Реакция фагоцитоза

Фагоцитозом называется поглощение лейкоцитами и дру­гими клетками микробов или чужеродных частиц. В боль­шинстве случаев фагоцитарная реакция завершается пере­вариванием микробов —завершенный фагоцитоз. Однако возбудители туберкулеза, лепры, лейшманиоза, гонореи и др. не погибают, а размножаются и вызывают гибель лейко­цитов. Такой фагоцитоз называется незавершенным, при этом микробы разносятся подвижными фагоцитами из пер­вичного очага в органы и ткани. Вирусы и риккетсии, как внутриклеточные облигатные паразиты, также не обезвре­живаются фагоцитами.

Постановка опыта фагоцитоза. Белой мыши вводят внутрибрюшинно 2 мл стерильного мясо-пептонного бульона. Последний вызывает раздражение брюшины и массовый выход лейкоцитов в брюшную полость. Через 4 часа таким же путем вводят 1 мл 2-миллиардной взвеси культуры белого стафилококка. Через 10—15 минут брюш­ную стенку прокалывают пастеровской пипеткой и извле-­

167

кают перитонеальную жидкость, из которой готовят мазки, высушивают их на воздухе, фиксируют спиртом, окрашива­ют в течение 2—3 секунд водным раствором метиленового синего, предварительно разведенного водой в 10 раз, и про­мывают водой.

При микроскопии мазка можно обнаружить большое ко­личество лейкоцитов с поглощенными стафилококками, ко­торые окрашиваются более интенсивно и четко видны на фоне бледно-голубой цитоплазмы лейкоцитов.

Установлено, что фагоцитоз проявляется интенсивнее при участии антител — опсонинов (греч. opsono — приготовляю пищу). В нормальной сыворотке содержится небольшое ко­личество опсонинов, которые проявляют свое действие в присутствии комплемента. В иммунной сыворотке опсони­нов больше и их активность в меньшей степени зависит от комплемента. Опсонины иммунных сывороток называются также тропинами.

Определение опсонического индекса. В диа­гностике инфекционных болезней в прошлом использова­ли определение опсонического индекса, который представ­ляет собой отношение фагоцитарного числа иммунной сы­воротки к фагоцитарному числу нормальной сыворотки. Фагоцитарным показателем называется количество микро­бов, поглощенных одним нейтрофилом. Для определения его подсчитывают количество микробов в 100 нейтрофилах и делят это число на 100. В иммунной сыворотке содержит­ся больше опсонинов, чем в нормальной, следовательно, опсонический индекс выражается числом больше единицы.

В настоящее время для определения опсонизирующей активности иммунной сыворотки ставят опсоно-фагоцитар-ную пробу (табл. 13). В мазках подсчитывают 25 нейтро-

_-

^РабТкТ)?^ сибирской язвы (негативная

окрашенные метиле^ ^синим= ^г ~ гонококки,

вым синим; е - сальмоне^лГбоюгпнт«^ ти1?^^{ЛЫ ЧуМЫ}* ^окР^ашенные метилено^ ридии столбняка, о^р^ окрашенные по Граму; ^ - клост-

по Романовскому -^зТГЛ^

ревичу.

филов и в зависимости от количества поглощенных микро­бов каждым из них оценивают фагоцитоз и вычисляют циф­ровой показатель, как приведено в табл. 13.

Цифровой показатель равен в данном примере 52. Мак­симальный показатель выражается цифрой 75, если фагоци­тоз всех 25 лейкоцитов оценен тремя плюсами. Минималь­ный цифровой показатель равен 0, если фагоцитоз всех лейкоцитов оценен 0.

Опсоно-фагоцитарную пробу используют при диагности­ке бруцеллеза, сыпного тифа и других болезней. Выявле­ние повышения содержания опсонинов в сыворотке дает возможность судить об эффективности вакцинации или при­менения терапевтических препаратов. Ставят эту пробу сле­дующим образом. В небольшую пробирку наливают по­следовательно микропипеткой 0,05 мл 2% раствора лимон­нокислого натрия, 0,1 мл испытуемой крови и 0,05 мл 2-мил­лиардной взвеси живых или убитых микробов. Пробирку помещают на 30 минут в термостат при температуре 37°. После извлечения из термостата пробирку встряхивают и готовят мазки, которые фиксируют спиртом и окрашивают по Романовскому — Гимзе в течение 20—30 минут. Окра­шенные препараты микроскопируют и подсчитывают мик­робы, фагоцитированные 25 нейтрофилами.

Определение угнетения фагоцитар ной ак­тивности. Установлено, что ботулинический токсин по­давляет фагоцитарную активность лейкоцитов. Это свой­ство используют для обнаружения его в крови больных, в пищевых продуктах. Опыт проводят следующим образом: в пробирке смешивают 2 объема крови кролика с 1 объе­мом раствора лимоннокислого натрия, 1 объемом исследуе­мого материала и 1 объемом 2-миллиардной взвеси ста­филококков. После выдерживания в течение 20 минут в термостате готовят мазки, фиксируют и окрашивают азур-эозином. В мазках подсчитывают 50 лейкоцитов и погло­щенных ими кокков. После этого определяют фагоцитарное число — количество микробов, поглощенных в среднем од­ним лейкоцитом. Контролем являются мазки из смеси, в которой отсутствует исследуемый токсин. Если в материа­ле находится токсин, то фагоцитарное число в контрольном препарате всегда выше, чем в опытном.

При обработке исследуемого материала антиботулиниче-ской сывороткой токсин нейтрализуется и фагоцитарное чис­ло должно быть равно фагоцитарному числу в контрольном препарате.

Задания

1. Постановка опыта фагоцитоза на белых мышах.

2. Изучение незавершенного фагоцитоза в препаратах из отделяемого уретры больного гонореей.

3. Определение опсоно-фагоцитарной пробы сыворотки больного ангиной.

4. Определение угнетения фагоцитарной активности лей­коцитов ботулиническим токсином.