Лабораторная диагностика туляремии

Возбудитель туляремии — Francisella tularensis (рис. 80, б). Для лабораторной диагностики этого заболе­вания применяют аллергический, серологический и биоло­гический методы.

Аллергические и серологические реакции ставят в обыч­ных больничных условиях и микробиологических лаборато­риях. Обнаружение и выделение туляремийных бактерий производят в специальных лабораториях.

Аллергическая реакция считается наиболее ранним методом диагностики туляремии. Уже с 5-го дня от начала заболевания используют внутрикожную или накож­ную пробу с тулярином или туаллергеном (см. стр. 177).

Учет аллергических реакций производят в динамике че­рез 24—36—48 часов после ее постановки. Наличие выра­женного инфильтрата и гиперемии диаметром 0,5 см и бо­лее оценивается как положительная аллергическая реак­ция.

197

Интенсивность реакции обозначается плюсами: + (слабо положительная), ++ (ясно положительная), + + + и '+ + + + (резко положительная). Аллергическая проба дает положительный результат у людей, переболевших в прош­лом, и у привитых.

Серологические реакции. Реакцию агглютина­ции с сывороткой больных ставят в пробирках (разверну­тая), а кровянокапельную (ускоренная) —на предметном стекле.

Для развернутой реакции агглютинации кровь у больного берут из локтевой вены на 2-й неделе болезни (10—15-й день) в объеме 2—3 мл. Полученную сыворотку последова­тельно разводят изотоническим раствором хлористого нат­рия от 1 : 25 до 1 :400. В каждую пробирку с 0,5 мл разве­денной сыворотки добавляют 0,5 мл туляремийного диагно-стикума, в результате чего получают конечные разведения сыворотки от 1 : 50 до 1 : 800. Контроль сыворотки и диагно-стикума ставят как обычно (табл. 15).

Пробирки помещают на 2 часа в термостат. Предваритель­ный учет реакции производят после извлечения из термо­стата и окончательный — после 18—20-часового пребыва­ния при комнатной температуре.

Диагностическое значение имеет положительная реакция агглютинации в разведении 1 : 100 и выше.

Кровянокапельная реакция агглютинации применяется при массовых обследованиях. Кровь из пальца в виде толстой капли наносят на предметное стекло, в нее

198

­

дят подкожно, накожно, внутрибрюшйнйо и через рот. За­раженных животных, как и диагностический материал, со­держат в особых условиях и наблюдают в течение 6—

14 дней.

Если экспериментальные животные на протяжении 7—

15 дней не погибают, их убивают на 15—20-й день. При вскрытии трупов наблюдают патологоанатомические изме- нения, аналогичные изменениям при чуме. Кровь, костный мозг, участки внутренних органов, лимфатических узлов трупа животного сеют, втирая в поверхность одной из сред: желточной, глюкозо-цистинового агара, среды Емельяновой.

Желточная среда состоит из 3 частей яичных желтков и 2 частей изо­тонического раствора NaCl, рН среды 7—7,4. Ее разливают в стерильные пробирки по 5 мл и подвергают свертыванию 60 минут при 75°, на сле­дующий день прогревают 30 минут при 82—85°. Для контроля стериль­ности среду помещают в термостат на 2 суток. Пробирки после посева оставляют почти в горизонтальном положении для фиксации микробов на поверхности среды. Для предупреждения высыхания среды пробирки закрывают резиновыми колпачками (присутствие конденсата обязатель­но), посевы культивируют при 37°. На 3—5-й день, иногда на 20-й день и позже появляется рост в виде нежных мелких колоний (рис. 80, а), напоминающих шагреневую кожу.

Глюкозо-цистиновый агар с кровью. К мясо-пептонному расплавлен­ному агару добавляют 0,05—0,1% раствор цистина и 1% раствор глюко­зы, рН 7,2—7,4, кипятят несколько минут, охлаждают до 45—50° и до­бавляют 5—10% кроличьей дефибринированной крови. На глюкозо-ци-стиновой среде колонии туляремийных бактерий влажные, молочно-бело­го цвета. Используют также рыбно-дрожжевой агар, мясо-пептонный агар с мозговой, селезеночной, печеночной тканью и экстрактом из сердца.

Среда Емельяновой содержит 2,5 мл аутолизата дрожжей, 10 мл гид-ролизата желатины, 20 мл гидролизата рыбной муки, 1 г глюкозы, 0,1 г цистина, 0,5 г хлористого натрия, 2 г агара, 100 мл дистиллированной воды, рН 7,2—7,4.

В жидких питательных средах возбудитель туляремии ра­стет плохо, он хорошо размножается в желточном мешке 12-дневного куриного эмбриона.

Параллельно с посевом из того же материала приготов­ляют мазки-отпечатки и окрашивают их по Романовскому— Гимзе. Возбудители туляремии представляют собой очень мелкие (0,2—0,7 \х) кокковидные и палочковидные бактерии, в мазках из органов они располагаются внутриклеточно и в виде скоплений, образуют нежную капсулу. Выделенную чи­стую культуру идентифицируют по морфологическим, серо­логическим и биологическим свойствам.

Свежевыделенные патогенные бактерии туляремии биохи­мически мало активны. Они могут ферментировать глюкозу,

200

добавляют равный объем дистиллированной воды, чтобы вызвать гемолиз. Рядом с кровью помещают каплю туля­ремийного диагностикума. Обе капли смешивают стеклян­ной палочкой. Реакция агглютинации при положительном результате наступает немедленно.

У больных туляремией может наблюдаться положитель­ная реакция агглютинации с бруцеллезным диагностикумом, так как у туляремийных бактерий и у бруцелл имеются об­щие антигены. У лиц, перенесших заболевание туляремией, агглютинины в крови обнаруживаются в течение длитель­ного времени.

С целью ранней диагностики туляремии используют реак­цию связывания комплемента на холоде. Кровь у больного берут на 1-й неделе заболевания, в качестве антигена при­меняют диагностикум.

Биологический и бактериологический ме­тод. Выделение культуры возбудителя непосредственно от больного методом посева материала удается редко. Для это­го производят заражение 3—5 белых мышей или 2 морских свинок. В зависимости от клинических форм берут кровь больных, пунктат из бубона, соскоб из язвы, отделяемое конъюнктивы, налет из зева, мокроту и др. Материал вво-

199

выделять сероводород, при дальнейшем культивировании приобретают способность сбраживать мальтозу, маннозу и непостоянно другие углеводы. Для определения вида выде­ленной культуры ставят реакцию агглютинации со специ­фической агглютинирующей сывороткой. Патогенность куль­туры устанавливают заражением чувствительных жи­вотных.

Выделение культуры туляремийных бактерий из воды про­изводят заражением чувствительных животных осадком по­сле центрифугирования или фильтрования воды.

При исследовании пищевых продуктов их промывают в мясо-пептонном бульоне, затем бульон центрифугируют и осадок вводят животным.

Для обнаружения туляремийных бактерий у грызунов применяют такие же методы, как при исследованиях, опи­санных выше. Эти мероприятия проводят систематически по специальному плану в энзоотических очагах.