Выделение чистых культур аэробных бактерий

Бактериологическое исследование включает: 1) посев ис­следуемого материала в питательные среды, 2)-выделение чистой культуры и 3) идентификацию \ т. е. определение вида выделенной культуры.

При бактериологическом исследовании выделений боль­ного, а также других материалов возбудитель заболевания, как правило, находится в числе других, чаще сапрофитных микроорганизмов. Выделение чистой культуры возбудителя заболевания является основной задачей микробиолога, та­кая культура должна состоять только из одного вида мик­роорганизмов, который определяется по совокупности его свойств. Изолирование чистой культуры бактерий произво­дят в течение нескольких дней.

Выделение чистой культуры бактерий (1-й день). Изуча­емый материал микроскопируют (в некоторых случаях мик­роскопия исключается), небольшое количество его перено­сят на плотные питательные среды в чашках Петри и рас­пределяют так, чтобы клетки бактерий были удалены друг от друга. В результате размножения их образуются колонии-скопления особей одного вида, развившиеся из отдельных клеток. Мясо-пептонный агар разливают в чашки следую­щим образом: флакон с расплавленным агаром берут в пра­вую руку, левой рукой вынимают пробку, обжигают гор­лышко флакона, большим и указательным пальцами левой руки приподнимают слегка крышку чашки и вводят гор-

Рис. 47. Розлив питательной среды в чашку.

лышко флакона или пробирку под крышку чашки (не ка­саясь ее краев) (рис. 47). Питательную среду наливают в количестве 15—20 мл, быстро выводят горлышко флакона из чашки и закрывают ее крышкой. Чашку слегка покачи­вают для равномерного распределения среды и оставляют на месте до застывания. Затем переносят ее в термостат, поворачивают вверх дном, снимают крышку и подсушивают

Рис. 48. Посев шпателем п« .ашку с питательной средой.

в таком виде 15—20 минут. Посев материала для выделе­ния чистой культуры бактерий производят петлей или шпа­телем.

Посев шпателем. Шпатель готовят из стеклянных палочек толщиной 4—5 мм, согнутых в виде треугольника (см. рис. 8, 3), их заранее заворачивают в бумагу и стери­лизуют в печи Пастера. Одну петлю (каплю) исследуемой жидкости или взвеси наносят в центр чашки со средой, рас­пределяют шпателем на небольшом участке, а затем круго­выми движениями по всей поверхности. Во время посева крышка поддерживается левой рукой и чашка остается слег­ка открытой (рис. 48). Шпатель из первой переносят во вто­рую, а затем в третью чашку и такими же движениями рас­пределяют оставшийся на нем материал. После окончания посева шпатель погружают в банку с дезинфицирующим ра-

74

створом. Чашку надписывают на дне и ставят вверх дном в термостат с тем, чтобы конденсационная вода, скопляю­щаяся на внутренней поверхности крышки, не попадала на

Рис. 49. Термостат.

поверхность посева и не размывала образующиеся колонии. Таким способом производят посев гноя, испражнений, пи­щевых продуктов и др.

Посев петлей. Исследуемую жидкость набирают пет­лей и, не вынимая ее из пробирки, стряхивают излишнее ко­личество. Чашку с мясо-пептонным агаром помещают на столе вверх дном. Дно чашки берут и держат левой рукой вертикально, материал растирают петлей в трех участках. Петлю держат свободно большим и указательным паль­цами правой руки, ближе к концу петледержателя и лег­кими движениями, не повреждая поверхности среды, нано­сят, отрывая друг от друга, параллельные штрихи на рассто­янии около 0,5 см. Посевы помещают в термостат.

Для выращивания бактерий в питательных средах исполь­зуют термостат (рис. 49) — специальный шкаф. Он имеет двойные стенки, между ними находится воздух или вода, 76

76

75

подогреваемые электрической энергией или другим источни-| ом тепла. Постоянная температура поддерживается термо­регулятором (рис. 50), который может быть подушечным, би­металлическим, ртутным. В производственных лаборатори­ях, изготовляющих бактериальные препараты (вакцины, сы-иоротки и др.), оборудованы термостаты-комнаты.

Рис. 50. Терморегулятор биметаллический.

Существенной принадлежностью бактериологической ла­боратории является холодильник. В зависимости от характе­ра работы можно использовать холодильники большего или меньшего объема. В них при температуре +4—5° сохраняют музейные культуры, сыворотки крови больных, некоторые питательные среды и бактериальные препараты. Для сохра­нения вирусов имеются специальные холодильники с темпе­ратурой до —70°.