Определение Rh- фактора

Экспресс–метод определения Rh-фактора стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева.

Методика проведения: исследование проводят в специальных центрифужных пробирках объемом не менее 10 мл. на дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы АВ(IV), содержащую 33% раствор полиглюкина. Затем в нее добавляют одну каплю исследуемой крови или эритроцитов. Круговым вращением пробирки содержимое размазывают по её внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает её крупно лепестковой. Агглютинация , как правило, наступает на стенках пробирки в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса “антиген – антитело” и четкой агглютинации наблюдать следует не менее 3 минут. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора натрия хлорида и перемешивают путем одно – двукратного перевертывания пробирки (без взбалтывания!)

Трактовка результата: наличие агглютинации указывают на резус – положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации свидетельствует о резус – отрицательной принадлежности исследуемой крови.

Экспресс – метод определения Rh – фактора на плоскости без подогрева.

Методика проведения. На белом планшете со смачиваемой поверхностью пишут фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуется. На левом краю пластинки делают надпись «сыворотка антирезус», на правом – «контрольная сыворотка». Последней служит разведенная альбумином сыворотка группы АВ(IV), не содержащая антител антирезус. Соответственно надписям на планшете помещают по 1-2 капли (0,05 – 0,1 мл.) реактива антирезус и контрольной сыворотки. К обеим каплям добавляют исследуемые эритроциты. Кровь размешивают с реактивом сухой стеклянной палочкой, размазывая по пластинке до образования капли диаметром 1,5 см. Пластинку слегка покачивают. Через 3-4 минуты для снятия возможной неспецифической агглютинации к каждой капле добавляют 5-6 капель физиологического раствора. Затем пластинку покачивают в течение 5 минут.

Оценка результата: результат оценивают по наличию или отсутствию агглютинации вооруженным глазом. Наличие хорошо выраженной агглютинации в капле слева указывает на резус – положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации в этой капле (гомогенная окраска) говорит о резус – отрицательной принадлежности исследуемой крови. Результат считается истинным лишь только при отсутствии признаков агглютинации в правой (контрольной) капле.

Ошибки при определении групп крови по системам

АВО и Rh – фактора:

1.Недостаточная подготовленность рабочего места:

• Слабая освещенность;

• Неблагоприятный температурный режим (менее 15^О С и более 25^О С) – велика опасность выявления ложной агглютинации, обусловленной “ холодовым ” склеиванием эритроцитов или быстрым высыханием исследуемой капли с образованием “монетных столбиков” эритроцитов;

• Применение нестандартных пластин с низкой смачиваемой поверхностью;

• Недостаточное количество палочек, пипеток, реагентов.

2.Небрежность в выполнении работы:

• Отсутствие маркировки и нарушение порядка нанесения стандартных сывороток, эритроцитов, цоликлонов;

• Нанесение различных реагентов одной пипеткой или смешивание различных капель одной палочкой;

• Нарушение пропорции “реагент – кровь”;

• При определении АВО группы по стандартным сывороткам не добавление физиологического раствора в капли , где наступила агглютинация, или добавление в лунки, где она еще не наступила, не проведение реакции с сывороткой группы АВ(IV).

3.Изменение активности или специфичности стандартных реагентов:

• Изготовителем не обеспечены необходимые параметры;

• Нарушение условий хранения реагентов (несоответствие температурного режима, нарушение герметичности, инфицирование);

• Использование реагентов с истекшим сроком годности.