Лабораторная диагностика стрептококковых болезней

Стрептококки (Streptococcus pyogenes), так же как и ста­филококки, вызывают гнойные поражения кожи, слизистых оболочек, других тканей и сепсис. Кроме того, они являют­ся возбудителями рожи и, по-видимому, играют определен­ную роль в этиологии скарлатины и ревматизма.

183

бульонную культуру выделенного стрептококка центрифу­гируют, осадок разводят в 0,5—1 мл изотонического рас­твора хлористого натрия. На предметном стекле смешивают каплю сыворотки с каплей испытуемой культуры. Большин­ство патогенных стрептококков относится к группе А. Из группы С патогенны для человека типы 7, 20 и 21, а из груп­пы G — тип 16 по Гриффитсу.

Исследование крови. Посев крови в сахарный бульон производится так же, как при стафилококковых за­болеваниях, у постели больного. Через 18—24 часа выдер­живания в термостате (2-й день исследования) при наличии стрептококка на дне флакона появляется хлопьевидный при­донный осадок и гемолиз. В мазках обнаруживаются длин­ные цепочки стрептококков. На основании микроскопии вы­дают предварительные данные об обнаружении стрепто­кокка. Для выявления гемотоксина делают пересев в чашку с кровяным агаром. Через сутки (3-й день исследования) появляются типичные мелкие колонии, окруженные зоной гемолиза, или зоной позеленения. Полученные данные поз­воляют сделать заключение о присутствии Streptococcus pyogenes.

Послеродовой сепсис может быть вызван анаэробными стрептококками Peptostreptococcus anaerobius, Peptostrep-tococcus putridus, которые обитают на слизистых оболочках половых путей. Для выделения этих кокков кровь сеют в среду Китта — Тароцци. В жидких средах некоторые штам­мы анаэробных стрептококков образуют газ.

При исследовании загрязненного материала для подавления роста воздушной флоры и стрептококков группы D применяется среда Гарро. На последней хорошо растут патогенные стрептококки. Среда Гарро представляет собой мясо-пептонный агар (рН 7,4), к которому добавля­ют 5% крови и на 100 мл 0,2 мл 0,1% водного раствора генциана фиоле­тового.

Для определения патогенных свойств стрептококка изу­чают токсинообразование, в частности наличие фибриноли-зина (стрептокиназа). Для опыта используют плазму крови человека. К 10 мл крови добавляют 1 мл 2% раствора ли­моннокислого натрия. После отстаивания отделяют неокра­шенную плазму, разводят ее 1 : 3, а затем добавляют 0,5 мл 18—20-часовой культуры испытуемого стрептококка и 0,5 мл 0,25% раствора хлористого кальция. Пробирки осторожно встряхивают и помещают в водяную баню при 42° на 20— 30 минут. В это время происходит образование сгустка фиб­рина. Пробирки оставляют на 20 минут в водяной бане. Ес-

185

ли культура стрептококка выделяет фибринолизин, сгусток растворяется в течение 20 минут.

В связи с тем что некоторые штаммы вызывают растворе­ние фибрина медленно, через 2 часа пробирки переносят из водяной бани в термостат и результаты учитывают на следующий день.

Для диагностики скарлатины, как правило, лабораторных исследований не применяют. В отдельных случаях произво­дят посев отделяемого слизистой оболочки зева и выделение различных типов стрептококков. При скарлатине чаще об­наруживают типы 1, 2, 3, 4 и 27.

Лабораторная диагностика ревматизма заключается в установлении повышения титра антистрептогиалуронидазы и анти-О-стрептолизина.

Для выявления анти-О-стрептолизина применяют стрептолизин, кон­центрированный и высушенный лиофильным методом. Активность его выражается числом рабочих доз в 1 мл разведенного препарата. В сыво­ротке больного определяют количество единиц анти-О-стрептолизина. Одна единица анти-О-стрептолизина представляет собой наименьшее количество сыворотки, которое нейтрализует две рабочие дозы О-стреп-толизина. Анти-О-стрептолизин находится в сыворотке здорового чело­века в количестве 250 единиц в 1 мл, при ревматизме— 1000 единиц в 1 мл.

Антистрептогиалуронидазу титруют, используя концентрированную и высушенную лиофильным методом гиалуронидазу, которая содержит известное количество рабочих доз в 1 мл разведенного препарата. Сыво­ротка, содержащая антигиалуронидазу, нейтрализует гиалуронидазу и гиалуроновая кислота образует сгусток в присутствии уксусной кислоты. Единицей антигиалуронидазы считают наименьшее количество сыворот­ки, нейтрализующей одну рабочую дозу гиалуронидазы.

Гемолитические стрептококки, выделяющие а- и (З-токси-ны, могут находиться наряду с патогенными стафилококка­ми в воздухе различных больничных помещений. Для вы­явления этих стрептококков посевы делают на среду Гарро. Оценка результатов исследования микрофлоры воздуха раз­личных помещений приведена на стр. 104.

При лабораторной диагностике заболеваний, вызванных стрептококками, необходимо дифференцировать последние с энтерококками, отличительными признаками которых яв­ляются: способность расти при температуре от 10 до 45°, устойчивость к высоким концентрациям поваренной соли, пенициллину, щелочной среде (рН 9,6). Энтерококки обна­руживаются при заболеваниях двенадцатиперстной кишки, желчного пузыря, мочевыводящих путей. Наличие их во внешней среде служит критерием фекального загрязнения воды, сточных вод и пищевых продуктов.

186

Непосредственный посев загрязненного материала (мо­крота, гной) обычно не дает положительного результата, так как присутствие сапрофитов, особенно гнилостных мик­робов, подавляет рост пневмококка. Гной и мокроту пред­варительно обрабатывают: выбирают гнойные комочки, растирают их в фарфоровой ступке, добавляя 1 мл изотони­ческого раствора и вводят внутрибрюшинно белым мышам. Мыши очень чувствительны к пневмококку, они погибают через 18—72 часа от пневмококковой септицемии. Труп мы­ши вскрывают и сеют кровь из сердца, материал внутрен­них органов и перитонеальную жидкость в чашку с кровя­ным агаром и в пробирку с сывороточным бульоном. На этих средах из крови сердца вырастает чистая культура пневмококка.

Для идентификации выделенного микроба из бульонной культуры отбирают в стерильную пробирку 1 мл и добав­ляют 0,5 мл бычьей желчи. Через 10—15 минут пребывания в термостате происходит полный лизис пневмококков. Конт­ролем является пробирка с бульонной культурой пневмо­кокка без желчи. Стрептококк, колонии которого сходны с колониями пневмококка, не лизируется желчью. При отсут­ствии лизиса производят посев в среды «пестрого» ряда. Пневмококк в отличие от стрептококка расщепляет инулин с образованием кислоты.

На основании проведенного исследования можно оконча­тельно определить вид выделенного микроба. Учитывается ланцетовидная форма диплококков, наличие капсулы в на-тивном материале, высокая вирулентность для белых мы­шей, растворение желчью и расщепление инулина.

В прошлые годы, когда для лечения больных пневмонией применялись противопневмококковые типоспецифические сыворотки (I, II и III типов), определение типов пневмокок­ков являлось необходимым. В настоящее время с исполь­зованием антибиотиков и сульфаниламидных препаратов тип устанавливают главным образом для научно-исследова­тельских целей.

Наиболее распространенными являются два метода определения типа пневмококка.

1. Метод Нейфельда. Из мокроты, только что взятой от больного или сохранявшейся в холодильнике не более 2 часов, берут 3 гнойных комочка и помещают каждый на покровное стекло, затем вносят равное количество неразведенной типовой сыворотки: на первое стекло — сыво­ротку I типа, на второе — сыворотку II типа и на третье — сыворотку III типа. К каждой капле добавляют по одной капле щелочного раство­ра метиленового синего, после чего препараты покрывают стеклами с

188

Задания

1. Бактериологическое исследование гноя: а) бактериоско­пия мазка из гноя, окрашенного по Граму; б) изучение ко­лоний стафилококка и стрептококка на кровяном агаре (по­сев гноя), приготовление из них мазков и окраска по Гра­му; в) пересев колоний стафилококка на скошенный агар и колоний стрептококка в сахарный бульон.

2. Бактериологическое исследование крови больного сеп­сисом: а) приготовление мазков из гемокультуры, окраска по Граму; б) пересев гемокультуры стрептококка с сахар ного бульона в чашку с кровяным агаром.