Лабораторная диагностика гонореи и бленнореи

Возбудителем этих заболеваний является гонококк (Neis­seria gonorrhoeae), морфологически сходный с менингокок­ком. Для диагностики применяют бактериоскопический, бак-

191

териологический и серологический методы. Используют так­же аллергическую реакцию.

Бактериоскопическое исследование являет» ся основным методом диагностики острой гонореи и бленно­реи. Гной из уретры берут следующим образом: наружное отверстие мочеиспускательного канала вытирают ватой, смоченной стерильным изотоническим раствором. Затем на­давливают пальцем на заднюю стенку уретры из глубины кнаружи (у женщин вводят указательный палец во влага­лище) и выдавливают каплю гноя. При воспалении проста­ты исследуют жидкость, которую получают в результате массажа. Материал из шейки матки извлекают тампоном после введения зеркала Куско. При бленнорее отделяемое конъюнктивы снимают петлей и распределяют на стекле. Ок­раску производят щелочным раствором метиленового сине­го и по Граму.

Гонококки в гное (рис. 79, г) имеют такое же строение и расположение, как и менингококки в мазке из спинномоз­говой жидкости. На основании микроскопии выдается ре­зультат об обнаружении гонококка.

В связи с тем что в исследуемом материале могут нахо­диться и другие грамотрицательные бактерии, сходные с гонококками, применяют прямой и косвенный методы имму-нофлюоресценции. При прямом методе неизвестные микро­организмы обрабатывают флюоресцирующими антителами против гонококков, при косвенном. — используют известные микроорганизмы (гонококки) и сыворотку больного; соеди­нение антитела с антигеном становится видимым при добав­лении флюоресцирующей сыворотки против глобулинов че­ловека.

Бактериологическое исследование произ­водят лишь в тех случаях, когда не обнаруживают гонокок­ка в мазках или находят нетипичные, измененные формы. Ввиду особой чувствительности гонококка к температурному фактору материал транспортировке не подлежит. Гонококк очень чувствителен к дезинфицирующим веществам, поэто­му необходимо за 1—2 дня до посева исключить применение больным дезинфицирующих веществ. Посев производят не­посредственно после взятия гноя в чашки с асцитическим агаром. Питательная среда должна быть нагрета в термо­стате. Через сутки инкубации при 37° появляются колонии гонококка, прозрачные, с ровными краями, выпуклые, сли­зистой консистенции. Колонии пересевают на скошенный асцитический агар, выделяют чистую культуру и идентифи-

192

ируют ее. Гонококк биохимически мало активен, ой рас-епляет только глюкозу с образованием кислоты. Агглюти-ация специфической сывороткой не всегда дает положи-ельные разультаты, так как гонококк имеет много типов, в сыворотке соответствующие агглютинины могут отсут-твовать.

Серологический метод применяют при хрониче-кой гонорее, когда у больного отсутствуют выделения и спользовать бактериоскопический и бактериологический метод не представляется возможным. С этой целью ставят еакцию связывания комплемента с сывороткой крови боль­ного. В качестве антигена используют гонококковую вак­цину или специальный антиген.

Аллергическая проба дает положительные резуль­таты не только у больных, но и у переболевших гонореей в прошлом. Аллерген представляет взвесь убитых гонококков.

Задания

1. Окраска по Граму и Леффлеру мазков из уретрального гноя больного гонореей.

2. Демонстрация окрашенных мазков с менингококками.

3. Демонстрация препаратов, используемых для диагно­стики, профилактики и терапии заболеваний, вызываемых кокками.

4. Демонстрация кокков, устойчивых и чувствительных к антибиотикам.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЧУМЫ, ТУЛЯРЕМИИ И БРУЦЕЛЛЕЗА

Чума, туляремия и бруцеллез-относятся к зоонозным ин­фекционным болезням. Материал, подозрительный на на­личие возбудителей этих заболеваний, поступает в специ­альные лаборатории, в которых соблюдается строгий режим работы, обеспечивающий личную и общественную профи­лактику.

Правила работы в специальной лаборатории. Перед вхо­дом в лабораторию все сотрудники снимают в гардеробной верхнюю одежду, а в следующей комнате с индивидуальны­ми шкафами снимают остальную одежду и белье, надевают пижаму, халат, косынку, носки и тапочки (комплект 1). При работе в секционной надевают противочумный костюм

193

(комплект 2): второй секционный халат, шлем, ватйо-мар-левую маску, резиновые перчатки, фартук и нарукавники. Для защиты глаз используют очки-консервы.

Противочумный костюм надевают в следующем порядке: 1) комбинезон, 2) носки, 3) сапоги, 4) шапочка, 5) шлем, 6) секционный халат, 7) маска (у крыльев носа заклады­вают тампоны), 8) очки, 9) перчатки, 10) полотенце, смо­ченное 3% раствором лизола, 11) клеенчатые передник и нарукавники (надевают при работе в секционной). По окон­чании работы руки в перчатках погружают в 5% раствор лизола на 2 минуты, таким же способом руки обрабатывают после снятия каждого предмета. Одежду снимают в об­ратной последовательности (за исключением перчаток, ко­торые снимают в последнюю очередь), складывают наруж­ной поверхностью внутрь и погружают в 5% раствор лизо­ла на 2 часа.

Очки помещают в 70° спирт, инструменты и шприцы ки­пятят 40 минут в лизоле. Все отработанные материалы и трупы животных сжигают или автоклавируют.

Лабораторная диагностика чумы

Возбудителем чумы является Pasteurella pestis. Мате­риал от больного берут в зависимости от клинической фор­мы чумы: пунктат из бубона (бубонная форма), отделяе­мое язвы (кожная форма), мокрота (легочная форма), кровь (септическая форма). Для изучения секционного ма­териала используют кровь, внутренние органы, содержимое лимфатических узлов. Исследованию подлежат также тру­пы грызунов, блохи, вода, пищевые продукты, воздух и дру­гие объекты. Взятие материала производится с соблюде­нием особых правил в полном противочумном костюме.

Для диагностических целей применяют бактериоскопиче-ский, бактериологический, биологический и серологический методы исследования.

Бактериоскопическое исследование. Из па­тологического материала готовят несколько мазков и фик­сируют их в смеси Никифорова.

Мазки окрашивают по Граму и параллельно — метилено­вый синим по Леффлеру (рис. 79, д). Обнаружение при бак­териоскопии грамотрицательных овоидной формы бактерий, окруженных нежной капсулой, окрашенных биполярно по Леффлеру, обязывает выдать предварительный результат с описанием морфологии найденных бактерий.

194

Бактериологическое исследование. Иссле-уемый материал сеют в соответствующие питательные сре-ы. Кровь больного в количестве 5—10 мл вносят в 100 мл ясо-пептонного бульона. Содержимое бубона, отделяемое язвы, мокроту и другой материал сеют в чашки с мясо-пеп-тонным агаром рН 7,2—7,3. С целью стимуляции роста чум­ных бактерий к мясо-пептонному агару прибавляют 0,1% крови кролика или лошади. На поверхность среды для по­давления чумного фага наносят и равномерно распределяют 0,1 мл антифаговой сыворотки. При исследовании материа­ла, загрязненного посторонней, гнилостной микрофлорой, для подавления ее к 100 мл мясо-пептонного агара добав­ляют 1 мл 2,5% сульфита натрия и 1 мл насыщенного спир­тового раствора генциана фиолетового, разведенного 1 : 100 дистиллированной водой. Посевы помещают в термостат при температуре 25—28°. Через 10—12 часов на чашках могут быть обнаружены колонии R-формы с компактным центром и ажурной периферией, напоминающие «кружевные платоч­ки». В бульоне через 24 часа образуется рыхлая пленка, от которой спускаются нити в виде «сталактитов».

Чистую культуру чумных пастерелл выделяют обычным способом и затем идентифицируют по морфологическим, культуральным, ферментативным, агглютинабильным, фа-голизабильным и биологическим свойствам.

Пастереллы чумы в ферментативном отношении очень активны. Они расщепляют с образованием кислоты глюкозу, левулезу, галактозу, ксилозу, маннит, иногда арабинозу, не­которые штаммы ферментируют глицерин, не расщепляют адонит, не разжижают желатину, не образуют индол, вос­станавливают нитраты в нитриты.

Для реакции агглютинации используют соматические и «капсульные» сыворотки. Соматические сыворотки дают групповую реакцию с возбудителем псевдотуберкулеза гры­зунов, «капсульные» отличаются большей специфичностью.

По указанным свойствам не всегда можно отличить чум­ные пастереллы от очень сходных с ними пастерелл ложного туберкулеза грызунов (Pasteurella pseudotuberculosis). Поэтому используют целый ряд других признаков, с по­мощью которых дифференцируют эти микроорганизмы (табл. 14).

Испытание выделенной культуры пастерелл чумы на фа-голизабильность производят на мясо-пептонном агаре обыч­ным методом (см. стр. 109), в жидких средах — путем до­бавления в 3-часовую бульонную культуру чумного фага в

195

количестве Vio объема культуры. Фаг разводят до титра и испытывают различные разведения.

Биологическое исследование проводят одно­временно с бактериоскопическим и бактериологическим ис­следованиями. Морских свинок или мышей заражают раз­личными способами: накожно, подкожно и внутрибрюшин-но. Загнивший материал от трупов животных наносят накожно в количестве 2—3 капель, для чего выбривают участок кожи и скарифицируют его, капли исследуемой жидкости втирают досуха плоской частью скальпеля. Кровь больного и взвесь выделенной чистой культуры вводят внут-рибрюшинно; мокроту, пунктат бубона — подкожно во внутреннюю поверхность бедра.

На подопытных животных не должно быть эктопаразитов. Зараженные морские свинки содержатся в высоких стек­лянных банках, завязанных двуслойной марлей, смоченной раствором лизола. Мышей также помещают в банки, кото­рые ставят в металлические сетки с железными крышками.

Животные, зараженные накожно, погибают на 5—7-й день. В целях сокращения сроков исследования одно из за­раженных животных убивают на 2—3-й день. Из крови и внутренних органов трупа выделяют культуру, которую идентифицируют описанным выше способом.

При вскрытии животных учитывают следующие патолого-анатомические изменения: множественные кровоизлияния на слизистых и серозных оболочках, воспаление лимфати­ческих узлов, наличие некротических очагов в селезенке,

196

реже в печени. В брюшной полости наблюдается вязкий экс­судат и перерождение паренхиматозных органов. В мазка.ч из внутренних органов крови и экссудата при положитель­ном результате обнаруживают большое количество грам-отрицательных, биполярно окрашенных бактерий, окружен­ных капсулой.

Серологический метод. Для диагностики чумы применяют реакцию термопреципитации, что особенно ра-щионально при исследовании разложившихся трупов грызу-)нов, у которых затруднено выделение чистой культуры бак­терий.

Исследование грызунов. Перед вскрытием тру-шы грызунов опускают на несколько минут в керосин для .дезинсекции, затем вскрывают их, изучают патологоанато-шические изменения, готовят мазки-отпечатки из внутрен­них органов и производят посевы с целью выделения чистой культуры. Биологическая проба обязательна. Если иссле­дуют большое количество грызунов, применяют групповую биологическую пробу. Морской свинке вводят взвесь из лимфатических узлов, селезенок 15—20 исследуемых трупов.

Наряду с указанными методами выявления возбудителя чумы используют различные ускоренные методы обнаруже­ния пастерелл чумы с помощью фагодиагностики.