Задания

1. Определение патогенных серотипов Е. coli в посевах испражнений больного ребенка: а) постановка реакции агглютинации на стекле со смесью сывороток типов 0111, 026, 055; б) демонстрация агглютинации гретой и негретой культуры Е. coli типа 055 специфической сыво­роткой.

2. Исследование крови с целью выделения гемокультуры. Посев культуры из желчного бульона на скошенный агар и в чашку со средой Эндо.

3. Постановка реакции Видаля.

4. Исследование посева испражнений: а) выбор бесцвет­ных колоний, изучение их макро- и микроскопически; б) пе­ресев бесцветных колоний на скошенный агар.

214

в желчный бульон. Рвотные массы, испражнения, секцион­ный материал, продукты, различные смывы сеют в чашки со средой Плоскирева и в среды накопления (желчный бульон и др.). Из последних через 6—10 часов делают пе­ресев на среду Плоскирева. Посевы выдерживают в тер­мостате при 37°, на следующий день их изучают, отбирают бесцветные колонии и пересевают на скошенный агар для получения чистой культуры. На 3-й день исследования вы­деленные чистые культуры идентифицируют: делают посевы в среды «пестрого» ряда и ставят ориентировочную реакцию агглютинации с неадсорбированными агглютинирующими сыворотками Salmonella typhimurium, Salmonella enteriti-dis, Salmonella cholerae suis, разведенными 1 :20. При по­ложительной реакции продолжают серологическое исследо­вание для определения типа, используя монорецепторные О- и Н-сыворотки соответствующей группы. В случае отри­цательной реакции агглютинации продолжают серологиче­ское исследование после учета ферментативных свойств.

На 4-й день исследования учитывают изменения сред «пестрого» ряда. Возбудители салмонеллезов, так же как салмонеллы паратифа В, не ферментируют лактозу и саха­розу, расщепляют глюкозу, маннит и мальтозу с образова­нием кислоты и газа, не образуют индола и за малым ис­ключением все виды образуют сероводород.

Такие штаммы агглютинируют групповыми сыворотками (А, В, С, D, Е и др.). Если получен положительный резуль­тат с одной из групповых сывороток, ставят реакцию агглю­тинации с адсорбированными О-сыворотками, характерными для данной группы, и Н-сыворотками для определения типа микроба. Например, изучаемая культура агглютинирова­лась групповой сывороткой В, следовательно, необходимо поставить реакцию с типичными для данной группы О-сыво­ротками 4 и 5. При положительном результате агглютина­ции используют монорецепторные Н-сыворотки. S. typhimu­rium агглютинируются сывороткой i (табл. 21).

Биологический метод. Салмонеллы пищевых токсикоинфекции в отличие от паратифозных В салмонелл патогенны для белых мышей. Этот признак используется для их дифференциации. В 1-й день исследования парал­лельно с посевом патологического материала и пищевых продуктов производят пероральное заражение белых мы­шей. Через 1—2 суток мыши погибают от септицемии. При вскрытии обнаруживают резко увеличенную селезенку, иногда и печень, а посев крови из сердца и материала из

216

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА САЛМОНЕЛЛЕЗОВ (ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ)

Среди пищевых отравлений, точнее пищевых токсикоин-фекций бактериального происхождения, преобладают от­равления, вызванные бактериями из рода Salmonella, вклю­чающего свыше 900 видов и типов. Однако при пищевых токсикоинфекциях чаще выделяется около 60 типов, основ­ными из них являются: Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis, Salmonella cholerae suis, Salmonella anatum.

У больного берут рвотные массы, промывные воды, ис­пражнения, кровь в первые часы заболевания для выделе­ния гемокультуры, а через 2 недели (обычно после выздо­ровления) — для обнаружения антител с целью выявления носителей (обслуживающий персонал пищевых объектов, детских учреждений)—фекалии после приема слабитель­ного.

От трупа объектами исследования могут быть содержи­мое желудка и кишечника, кровь из сердца, внутренние органы.

При пищевых токсикоинфекциях обязательно исследуют остатки пищи, продукты, из которых готовилась пища, сос-кобы со столов, разделочных досок, смывы с рук обслужи­вающего персонала и др.

Материал собирают в стерильные банки, пробирки, ко­торые заранее заготавливают и хранят для этих целей в лаборатории. При исследовании фекальные и рвотные мас­сы берут в количестве 50—100 мл, промывные воды— 100— 200 мл, мяса и мясных продуктов отбирают несколько кус­ков весом в 500 г; полужидкие и жидкие продукты (смета­на, молоко и др.) — 100—200 мл.

Все образцы отправляют в лабораторию упакованными и опечатанными. Целость упаковки отмечается в специаль­ном журнале. Перед исследованием материал, который не может быть посеян без предварительной обработки (фекаль­ные и рвотные массы густой консистенции, остатки пищи и др.), растирают в фарфоровых ступках и взвешивают в изотоническом растворе. При исследовании таких пище­вых продуктов, как мясо, колбаса, сыр, стерилизуют их поверхность, прикладывая раскаленный металлический шпатель, и вырезают пробы из глубины, затем помещают их в фарфоровую ступку, растирают со стерильным песком и добавляют изотонический раствор.

Бактериологическое исследование. Для вы­деления гемокультуры салмонелл производят посев крови

215

внутренних органов позволяет выделить культуры салмо­нелл.

Серологический метод исследования является ретроспективным. Для этой цели используют реакцию аг­глютинации, подобную реакции Видаля. Кровь у больного берут через одну и две недели после заболевания. Обычным способом отделяют сыворотку и ставят реакцию агглюти­нации с диагностикумами Salmonella typhimurium, Salmo­nella enteritidis, Salmonella cholerae suis и др. Сыворотку разводят 1 : 50, 1 : 100 и т. д. до 1 : 800. Пробирки помещают в термостат, через 2 часа извлекают и производят пред­варительный учет. Окончательно реакцию учитывают через сутки. Диагностическое значение имеет повышение титра антител при повторном испытании.

Пищевые отравления могут быть вызваны также ус­ловно патогенными микробами (Proteus vulgaris, Proteus morganii, E. coli и др.), стрептококками, шигеллами Зонне, ботулиническим и стафилококковым экзотоксинами.

Выделение Proteus vulgaris. Вытяжки из ма­териала, отобранного при пищевой токсикоинфекции, сеют по методу Шукевича в конденсационную воду скошенного агара, не прикасаясь к его поверхности, и в мясо-пептонный бульон. Посевы помещают в термостат при 37°. На следую­щий день изучают рост на средах. Если в исследуемых про­бах находилось значительное количество бактерий вульгар­ного протея, то на скошенном агаре появляется рост на всей его поверхности. В верхних участках обнаруживается чистая культура Proteus vulgaris. При наличии роста только в кон­денсационной воде делают пересев из среды накопления (бульона) снова таким же способом в конденсационную во­ду скошенного агара. Отсутствие «ползучего» роста на 2-й день позволяет выдать отрицательный ответ.

217

Для выделения кишечной палочки материал сеют на сре* ду Эндо и определяют серотипы, так же как при колиэнте-ритах.

Выделение стафилококка — возбудителя пищевых отрав­лений описано на стр. 182.

Исследование продуктов и материала от больного на при­сутствие ботулинического токсина и возбудителей ботулиз­ма описано на стр. 233. Обнаружение при пищевых отравле­ниях шигелл производится по методике, изложенной ниже.

Задания

1. Исследование гемо- и копрокультуры: а) определение чистоты выделенных культур; б) посев в среды «пестрого» ряда (лактозу, глюкозу, молоко, пептонную воду); в) по­становка ориентировочной реакции агглютинации с брюш­нотифозной, паратифозными А и В сыворотками, а затем развернутой реакции с сывороткой, давшей положительный результат в ориентировочном опыте.

2. Исследование остатков пищи, послужившей причиной отравления, на присутствие салмонелл.

3. Посев испражнений больного дизентерией в чашки со средой Плоскирева.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ДИЗЕНТЕРИИ

Дизентерия — инфекционное заболевание, вызываемое неподвижными, грамотрицательными бактериями из рода Shigella.

Отдельные виды шигелл отличаются друг от друга по био­логическим ферментативным свойствам и антигенной струк­туре (табл. 22). Типовая специфичность обусловлена разли­чием антигенов.

Исследуемым материалом для выделения возбудителей дизентерии служат испражнения больных (острой или хро­нической формой), реконвалесцентов, носителей. При хро­нической дизентерии исследуют кровь для обнаружения ан­тител. Шигеллы также могут быть обнаружены в смывах с рук, посуды и других предметов (игрушек, дверных ручек и др.). Условия взятия испражнений такие же, как при брюшным тифе и салмонеллезах. Из фекалий выбирают слизистые и гнойные комочки (без примеси крови), в кото­рых чаще находятся возбудители дизентерии. Посев реко-

218

На 3-й день изучают изменения на средах с углеводами. Культуры, расщепляющие лактозу с образованием кислоты и газа, из дальнейшего исследования исключают. Бактерии, ферментирующие только глюкозу с образованием кислоты и газа, подвергают дальнейшему изучению, так как среди них могут оказаться салмонеллы. Исследования для опре­деления вида салмонелл, вызвавших заболевание, подобное дизентерии, производится так же, как при токсикоинфекции салмонеллезного происхождения. Шигеллы ферментируют глюкозу с образованием кислоты без газа, поэтому все лак-тозоотрицательные штаммы, расщепляющие глюкозу без образования газа, изучают в отношении ферментативных и серологических свойств, подвижности (шигеллы непод­вижны).

Культуры со среды Ресселя или со скошенного агара сеют в среды «пестрого» ряда и ставят реакцию агглютинации с видовыми сыворотками вначале ориентировочную, а за­тем развернутую. Одновременно ставят реакцию агглюти­нации на стекле с набором дизентерийных адсорбированных сывороток. Целесообразно применять смеси сывороток про­тив преобладающих в данной местности видов и типов ши­гелл, например, со смесью типовых сывороток Флекснера, Бойда, с сывороткой Зонне. При положительной агглютина­ции смесью сывороток различных типов Флекснера и Бойда проводят реакцию на стекле с отдельными типами сы­вороток. На 4-й день учитывают изменения в средах «пестрого» ряда и результаты развернутой реакции аг­глютинации.

У дизентерийных больных иногда выделяются штаммы, не агглютинирующиеся специфическими сыворотками. В та­ких случаях следует использовать дополнительные методы исследования. В частности, изучают термостабильный ан­тиген. Для этого ставят реакцию агглютинации с кипяченой в течение 1 часа взвесью исследуемого микроба и учиты­вают ее с помощью агглютиноскопа. Кроме того, ставят про­бу на фаголизис выделенной культуры поливалентным ди­зентерийным фагом, положительный результат подтверж­дает принадлежность бактерий к роду шигелл.

В зависимости от полученных данных выдают ответ о выделении из материала типичных или измененных шигелл.

В настоящее время в связи с широким применением в те­рапии антибиотиков обязательно выявляют чувствитель­ность к ним возбудителей дизентерии.

220

мендуется производить непосредственно после взятия проб, и засеянные чашки немедленно доставлять в лабораторию; если это не представляется возможным, фекалии помещают в пробирки или флаконы с консервантом, однако этот способ

менее эффективен.

Для выявления носителей материал берут стеклянной трубкой диаметром до 5 мм и длиной около 15 см с тщатель­но оплавленными краями. Ее вводят в прямую кишку на глубину 5—10 см. Трубку можно заменить ватным тампо­ном.

Бактериологическое исследование. Испраж­нения сеют в чашку со средой Плоскирева и помещают в термостат при 37° на 18—24 часа. На 2-й день изучают мак­ро- и микроскопически бесцветные колонии и пересевают на скошенный агар или в 3 пробирки: скошенный агар, глюко­зу и лактозу. Последние 3 среды можно заменить средой Ресселя, которая представляет агар с 0,1% глюкозы, 1% лактозы и индикатором. Среду разливают в пробирки по 5 мл и после стерилизации скашивают таким образом, чтобы на 2—3 см от дна агар оставался в виде столбика. Посев производят уколом в столбик и штрихами по скошенной поверхности. Глюкоза в этой среде расщепляется только в анаэробных условиях (малое количество глюкозы), поэто­му микробы, ферментирующие глюкозу и не расщепляющие лактозы, изменяют цвет среды в столбике, оставляя неизме­ненной скошенную часть.

219

Исследование воды, молока и смывов с различных пред­метов на присутствие шигелл производят с использованием тех же методов, которые описаны выше.

Особенное значение при исследовании этих объектов име­ет реакция нарастания титра фага, которую ставят также для выявления шигелл в фекалиях больного. Используют в этой реакции индикаторные фаги и эталонные штаммы шигелл Флекснера, Зонне и Ньюкестл. Техника постановки реакции описана в разделе диагностики брюшного тифа. Слабо положительной реакцией считают увеличение титра фага в 3—5 раз ( + ), положительной в 5—7 раз (++) и _в 7—ю раз (+ + + ), резко положительной при увеличении титра свыше 10 раз ( + + + + )•

Обнаружение шигелл с помощью люминесцирующих анти­тел применяют при исследовании объектов, содержащих не­значительное количество возбудителей дизентерии.

Задания

1. Определение вида гемо- и копрокультуры, выделенных от больного брюшным тифом: а) изучение подвижности культур; б) учет изменений сред «пестрого» ряда; в) заклю­чение по проведенному исследованию.

2. Изучение посевов материала, послужившего причиной отравления: а) изучение макро- и микроскопически колоний бактерий, выросших на среде Плоскирева; б) проведение реакции агглютинации с монорецепторными О- и Н-сыво-ротками; в) вскрытие трупа белой мыши; г) заключение по проведенному исследованию.

3. Изучение посевов испражнений больного дизентерией на среде Плоскирева. Постановка реакции агглютинации с типоспецифическими сыворотками Флекснера типов III и V.