Получение диагностических сывороток

Иммунные диагностические сыворотки содержат специ­фические антитела по отношению к микробам и токсинам. Их получают из крови животных, подвергнутых гиперимму-

139

низации (многократные введения в нарастающих дозах уби­тых, живых, но ослабленных возбудителей, обезвреженных или нативных токсинов).

К диагностическим сывороткам относятся: 1) агглютини­рующие сыворотки, применяемые для определения вида и типа микробов (см. стр. 149), 2) преципитирующие сыворот­ки, предназначенные для выявления антигенов в исследуе­мом материале (см. стр. 144), 3) сыворотки, используемые в реакции связывания комплемента (см. стр. 161), 4) анти­вирусные сыворотки, употребляемые для нейтрализации ви­русов (см. стр. 142) и определения типов вируса гриппа в реакции торможения гемагглютинации.

Для приготовления диагностических сывороток гиперим­мунизируют кроликов, баранов, ослов. В качестве антигенов для иммунизации используют взвесь микробов, лизаты и солевые экстракты микробов, эритроциты барана и др. Ан­тигены вводят подкожно и внутривенно. После определен­ного цикла иммунизации у животных производят пробное кровопускание (2—3 мл) и определяют титр сыворотки. Ес­ли в сыворотке содержится достаточное количество антител, делают массивное кровопускание или тотальное обескровли­вание. После выдерживания крови в термостате и образо­вания сгустка сыворотку отделяют, добавляют 0,01% рас­твор хинозола или других консервирующих веществ, тит­руют, разливают в ампулы и контролируют в местной конт­рольной лаборатории.

В настоящее время выпускают сыворотки, обработанные флюорохромами, получившие название люминесцентных сы­вороток.

В микробиологической практике нашли широкое приме­нение реакции взаимодействия антигенов с иммунными сы­воротками. Эти реакции получили название серологических, так как для их постановки используют сыворотку (serum), содержащую антитела. В зависимости от характера антиге­на (бактериальные клетки, продукты их расщепления, токси­ны, вирусы), условий среды (наличие электролита) и при­сутствия комплемента проявление взаимодействия антигена с антителом различно. Так, реакция нейтрализации токсина антитоксином сопровожается выпадением флокулята; реак­ция агглютинации — склеиванием микробов или других клеток; реакция преципитации — осаждением антигена; ре­акция лизиса — растворением микробов или эритроцитов; реакция связывания комплемента — фиксацией комплемен­та комплексом антиген — антитело. Эти реакции использу­-

140

ются для диагностики инфекционных болезней, титрования лечебных сывороток и определения напряженности гумо­рального иммунитета.

Взаимодействие токсина с антитоксином

В результате воздействия на токсин специфической анти­токсической сывороткой происходит нейтрализация токсина. Эту реакцию широко применяют для определения силы анти-

Рис 68. Образование преципитата («стрел-усиков») в результате взаи­модействия токсина с антитоксином.

токсических сывороток (стр. 175). С диагностической целью ее используют при дифтерии, ботулизме, газовой анаэроб­ной инфекции и столбняке.

Большое практическое значение приобрела в последнее время реакция нейтрализации дифтерийного токсина анти­токсической дифтерийной сывороткой in vitro, которая по­зволяет выявить токсинообразование у дифтерийных бакте­рий, выделенных от больных и носителей. На плотной среде в результате взаимодействия токсина с антитокси­ном образуются так называемые стрелы преципитата (рис. 68).

Подробное описание этого опыта представлено в специ­альной микробиологии.

141

В результате взаимодействия свежего токсина с соответ­ствующим антитоксином наступает реакция преципитации. Методика постановки этой реакции изложена на стр. 240.

Совершенно иной механизм имеет реакция нейтрализации вирусов антителами иммунной сыворотки. Эту реакций) при­меняют для диагностики вирусных заболеваний.

Реакция нейтрализации основана на том, что вирусы в смеси со специфическими иммунными сыворотками инак-тивируются. В реакции нейтрализации используют два ком­понента: сыворотку больного и известный вирус или вирус, выделенный от больного, и известные антитела. Неразведен-ную сыворотку смешивают с возрастающими разведениями вируса или, наоборот, постоянную дозу вируса смешивают с различными разведениями сыворотки.

Сыворотку для обнаружения антител используют в раз­личные сроки в зависимости от особенностей иммунитета. При гриппе антитела, нейтрализующие вирус, заметно на­растают к 3—4-й неделе и количество их уменьшается к 6 месяцам. Обычно исследуют сыворотки, взятые в начале заболевания и в период реконвалесценции. Кровь берут до еды, отделенная сыворотка должна быть прозрачной. Хра­нение ее допускают в сухом и замороженном виде. Для ре­акции нейтрализации с одним вирусом необходимо иметь до 1,5 мл сыворотки.

Антиген получают из различных тканей, в зависимости от его вида, вирус энцефалита — из мозга зараженных мышей; вирус гриппа — из амниотической и аллантоисной жидкости зараженного куриного эмбриона. Вирусы сохраняют в замо­роженном состоянии при температуре —20—70°, с целью определения предельной активности их титруют.

Методика постановки реакции нейтрализации. Бе­рут 3 ряда стерильных пробирок: в первый разливают испытуемую сы­воротку, во второй — нормальную сыворотку соответствующего вида животного. Затем в пробирки добавляют равные объемы разных разве­дений вируса.

В третий ряд пробирок наливают различные разведения вируса. Со­держимое пробирок встряхивают и штативы помещают в термостат при температуре 37° на 1—2 часа или на 18 часов при температуре 2—4°, пос­ле чего смесь вводят восприимчивым животным (при диагностике энце­фалита белым мышам). Учет результатов реакции нейтрализации про­изводят по Риду — Менчу. Индекс нейтрализации представляет собой отношение дозы вируса в смеси с нормальной сывороткой, вызывающей смерть 50% мышей, к дозе, вызывающей ту же летальность, в смеси с иммунной сывороткой. Индекс нейтрализации выражает собой макси­мальное количество смертельных доз, которое нейтрализуется данной сывороткой, по сравнению с контрольным опытом, результат которого принимается за единицу.

142

Реакцию нейтрализации при диагностике гриппа ставят на хррионаллантоисной оболочке куриного эмбриона, при диагностике полиомиелита и других заболеваний — в куль­туре тканей. Заранее полученную смесь сыворотки и вируса переносят на хорионаллантоисную оболочку или в культуру ткани (и выявляют размножение вируса в аллантоисной жид­кости или по цитопатическому действию. Для наиболее быстрого обнаружения антител, нейтрализующих вирус, при­меняют, реакцию торможения гемагглютинации.

Задания

1. Постановка опыта нейтрализации дифтерийного токси­на антитоксином in vitro.

2. Иммунизация кролика с целью получения агглютини­рующей сыворотки.