Культивирование микроорганизмов. Методы посева и выделения чистых культур аэробных бактерий

Культивирование микроорганизмов на питательных сре­дах производят различными методами. Выбор метода вы­ращивания микробов зависит главным образом от типа их питания и дыхания. Микробы одного вида, полученные на питательных средах, называются чистыми культурами, а совокупность особей, происходящих из одной клетки, полу­чила название клона. Для посева бактерий используют плот­ные и жидкие питательные среды.

Методы посева чистых культур аэробных бактерий

Посев на плотные и жидкие питательные среды. Посев на скошенный агар: 1) пробирку с чистой культурой бактерий и пробирку со стерильной незасеянной средой бе­рут в левую руку в наклонном положении так, чтобы про-

Рис. 45. Посев культуры бактериологической петлей из одной пробирки в другую.

бирка с культурой была первой по отношению работающе-г® и края их находились на одном уровне (рис.45); 2) в пра­вую руку, как писчее перо, берут петлю и в вертикальном положении прокаливают в пламени горелки; 3) пробки из пробирок вынимают одновременно, зажимают их между ми­зинцем и ладонью и держат в таком положении во время посева. Края пробирок приближают к пламени спиртовки;

72

б) Среду Левина готовят из сухого порошка анало- гично среде Эндо. При необходимости она может быть при- готовлена ex tempore. К 100 мл расплавленного мясо-пеп- тонного агара с 2 г лактозы добавляют 2 мл 0,5% водного раствора метиленового синего, 1,5 мл 2% водного раствора эозина (растворы красителей готовят заранее, стерилизуют текучим паром) и 0,2 г двуосновного фосфорнокислого ка- лия (К2НРО4), тщательно перемешивают и разливают по чашкам. Среда имеет темно-лиловый цвет. Колонии Е. coli окрашиваются в сине-черный цвет, бактерии, не ферменти- рующие лактозу, образуют бесцветные колонии. Данную среду, как и среду Эндо, используют в настоящее время главным образом для выделения Е. coli.

в) Среда Плоскирева содержит сухой питательный агар с лактозой, набор различных буферных и других со- лей, соли желчных кислот, бриллиантовый зеленый и инди- катор нейтральный красный. Е. coli растет на этой среде скудно, в виде колоний розового цвета. Ее жизнедеятель- ность подавляется солями желчных кислот, бриллиантовым зеленым и тетратионатом натрия, который образуется при взаимодействии входящих в состав среды гипосульфита и иода. Микробы воздуха на этой среде не растут (чашки в открытом виде подсушивают на воздухе в течение часа). Патогенные бактерии (возбудители брюшного тифа, пара- тифов А и В, дизентерии) на среде Плоскирева образуют бесцветные нежные колонии.

Гемолитическую способность микробов изучают на кро­вяном агаре и кровяном бульоне (см.стр. 67).

Изучение редуцирующей способности производят в спе­циальных средах Ротбергера и др. (см. стр. 83).

Задания

1. Приготовление мясо-пептонного бульона и мясо-пеп­тонного агара.

2. Приготовление кровяного агара, свернутой сыворотки, сахарного и сывороточного бульона.

3. Ознакомление с методами приготовления желчного бульона, пептонной воды.

4. Освоение методов стерилизации и демонстрация аппа­ратуры (автоклав, аппарат Коха, печь Пастера, свертыва-тель Коха). Подготовка лабораторной посуды для стери­лизации.

71

4) прокаленную петлю вводят в пробирку с культурой, ох- аждают и прикасаются к поверхности культуры бактерий; пробирки отодвигают от пламени, предохраняя материал от сжигания, петлю переносят в пробирку с незасеянной средой, опускают, не доходя до границы конденсационной воды, и зигзагообразными движениями распределяют материал по «скошенной поверхности ;агара; 5) петлю извлека- ют, обжигают края проби- рок, вставляют в них од- новременно обе пробирки, проведенные через пламя, и затем стерилизуют пет- лю, пробирки надписыва- ют и ставят в штатив. \ Посев уколом. При посеве уколом пробирку с агаром или желатиной (среда разлита в виде столбика) держат так же, как пробирку со скошен- ным агаром (рис.46).Бак- териологической иглой из платиновой или нихромо- вой проволоки (см. рис. 8, 2) прокалывают _{рис 46 Посев м в агар стол}. питательную среду до дна. биком.

Посев уколом в столбик применяют для выращи­вания анаэробных микробов, выявления протеолитических свойств, а также с целью длительного хранения культур.

Для пересева из жидкой среды в жидкую пользуются петлей, стерильной градуированной или пастеровской пи­петками. Пробирки держат под небольшим углом; мате­риал, взятый петлей, растирают на стенке и слегка встря­хивают пробирку.

При посеве градуированными пипетками их проводят через пламя, опускают в пробирку и насасывают определенное количество материала, затем зажимают от­верстие указательным пальцем правой руки и переносят в питательную среду, выдувают содержимое пипетки, после чего помещают ее в дезинфицирующий раствор.

Запаянный капилляр пастеровской пипетки перед взя­тием материала отламывают обожженным пинцетом. Эти

73

пипетки готовят из стеклянных трубок. Середину их после накаливания в пламени горелки растягивают и концы ка­пилляров запаивают. положении во время посева. Края пробирок приближают к пламени спиртовки;

Глубинное выращивание бактерий использует­ся в производстве вакцин. С целью получения достаточного количества бактериальной массы микробы выращивают при непрерывном аэрировании в реакторах большой емкости. Пропеллер-мешалка обеспечивает значительное насыщение среды кислородом. Наиболее эффективной является турбин­ная мешалка, вращающаяся.со скоростью 150—250 об/мин.

В настоящее время предусматривается автоматическое ре­гулирование температуры и газового режима реакторов. Контроль за постоянством рН питательной среды произво­дится электронным потенциометром.