Задания

1. Ознакомление с принципами культивирования тканей, используемых в вирусологии.

2. Демонстрация цитопатического действия вирусов.

3. Заражение куриных эмбрионов на хорионаллантоис- ную оболочку, в аллантоисную полость, амниотическую по- лость, желточный мешок.

92

ли, крупного рогатого скота, кролика, курицы. Клетки HeLa хорошо растут в человеческой и лошадиной сыворотке, предварительно прогре­тых 30 минут при 56° и профильтрованных через фильтр Зейтца.

Эмбриональный экстракт (куриный, коровий или челове­ческий) является стимулятором роста ткани и вызывает свертывание плазмы. Для этой цели к двум объемам плаз­мы добавляют один объем эмбрионального экстракта. Ку­риный эмбриональный экстракт готовят из 7—11-дневных зародышей. После удаления головы и кишечника тело поме­щают во флакон с бусами. При встряхивании флакона ткань гомогенизируют, затем разводят 1—2 мл солевого раствора и центрифугируют.

Синтетические питательные жидкости. В настоящее время наряду с естественными питательными жидкостями широкое применение приобретают синтетиче­ские среды. Общепринятой является среда № 199, которая поддерживает рост тканей в течение 3—4 недель. В состав этой среды входят 19 аминокислот, ряд витаминов, пурины и пентозы. Синтетические среды разводят солевыми раство­рами.

Полусинтетическая среда Игла содержит 12 аминокислот, 7 витаминов, солевой раствор и 5—10% сы­воротки человеческой крови. В этой среде успешно культи­вируют клетки HeLa, штамм лейкемических клеток и дру­гие.

Рост микробов, случайно попавших в питательные смеси, подавляют антибиотиками. Пенициллин и стрептомицин раз­водят солевым раствором, смешивают и вводят в питатель­ную жидкость из расчета 100—150 ЕД на 1 мл среды.

Условия культивирования тканей. Культивируют ткани при температуре 36—37° в сосудах (чаще в матрасах или пенициллиновых флаконах из нейтрального стекла), закры­тых резиновыми пробками, что обеспечивает сохранение уг­лекислого газа, поддерживающего нейтральную реакцию среды. Резиновые пробки не должны касаться питательной среды. Посуда и пробки, используемые для культивирования клеток, должны быть абсолютно чистыми.

Стеклянную посуду и пипетки стерилизуют в течение 17₂—2 часов горячим воздухом при 180°. Резиновые пробки, трубки, а также стеклянную посуду стерилизуют 1 ^!/г—2 часа в автоклаве при темпе­ратуре 134°.

Для заражения культуры ткани питательную среду из флакона удаляют и вносят от 0,1 до 0,2 мл исследуемого

91

Действие физических и химических факторов а микроорганизмы. Санитарно-бактериологическое исследование почвы, воды и воздуха

Действие физических и химических факторов на микроорганизмы

Физические, химические и биологические факторы внеш­ней среды могут оказывать различное влияние на микроор­ганизмы в зависимости от дозы и времени их воздействия.

Действие физических факторов. С целью полного уничто­жения микроорганизмов наиболее часто применяют высо­кую температуру (см. методы стерилизации). Высушивание в обычных условиях действует губительно на гонококки, ме­нингококки, холерный вибрион, вирус гриппа и др.

Высокие дозы излучения убивают большинство патоген­ных бактерий. К ним относятся прямые солнечные лучи, уль­трафиолетовые, лучи Рентгена, радия-и др. Ультрафиолето­вые лучи в диапазоне длины волны от 200 до 280 тр, обла­дают бактерицидным действием и используются для дезин­фекции воздуха в операционных, палатах родильных домов, больничных и лабораторных боксах, хирургических мате­риалов, инструментов и др. Наиболее широкое применение имеют два типа бактерицидных ламп: БУВ-15 и БУВ-30, отличающихся по мощности и длине трубки. К действию ионизирующих излучений микробы значительно устойчивее других живых организмов.

Ультразвуковые волны с частотой колебаний 20 000 герц в секунду и больше являются бактерицидными. Ультразвук используют для приготовления вакцин, стерилизации кон­сервов и др.

Аэроионы, заряженные отрицательно, убивают бактерии в концентрациях (5- 10⁴ в 1 см³ воздуха), аэроионы, несу­щие положительный заряд, задерживают их рост только в больших концентрациях.

Действие химических веществ на микроорганизмы. Хими­ческие вещества в бактерицидных дозах используют как дез­инфицирующие средства. К ним принадлежат мыла, фенол, крезол и их производные, красители, соли тяжелых метал­лов, различные окислители, формальдегид и др. Сублеталь­ные дозы этих веществ могут являться одними из факторов изменчивости, а микродозы — стимуляторами роста. Для ис­пытания эффективности действия дезинфицирующих ве­-

93

ществ, а также контроля заключительной и текущей дезин­фекции применяют бактериальные тесты.

Приготовление бактериальных тестов производят следующим обра­зом: выстиранная белая хлопчатобумажная ткань обрабатывается спир­том в течение 30 минут. Ткань, обеззараженную таким образом, пропо­ласкивают, сушат, проглаживают, разрезают на правильные прямо­угольники длиной в 1 см, шириной 0,5 см, укладывают по 20—30 штук в чашки Петри и стерилизуют.

Тесты заражают 2-миллиардной микробной взвесью, для чего исполь­зуют смывы односуточной агаровой культуры стафилококка, Е. coli и ан-тракоида (с большим содержанием спор). Стерильные кусочки ткани погружают в микробную взвесь на 20—25 минут, после этого извлекают стерильным пинцетом, просушивают между листами стерильной филь­тровальной бумаги, а затем 15—20 минут в термостате.

Тесты помещают в пробирки, содержащие 5 мл 5% раствора фенола или 5% раствора лизола, или 10% взвесь хлорной извести, и выдержи­вают от 5 минут до часа. После этого их дважды промывают в стериаль-ной воде, погружают в пробирку с питательным бульоном и ставят в термостат (для стафилококка и Е. coli на 6—8 дней, для антракоида — на 21 день). Помутневший бульон высевают на питательный агар. Для каждой экспозиции используют не менее 3 тестов. Контрольные тесты не обрабатываются дезинфицирующими веществами.

Действие биологических факторов см. стр.110.