Феноловый фуксин Циля

Основной фуксин ... 1 г

Спирт 96° 10 мл

Фенол кристаллический 5 г

Глицерин _т Несколько капель

Вода дистиллированная 100 мл

Фуксин с кристаллами фенола и несколькими каплями глицерина расти­рают в ступке до гомогенной массы, добавляя малыми порциями спир1, затем, не прекращая помешивания, постепенно доливают дистиллирован­ную воду. Через 48 часов выдерживания при комнатной температуре краситель фильтруют. Срок хранения длительный.

Фуксин Пфейффера

Фуксин Циля 1 мл

Вода дистиллированная .... 9 мл

Следует пользоваться свежеприготовленным раствором.

Метиленовый синий (тиазин-тетраметил-тионин)

Насыщенный спиртовой раствор служит для приготовления красящих растворов.

Насыщенный спиртовой раствор

Метиленовый синий 10 г

Спирт 96° ....... . 100 мл

Метиленовый щелочной синий Леффлера

Насыщенный спиртовой раствор ме-

тиленового синего . . 30 мл

Едкий натр или едкое кали 1% . . 1 мл

Дистиллированная вода .... 100 мл

Водно-спиртовой раствор метиленового синего

Насыщенный спиртовой раствор ме- тиленового синего 10 мл

Дистиллированная вода .... МО мл Старые растворы этого красителя обладают лучшей красящей способ­ностью.

22

температуре, обрабатывают фиксаторами. К ним относится: I) метиловый спирт (фиксирует в течение 5 минут); 2) эти­ловый спирт (фиксирует в течение 10—15 минут); 3) смесь I Никифорова —равные объемы этилового спирта и эфира (фиксирует в течение 10—15 минут); 4) ацетон (фиксирует и течение 5 минут); 5) пары осмиевой кислоты и формалина (фиксирует в течение нескольких секунд.)

Анилиновые красители и их применение. Ок-рашивание препаратов производится анилиновыми краси­телями. По химической классификации они делятся на три группы: кислые, основные и нейтральные. Кислые краси­тели содержат в своих молекулах группы S0₃H, СООН и поэтому обладают свойствами кислот. Основные красители имеют в своем составе аминогруппы, которые наделяют их свойствами оснований. Нейтральные красители не содержат кислотных и аминогрупп и не имеют общих свойств с кис­лотами или основаниями. Основные красители, у которых красящая часть молекулы заряжена положительно, прояв­ляют наибольшую способность вступать в соединение с бак­териальной клеткой, несущей отрицательный электрический заряд.

При взаимодействии красителя с веществами микробной клетки, несущей противоположный заряд, образуются соли, обеспечивающие прочность окраски. Следовательно, окраска бактерий относится к сложным физико-химическим процес­сам. Различное отношение разных видов микробов к кра­сителям называется тинкториальным свойством.

Наиболее широкое применение имеют следующие краси­тели: 1) красные (фуксин основной, фуксин кислый, саф­ранин, нейтральный красный, конгорот), 2) синие (метиле-новый и толуидиновый синие, опалблау и др.), 3) фиолето­вые (генциан фиолетовый, метиловый фиолетовый, кристаллический фиолетовый), 4) желто-коричневые (везу-вин, хризоидин), 5) зеленые (бриллиантовый зеленый, ма­лахитовый зеленый — малахитгрюн).

Все применяемые красители имеют порошкообразный или кристаллический вид. Из таких красителей, как фуксин ос­новной, генциан фиолетовый, метиленовый синий, заранее готовят насыщенные спиртовые растворы (1 г красителя на 10 мл 96° спирта). Наибольшей стойкостью отличаются фе­ноловые растворы красителей. Из насыщенных спиртовых и феноловых растворов красителей готовят водно-спиртовые или водно-феноловые растворы, используемые для простых и сложных методов окраски. При простой окраске применяя-­

21

Техника простого метода окраски. При этом Методе окраски используют один краситель. Фуксином Пфейффера окрашивают _%1—2 минуты, щелочным метиле-новым синим Леффлера или водно-спиртовым раствором — 3—5 минут. Фиксированный препарат помещают мазком

Рис. 11. Основные формы бактерий.

а — микрококки; б — в — диплококки; г — стрептококки; д — стафилококки; _е _ тетракокки; ж - сарцины; з — палочковидные формы с закругленными концами; и — стрептобациллы с обрубленными концами; к — палочки с заост­ренными концами; л — вибрионы; м — спириллы.

вверх на подставку. На мазок пипеткой наносят раствор красителя так, чтобы он весь был покрыт им. После окрас­ки краситель сливают, препарат промывают водой и высу­шивают между листами фильтровальной бумаги. На сухой мазок наносят каплю иммерсионного масла и микроскопи-руют препарат иммерсионным объективом оптического мик­роскопа.

При изучении окрашенных препаратов бактерий из клас­са Schizomycetes порядка Eubacteriales хорошо различимы три основные формы (рис. 11): шаровидная (кокки), палоч­ковидная, или цилиндрическая (бактерии, бациллы и кло-

23

стридии), и извитая (вибрионы и спириллы). Большин­ство истинных бактерий являются одноклеточными орга­низмами.

Кокки. По форме кокки (лат. coccus — кокк, шарообраз­ный микроорганизм) могут быть сферическими, эллипсовид­ными, бобовидными и ланцетовидными. В зависимости от взаимного расположения их подразделяют на:

1. Микрококки (греч. micros — малый), расположение кле­ток беспорядочное (рис. 11, а); закономерности в их деле­нии не наблюдается.

2. Диплококки (греч. diploos —двойной) —клетки, соеди­ненные попарно, делятся они в одной плоскости (рис. 11, б, в). Диплококки могут иметь круглую, ланцетовидную или бо­бовидную форму.

3. Стрептококки (греч. streptos — витой)—цепочки раз­личной длины, образованные из клеток, которые делятся только в одной плоскости (рис. И, г).

4. Стафилококки (греч. staphyle — виноградная гроздь) — скопление особей, образуются за счет деления их в не­скольких плоскостях, напоминают виноградные гроздья (рис. И, д).

5. Тетракокки (греч. tetra — четыре)—кокки, располо­женные по 4 особи, делятся в двух взаимно перпендикуляр­ных плоскостях (рис. И, е).

6. Сарцины (лат. sarcio — связываю), делятся в трех вза­имно перпендикулярных плоскостях, напоминают пакеты или тюки, состоящие из 8 или 16 кокков (рис. 11, ж).

Некоторые виды микрококков, стафилококков, стрепто­кокков, диплококков относят к болезнетворным; сарцины, как правило, не вызывают заболеваний у человека и жи­вотных.

Палочки. Палочковидные, или цилиндрические, микроор­ганизмы бывают самой различной величины и формы (рис. 11, з—к). Виды, не образующие спор, получили назва­ние бактерий. К ним относятся: возбудители кишечных за­болеваний, коклюша, туляремии, чумы и др. Палочковид­ные формы, образующие споры, принадлежат к бацил­лам (возбудитель сибирской язвы) и клостридиям (возбуди­тели столбняка, ботулизма, газовой анаэробной инфек­ции и др.).

При микроскопической диагностике заболеваний учиты­вается целый ряд морфологических особенностей палочко­видных форм. Так, например, сибиреязвенные бациллы — длинные (рис. 11, и), столбнячные — длинные, тонкие, ту­-

24

По отношению к этой окраске все бактерии подразделяют на грамположительные и грамотрицательные.

Для окраски по Граму необходимо подготовить:

1. Феноловый раствор генциана фиолетового или водный раствор ме- тилового фиолетового.

Феноловый раствор генциана фиолетового:

Генциан фиолетовый 1 г

Спирт 96° 10 мл

Фенол кристаллический .... 2 г

Вода дистиллированная .... 100 мл

Генциан фиолетовый, метиловый фиолетовый и кристаллический фио­летовый принадлежат к красителям трифенилметанового ряда и их в одинаковой степени применяют для окраски по методу Грама. Метило­вый фиолетовый дает более стойкий раствор и применяется в следую­щей прописи:

Метиловый фиолетовый . . . . 0,2 г Вода дистиллированная .... 100 мл

2. Раствор Люголя (йодистый калий 2 г, йод кристаллический 1 г, вода дистиллированная 300 мл). Вначале готовят концентрированный раствор йодистого калия, в нем растворяют йод, затем прибавляют ди- стиллированную воду.

3. Спирт 96°.

4. Фуксин Пфейффера.

Техника окраски. 1. На фиксированный мазок нали­вают раствор метилового фиолетового на 1—2 минуты (по методу Синева мазок покрывают полоской фильтроваль­ной бумаги, заранее пропитанной раствором генциана фиолетового и высушенной, на бумагу наносят 2—3 кап­ли воды).

2. Мазок обрабатывают раствором Люголя 1 минуту и, не промывая его водой, сливают раствор.

3. Обесцвечивают спиртом 7г—1 минуту, стекло покачи­вают до исчезновения серо-фиолетовых струек красителя и промывают препарат водой.

4. Наливают фуксин Пфейффера, после 1—2 минут кра­ситель сливают, промывают водой, препарат высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют иммерсионной системой. Грамположительные микробы окрашиваются в фиолетовый, а грамотрицательные — в розово-красный цвет.

Для контроля свежеприготовленных растворов красителей или при окраске неизвестных бактерий следует на этом же стекле, рядом с изучаемым мазком, приготовить контроль­ный из смеси заведомо грамположительных и грамотрица-тельных бактерий.

26

ляремийные бактерии — нежные, короткие, чумные бакте­рии овоидной формы. У кишечной палочки (Escherichia coli) п многих других концы закруглены (рис. 11, з), у фузобак-герий — заострены (рис. 11, к). Определенное значение име­ет также взаимное расположение палочковидных форм: (большинство из них располагается беспорядочно, некоторые группируются по две (диплобактерии пневмонии), а неко­торые образуют короткие и длинные цепи — стрептобакте-рии и стрептобациллы (бактерии мягкого шанкра, бациллы сибирской язвы).

Извитые формы бактерий отличаются от палочковидных спиралевидным строением. Вибрионы (рис. 11, л) имеют вид изогнутых палочек-запятых и представляют собой ¹U часть завитка спирали. Эта форма характерна для холерного виб­риона (Vibrio cholerae).Спириллы (рис. 11, м) имеют не­сколько завитков. Один из представителей спирилл — Spiril­lum minus является болезнетворным и вызывает у человека содоку — болезнь укуса крыс.