Задания

1. Окраска и микроскопия мазков из культуры сибиреяз^ венных бацилл и препаратов-отпечатков из органов за- раженной мыши.

2. Демонстрация культуральных и ферментативных свойств сибиреязвенных бацилл.

3. Постановка реакции Асколи с целью выявления в ис­следуемом материале сибиреязвенного антигена.

4. Изучение препаратов, применяемых для лечения и про­филактики сибирской язвы.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА АНАЭРОБНЫХ ИНФЕКЦИЙ Лабораторная диагностика ботулизма

Возбудитель болезни — Clostridium botulinum. При боту­лизме — пищевой токсикоинфекции исследование произво­дят с целью выявления клостридий и их токсинов.

233

столбики сахарного агара они имеют вид пушинок или чече­вичек. Для идентификации чистую культуру сеют в среды «пестрого» ряда. Clostridium botulinurn обладает протеоли-тическими свойствами, разжижает желатину, сыворотку, яич­ный белок, переваривает мясо. Большинство штаммов сбра­живает глюкозу, маннит, мальтозу и другие углеводы с обра­зованием кислоты и газа. Изучают серологические свойства (ставят реакцию агглютинации с типовыми сыворотками) и проводят биологическую пробу с 4—5-дневной культурой в жидкой среде для выявления токсина. Ботулизм у мышей характеризуется проявлением общей слабости, парезом ко­нечностей, западением мышц живота, в связи с чем появ­ляется «осиная талия». У морских свинок наблюдается рез­кое расслабление мускулатуры, обнаруживается симптом «спины»: животное, положенное на спину, не может пере­вернуться и принять обычное положение.

Постановка биологической пробы. Одновре­менно с бактериологическим исследованием выявляют боту-линический токсин и определяют его тип. С этой целью ис­пользуют животных. Жидкие выделения больного, вытяжку из различных материалов смешивают с равными объемами антитоксических сывороток типа А, В, С, D, Е, предвари­тельно разведенных таким образом, чтобы в 1 мл находи­лось 50—100 АЕ. Смесь выдерживают в термостате при 30—35° в течение 30 минут и затем вводят каждую смесь 2 белым мышам по 1 мл внутрибрюшинно или морским свинкам подкожно по 6 мл. Двум животным вводят иссле­дуемый материал, разведенный изотоническим раствором, и двум другим такую же смесь, но прогретую в течение 30 минут при 100°. На 3—4-е сутки погибают те животные, которым введен негретый материал и смесь, где не произо­шла нейтрализация токсина. Не гибнут животные, получив­шие прогретый материал и смесь, нейтрализованную анти­токсином.

Метод обнаружения ботулинического ток­сина при помощи фагоцитарного показате-л я. Ботулинический токсин угнетает фагоцитарную актив­ность лейкоцитов, а специфические сыворотки, нейтрализуя токсин, устраняют это действие. Особенно рекомендуют этот метод для выявления токсина в крови (стр. 169).

Ускоренный метод определения ботулиниче­ского токсина в питьевой воде основан на адсорбции токси­на из воды тальком с последующим введением суспензии талька мышам.

235

Лабораторная диагностика столбняка

Возбудитель болезни — Clostridium tetani (см. рис. 79,ж)-. Клиническая картина столбняка настолько типична, что, как правило, бактериологическое исследование с целью диа­гностики заболевания является излишним. Для выявления возбудителя столбняка обычно подвергают исследованию перевязочный хирургический материал. С целью проверки

п равильности стерилизации исследуют различные пре­параты, предназначенные для парентерального введе­ния. Однако в редких слу­чаях, при неясном течении болезни, исследованию под­лежат гной, кровь, кусочки ткани, вырезанной из раны, после аутопсии — органы, ткани и кровь. Из тканей, густого гноя готовят взвеси в изотоническом растворе хлористого натрия. Вату и марлю разрезают ножница­ми и помещают в питатель­ные среды.

Б а кт е р и о с ко п и ч е с к о е исследование. Обна­ружение в мазках из материала, взятого от больного или трупа, тонких длинных грамположительных палочек с круг­лыми терминальными спорами (рис. 86) должно вызвать по­дозрение на столбнячную инфекцию. Однако по бактерио-скопическим данным делать заключение о присутствии столбнячных клостридий нельзя, так как в материале могут быть морфологически сходные микробы: Clostridium teta-nomorphum, Clostridium paratetanomorphum и др.

Бактериологическое исследование. Посев производят в среду накопления Китта — Тароцци и выдер­живают в термостате в течение 3—4 дней. Затем пересевают на плотные среды для получения отдельных колоний.

Предварительно делают мазки из среды Китта — Тароц­ци. При обнаружении большого количества посторонних микробов среду прогревают 20 минут при 80°. На кровяном сахарном агаре колонии Clostridium tetani имеют вид мел­ких паучков или росинок, а в столбике сахарного агара они напоминают комочки пщрсти или ваты.

236

Для исследования на дифтерию от больного берут дифте-ритические пленки или отделяемое пораженной слизистой оболочки зева, носа, иногда глаза, вульвы, уха, а также ко­жи, от носителей — отделяемое слизистой оболочки зева и носа. По требованию эпидемиолога исследуют молоко, мо­роженое, смывы с различных предметов (игрушек и др.).

Отделяемое слизистой оболочки зева следует брать нато­щак или через 2 часа после еды. До этого не рекомендуется применять дезинфицирующие вещества и антибиотики. Ма­териал из зева и носа берут двумя стерильными тампонами, после чего их помещают в пробирки и немедленно отправ­ляют в лабораторию. Если доставка занимает больше 3— 4 часов, используют тампоны, смоченные 5% раствором гли­церина в 0,85% растворе поваренной соли.

Бактериоскопическому исследованию под­вергается материал, взятый от больного, только по требова­нию врача. В этих случаях отделяемое слизистых оболочек или пленки снимают двумя тампонами: одни из них исполь­зуют для посева, а другой для приготовления мазков. Обыч­но готовят не менее двух мазков для окраски по Граму и уксуснокислым метиловым фиолетовым (см. рис. 13, а), по­следний можно заменить уксуснокислым толуидиновым си­ним или применить метод Нейссера (рис. 87). В мазках из пленки дифтерийные коринебактерий располагаются в виде единичных палочек, под углом подобно римской цифре V, реже скоплениями, напоминающими войлок или рассыпан­ные булавки. По Граму они окрашиваются положительно. При окраске уксуснокислым метиловым фиолетовым или толуидиновым синим отчетливо выявляются интенсивно ок­рашенные гранулы волютина. Ложнодифтерийные бактерии и дифтероиды располагаются параллельно частоколом и обычно лишены зерен волютина. При обнаружении типич­ных коринебактерий немедленно выдают предварительный результат: «Обнаружены дифтерийные коринебактерий, ис­следование продолжается».

Бактериологический метод. Посев материала производят в пробирки со свернутой сывороткой и в чашку Петри с теллуритовым кровяным агаром или цистин-теллу-рит-сывороточной средой для выделения чистой культуры.

Кровяно-теллуритовый агар. К 100 мл расплавленного и охлажденного до 50° 2—3% агара добавляют 5—10% дефибринирован-ной крови и 1 мл 2% раствора теллурита калия (КгТеО^. Среду тща­тельно перемешивают и разливают в стерильные чашки.

Цистин-теллурит-сывороточная среда. К 100 мл рас­плавленного и охлажденного до 60° мясо-пептонного агара добавляют по­-

238

После выделения чистой культуры ее идентифицируют и проверяют токсигенность. Clostridium tetani образует ток­син на 4—5-й день. Культуру в среде Китта — Тароцци центрифугируют; жидкость, освобожденную от микробов, вводят 2 белым мышам внутримышечно у корня хвоста в количестве 0,3—0,4 мл. Двум контрольным мышам вводят такое же количество исследуемой жидкости в смеси с анти­токсической противостолбнячной сывороткой, после выдер­живания в течение часа в термостате при 37°. За мышами наблюдают 4—5 суток. У подопытных животных через 2—4 дня появляются признаки столбняка: ригидность хво­ста и мышечных групп у места введения, быстро наступает смерть. Контрольные мыши остаются здоровыми.

Одновременно с посевом производят заражение белых мышей исследуемым материалом, у них возникает такая же клиническая картина столбняка, как при введении токсина.

Выделение чистой культуры Clostridium tetani по методу Файлдса. Для этой цели 3—4-су-точную культуру в среде накопления прогревают в течение 172 часов при 60°, затем сеют несколько капель в конденса­ционную воду свернутой сыворотки. Посев помещают в строго анаэробные условия. Через 1—2 суток появляется «ползучий» рост Clostridium tetani, подобно росту Proteus vulgaris при посеве по Шукевичу (см. стр. 217). Из верхней части берут культуру петлей и сеют снова в конденсацион­ную воду свернутой сыворотки. Такие пересевы повторяют до получения чистой культуры.