Задания

1. Демонстрация мазков из культуры Bordetella pertus­sis и характер роста коклюшных и паракоклюшных бакте­рий на различных питательных средах.

2. Демонстрация препаратов, применяющихся для профи? лактики коклюша.

Лабораторная диагностика сибирской язвы

Возбудителем сибирской язвы является Bacillus anthra-cis.

У больных в зависимости от клинической формы (кож­ная, легочная, кишечная) исследуют содержимое сибиреяз-венного; карбункула, мокроту, испражнения, при подозрении на сепсис — кровь.

От трупа берут кровь, кусочки внутренних органов. Ма­териал собирают в стерильные пробирки или флаконы. При

230

К роме того, ставят реакцию агглютинации с сыворотками больных. Для получения устойчивой взвеси бактерий их за­севают на казеиново-угольный агар, после смыва центрифу­гируют и используют надосадочную культуру. Взвесь бакте­рий можно готовить впрок, для чего добавляют 0,2% фор­малина и хранят в холодильнике. Стандарт антигена должен равняться 10 млрд. бактериальных тел. Реакцию аг­глютинации используют для выявления неясно вы­раженных форм заболева­ний. С такой же целью применяют реакцию свя­зывания комплемента, а также аллергическую про­бу, которую учитывают через 24 часа после вве­дения внутрикожно 0,1 мл антигена.

Возбудитель паракоклю­ша—паракоклюшная бак­терия (Bordetella paraper­tussis) , дифференциаль­ные признаки которой приводятся в табл. 24.

Диагноз мягкого шанк­ра устанавливают на ос­новании бактериоскопического исследования. Грануляцион­ную ткань берут из глубины язвы и осторожно, чтобы не на-

Необходимости транспортировки трупного материала в ла­бораторию кровь, селезеночную пульпу, костный мозг на­носят толстым слоем на предметные стекла для того, чтобы произошло развитие спор, обладающих высокой устойчи­востью к действию факто­ров внешней среды. Пос­ле высушивания стекла заворачивают в бумагу, помещают в ящик, опеча­тывают и отправляют в лабораторию нарочным. По эпидемиологическим показаниям изучают раз­личные объекты внешней среды.

Все исследования, свя­занные с выявлением культуры сибиреязвенных бацилл, проводят в спе­циальных лабораториях. Бактериоскопиче-ское исследование. Материал от больного и трупа микроскопируют. Наличие в мазках круп­ных грамположительных бацилл, складывающихся в цепочки, окруженных капсулой (см. рис. 79, б), дает возможность поста­вить предварительный

диагноз.

Бактериологиче­ское и биологиче­ское исследования. Для окончательного под­тверждения диагноза производят посев в пита­тельные среды и зараже-

»™Гс м^Мяс^То'Ко„„ьш агаром, а пробирки с мясо- сеют в чашки ^ 0—7 6) и помещают в термостат

„Г„Т7"ХГв^Ьр°еменно^Р (—о, заражав 2 белых мы-шей.

231

Через 20—24 часа изучают посевы и вскрывают погйоших мышей (гибель наступает через 24—48 часов после зараже­ния). В чашках обнаруживают характерные шероховатые колонии (голова медузы), края колоний имеют вид локонов (рис. 84, а). На бульоне появляется придонный рост, напо­минающий комочек ваты, среда остается прозрачной. Из осадка делают мазок и препарат «висячей» капли. В мазке бациллы располагаются длинными цепочками (рис. 84, б). Возбудитель сибирской язвы в отличие от подвижных поч­венных бацилл неподвижен. Для выделения чистой культу­ры типичные колонии сеют на скошенный агар.

При вскрытии трупа мыши отмечают признаки, характер­ные для сибиреязвенной инфекции: отек в месте введения материала, потемневшую несвернувшуюся кровь, кровоиз­лияния в клетчатке, рыхлую селезенку и плотную красную печень. В мазках из внутренних органов и крови обнару­живают типичные бациллы, окруженные капсулой. На ос­новании морфологических, тинкториальных, культуральных и биологических данных делают заключение об обнаруже­нии Вас. anthracis.

На 3-й день исследования производят идентификацию вы­деленной культуры, которую сеют в желатину, агар с кровью и заражают животных. Сибиреязвенные бациллы дают ха­рактерный рост в столбике желатины в виде стержня, от ко­торого отходят отростки, имеющие вид елочки, перевернутой вершиной вниз, в дальнейшем желатина разжижается; на агаре с кровью гемолиза не наблюдается.

Зараженные мыши погибают через 24—48 часов. В маз­ках из отечной жидкости, крови сердца и внутренних органов обнаруживаются бациллы, окруженные капсулой.

Для выявления капсул рекомендуется окрашивать мазки по Романовскому — Гимзе. Бациллы приобретают темно-си­ний цвет, а капсулы — розовый.

Изучение ферментативных и биологических свойств вы­деленной культуры позволяет дифференцировать сибиреяз­венные и почвенные бациллы.

Проба с пенициллином также дает возможность определять сибиреязвенные и почвенные бациллы. Прово­дится она следующим образом. В чашки с мясо-пептонным агаром, содержащем 0,5 и 0,05 ЕД/мл пенициллина, сеют 3-часовую бульонную культуру выделенного микроба. Через 3 часа пребывания в термостате делают мазки, микроскопи­руют и наблюдают появление «жемчужного ожерелья» — распад сибиреязвенных бацилл с образованием шаров. Поч­-

232

У больных берут рвотные массы, промывные воды, кровь, мочу, испражнения; от трупа — кровь, кусочки внутренних органов, содержимое желудка и кишечника, головной и спинной мозг. Исследуют также пищевые продукты, воду, почву.

Бактериологическое исследование. Перед посевом исследуемый материал предварительно растирают

Рис. 85. Культура и колонии Clostridium botulinurn.

в фарфоровой ступке. Сеют большие количества: 10—26 мл в 2 флакона со средой Китта — Тароцци. Один флакон про­гревают в водяной бане при 80° в течение 20 минут. Посевы помещают в термостат при температуре 30—35°. Остатки образцов исследуемого материала сохраняют в холодильни­ке до окончания анализа.

Через сутки пребывания посевов в термостате в среде на­копления отмечают помутнение и газообразование. Из сре­ды с наличием роста готовят мазки, окрашивают по Граму. Если обнаруживают типичные клостридий (рис. 85) со спо­рами (ракетки), делают пересев на плотные питательные среды для получения отдельных колоний. Выделение чистой культуры представляет трудности, так как клостридий боту­лизма часто находятся в прочных ассоциациях с некоторыми аэробными бактериями. Иногда только многократные рассе­вы дают возможность получить чистую культуру. Clostri­dium botulinurn на сахарном кровяном агаре образует не­правильной формы с гладкой или шероховатой поверх­ностью колонии, окруженные зоной гемолиза. В глубине

234

венные микробы сохраняют форму палочек, расположенных цепочками.

Серологический метод применяют в тех случаях, когда в материале не может быть обнаружен возбудитель. Для установления наличия сибиреязвенного антигена в разложившемся трупе, кожах (свежие, сухие, выделанные), кожаных изделиях, шкурах, мехе, шерсти и др. используют реакцию термопреципитации Асколи. Исследуемый мате­риал измельчают, заливают 10—20-кратным объемом изото­нического раствора, кипятят в течение 10—45 минут или выдерживают 16—20 часов при температуре 6—14°. Затем жидкость фильтруют и полученную прозрачную вытяжку наслаивают на преципитирующую сыворотку. Помутнение, которое появляется в течение 10 минут, в виде облачка в ме­сте соприкосновения двух жидкостей оценивается как поло­жительная реакция (см. рис. 69). Появление преципитата после 10 минут является неспецифической реакцией. Опыт обязательно сопровождается контролями вытяжки и преци-питирующей сыворотки (см. стр. 144).

Аллергический метод применяется для опреде­ления реактивности после перенесенного заболевания и пос­ле вакцинации. Аллерген-антраксин вводят внутрикожно в объеме 0,05 мл. Результат учитывается через 24—48 часов. Наличие гиперемии диаметром не менее 16 мм и инфильтра­та свидетельствуют о положительной реакции.