфат-но-пептонного агара. Фосфатно-пептонный агар, а) Приготовление мартенов­ского пептона. 250 г фарша свиных желудков заливают 1 л 1% водного раствора химически чистой соляной кислоты и ставят на 18—20 часов в термостат при 50°. После переваривания прогревают при 80° в течение 10 минут и отстаивают пептон 8—10 дней в прохладном месте, затем фильтруют, подогревают до 80°, подщелачивают 10% рас-

240

способ определения токсигенности позволяет на одной мор­ской свинке проверить 6 культур.

Подкожный метод. Морских свинок используют ве­сом 240—300 г. Контрольному животному за сутки до опы­та вводят 100 АЕ антитоксической сыворотки. В день ис­пытания подопытную и контрольную морских свинок зара­жают подкожно 0,5 мл взвеси исследуемой культуры (500 млн. и 1 млрд. в 1 мл). Если испытуемый штамм диф­терийной культуры токсигенный, то подопытные морские свинки гибнут на 2—5-е сутки. На вскрытии обнаруживают отек в месте введения культуры, экссудат в брюшной и груд­ной полости, гиперемию коркового слоя надпочечников. Контрольная морская свинка остается живой.

Реакция агглютинации относится к вспомогательным ме­тодам. Сыворотки больных или реконвалесцечтов разводят 3% раство­ром поваренной соли 1 : 100, 1 : 200, 1 :400, I : 800, 1 : 1600 и т. д. К раз­ведениям сыворотки добавляют специально приготовленный диагности-кум (дифтерийная культура, смытая 3% раствором NaCl и убитая до­бавлением 0,2% раствора формалина}. Реакцию считают положительной в разведении сыропотки не менее 1 : 100. Агглютинины ппотив дифтерий­ных коринебактерий обычно появляются в первые дни заболевания и че­рез 12—15 дней исчезают.

Реакцию Шика применяют для выявления антиток­сического иммунитета. С этой целью используют разведен­ный дифтерийный токсин, который в объеме 0,2 мл содер­жит 7*o Dim. Токсин вводят внутрикожно в среднюю часть ладонной поверхности предплечья. При наличии в 1 мл сы­воротки крови 7зо АЕ и выше реакция Шика бывает отри­цательной. Если антитоксины отсутствуют, на месте введе­ния токсина через 48—96 часов появляется краснота и ин­фильтрат.